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La senescencia constituye la etapa final del desarrollo ontogénico de las hojas, que se caracteriza por el desmantelamiento altamente organizado de componentes celulares, y la degradación masiva de sus macromoléculas (proteínas, ARN, ADN, lípidos). Este síndrome tiene un impacto positivo para la planta, dado que posibilita la exportación de nutrientes, principalmente N, de las hojas senescentes y su re-utilización en otros órganos. A nivel celular, los cloroplastos albergan la mayor parte de las proteínas foliares, y su desensamblado es central y diagnóstico del progreso de la senescencia. Es por esto que la mayor parte de los estudios en el tema se han enfocado en los cloroplastos, y los eventos extra-plastidiales que acompañan estos cambios son menos conocidos. Menos aún se conoce qué ocurre fuera de la membrana plasmática en las células senescentes. El apoplasto representa un compartimiento “extracelular”, externo, limitado por la membrana plasmática, que incluye las paredes celulares, los espacios intercelulares y el fluido apoplástico (FA). La composición (iones, macromoléculas, etc) de este espacio varía en forma dinámica contribuyendo al desarrollo de la planta y la adaptación a las condiciones ambientales. En el apoplasto tiene lugar la percepción y las primeras respuestas a varios estreses, que han sido estudiadas y caracterizadas en detalle tanto para estreses bióticos y abióticos. Dado que el apoplasto es escenario de procesos fisiológicos como la absorción y el transporte de azúcares y aminoácidos, la comunicación intercelular, la señalización sistémica, etc, es altamente probable que en este compartimiento tengan lugar cambios funcionales vinculados con la senescencia. En este trabajo se examinaron cambios en parámetros fisiológicos del apoplasto como compartimiento, y variaciones en la composición del fluido apoplástico a lo largo de la senescencia en Arabidopsis thaliana, a fin de profundizar el conocimiento sobre la dinámica de este espacio, y su papel en la degradación y removilización de nitrógeno durante la senescencia. En el capítulo 3 se describen las técnicas utilizadas para la obtención y análisis de fluido apoplástico foliar (FA). Este capítulo se enfoca en la optimización de las técnicas de infiltración-centrifugación para la extracción de FA de hojas senescentes de Arabidopsis, y del Índigo Carmín para calcular el volumen original de FA y el factor de dilución del FA aislado, ambos parámetros necesarios para estimar la concentración fisiológica de los componentes del FA. Luego, en el capítulo 4 se caracteriza la senescencia foliar como etapa ontogénica y los FAs obtenidos de hojas senescentes y no senescentes. En este capítulo se describe la selección de hojas representativas de distintas etapas de desarrollo para realizar un análisis sobre los cambios asociados a la senescencia en el fluido apoplástico foliar. En el capítulo 5 se presentan cambios fisiológicos en el compartimiento extracelular asociados a la senescencia, y en el capítulo 6 se analizan variaciones en las proteínas y proteoma del fluido apoplástico. En el capítulo 7 se muestran resultados de experimentos manipulativos de la senescencia foliar, y las respuestas a nivel de variaciones en el contenido estable de aminoácidos, péptidos y proteínas. Se analizó el rol del apoplasto en la degradación de proteínas foliares y la removilización de nitrógeno durante la senescencia, natural y acelerada por oscuridad y el papel de la autofagia en la exportación de aminoácidos al apoplasto.

Las radiaciones adaptativas, entendidas como la evolución de la diversidad ecológica dentro delinajes que se multiplican rápidamente, constituyen uno de los procesos mas importantes que vinculan a laecología y la evolución. Grupos sujetos a radiaciones adaptativas son ideales para examinar si existe unsesgo en la diversidad de fenotipos que surgen durante este proceso. Las especies neotropicales deSalvia constituyen un grupo interesante ya que en este clado habrían ocurrido modificaciones en laarquitectura de las flores asociadas a transiciones en el síndrome de polinización desde la melitofilia a laornitofilia. Cada transición entre síndromes, acarrearía diferentes modificaciones en los patrones deasociación entre los rasgos que definen la morfología floral, dando origen a la diversidad de flores actual.Nos propusimos indagar sobre patrones de variación a escala macroevolutiva y microevolutiva del géneroSalvia (subgénero Calosphace) para confirmar que se trata de un clado sujeto a una radiación adaptativamediada por polinizadores. Luego, comparamos los patrones de variación morfológica en Salvia (subgén.Calosphace) y analizamos sus consecuencias evolutivas en la disparidad de formas, utilizando unacombinación de técnicas de morfometría geométrica y herramientas filogenéticas.En esta tesis avanzamos sobre el conocimiento de las relaciones filogenéticas, los tiempos dedivergencia entre grupos de especies, la historia evolutiva de los síndromes de polinización y su relacióncon factores extrínsecos en el subgen. Calosphace. Además, realizamos un estudio de selecciónfenotípica mediada por polinizadores en una especie de polinización mixta, Salvia stachydifolia. Para esto,separamos las presiones selectivas de los dos gremios de polinizadores, Ápidos y picaflores, yencontramos que ejercen presiones selectivas sobre diferentes aspectos de la forma floral. De esta formaconfirmamos la base microevolutiva que subyace a los procesos de radiaciones adaptativas mediada porpolinizadores: los diferentes polinizadores ejercen presiones selectivas sobre diferentes aspectos de laforma floral. Utilizando morfometría geométrica y métodos filogenéticos comparativos comparamos lasformas florales de 43 especies de Calosphace, que representan las diferentes transiciones a la ornitofiliaen el grupo. Diferentes evidencias derivadas de estos análisis sugieren que las formas florales deCalosphace son, en su mayoría, convergentes. Estos múltiples enfoques nos permiten afirmar, conseguridad, que Calosphace es un grupo sujeto a una radiación adaptativa mediada por polinizadores.Confirmando empíricamente y a varios niveles, las hipótesis evolutivas acerca de este grupo.Para entender las respuestas evolutivas a la selección natural y los limites de dichas respuestasdados por restricciones genéticas o del desarrollo, que limitan o facilitan la evolución a lo largo de ciertasdirecciones en el morfoespacio, estudiamos la evolución de la forma floral en 43 especies del géneroSalvia, en un contexto filogenético. Describimos el fenotipo floral desde dos perspectivas; 1) construyendoun morfoespacio de las formas consenso de cada especie y 2) construyendo un espacio de las matrices P(que podrían representar los sesgos a la evolución del fenotipo). En el primer caso observamos loscambios en el fenotipo debido a presiones selectivas contrastantes (diferentes polinizadores) y en elsegundo caso indagamos sobre el efecto de los polinizadores sobre las restricciones mismas. En latransición de melitofilia a ornitofilia, hubo cambios en la forma floral y en los patrones de correlación que ladefinen. Al proyectar el árbol filogenético en ambos espacios observamos que las especies ubicadas en eleje de mayor variación asociado a diferencias en el síndrome de polinización tienen poco tiempo dedivergencia entre ellas, a pesar de que, comparativamente las diferencias sean muy grandes. Sinembargo, aquellas especies de formas raras se han diferenciado tempranamente. Este patrón sugiere quelas matrices P funcionan efectivamente como restricciones que sesgan la dirección del cambio evolutivohacia la ornitofilia, posibilitando la diversificación rápida mediada por polinizadores, a lo largo de estos ejesde variación.Por lo tanto, una alternancia temporal y espacial en las condiciones ecológicas e históricas quedeterminan la intensidad con las que se dan las relaciones mutualistas, sumada a característicasparticulares del desarrollo, juntamente con fenómenos estocásticos, pueden generar patrones dediversificación diferentes a los predichos al analizar cada factor por separado y podrían ser responsablesde las divergencias en otros ejes de variación, dando como resultado la gran diversidad actual de formaspresentes en Calosphace

Las invasiones biológicas por especies exóticas forman parte del cambio ambiental global y representan una de las principales causas de pérdida de biodiversidad. A su vez, las aves constituyen uno de los grupos de vertebrados más afectado por este tipo de cambio, principalmente por mamíferos depredadores exóticos. El Visón Americano Neovison vison es un mustélido nativo de Norteamérica, tiene hábitos semiacuáticos y una dieta generalista, y fue introducido en distintas regiones del mundo donde impactó en los ensambles y poblaciones de aves acuáticas y terrestres. En el sur de Sudamérica es el carnívoro exótico asilvestrado con la distribución más extensa, ha invadido la mayor parte de la Patagonia andina, y en Argentina el frente norte de invasión se encuentra en el sur de Neuquén, ocupando la mayor parte del Parque Nacional (PN) Lanín. Aunque representa una amenaza para la biodiversidad nativa de Patagonia, son pocos los estudios que han evaluado su impacto sobre sus presas en la región y se necesitan nuevas investigaciones para comprender su ecología y respaldar decisiones de manejo. El objetivo general de este trabajo de tesis doctoral fue evaluar el impacto del Visón sobre las aves en el norte de la Patagonia andina. La hipótesis científica fue: Mediante la depredación, el Visón ejerce un efecto ecológico perjudicial sobre las aves terrestres y acuáticas nativas de la Patagonia andina. Para contrastarla, se realizó un estudio de dieta complementado con un estudio observacional que comparó ensambles y poblaciones de aves terrestres y acuáticas entre lagos del PN Lanín con distinta abundancia de visones. El objetivo específico del estudio de dieta fue describir la variedad taxonómica y ecológica de presas, identificando al menor nivel taxonómico posible las aves. El objetivo específico del estudio observacional fue evaluar el efecto ecológico de la depredación de visones sobre ensambles y poblaciones de aves acuáticas y terrestres. El estudio se llevó a cabo durante la primavera y verano australes de los años 2013-14, 2014-15 y 2015-16, en siete lagos pequeños y medianos del PN Lanín con distintas abundancias de Visón: Lagos Pulmarí, Rucachoroi y Quillén, sin visones; laguna Huaca Mamuil y lagos Curruhué Chico, Queñi y Filo Hua Hum, con visones. Se muestrearon aves terrestres y acuáticas mediante transectas lineales ubicadas de forma aleatoria sistemática en costas transitables. Se estimó la abundancia relativa de visones mediante muestreos indirectos y búsquedas de signos en secciones continuas de costa transitable. Para estudiar la dieta del Visón se recolectaron y analizaron 352 heces en total; los restos no digeridos se asignaron a siete categorías taxonómicas principales, y las aves se identificaron al menor nivel taxonómico posible mediante características microscópicas y macroscópicas de las plumas; los restos de todas las presas se asignaron a distintos gremios según el uso del espacio, y los restos de aves se asignaron a distintos gremios según el ambiente de nidificación y alimentación. Los taxones más consumidos fueron mamíferos –principalmente roedores cricétidos–, insectos –principalmente ninfas de odonatos– y aves. El taxón de aves más importante en la dieta de los visones correspondió a las gallaretas Fulica armillata, seguido por Passeriformes, Anatidae y Podicipedidae. El Visón consumió todos los gremios de presas que pueden observarse en el ecotono ripario y las presas acuáticas fueron más importantes que las terrestres. A su vez, consumió todos los gremios de aves que pueden observarse en el ecotono ripario, y el gremio de aves que nidifican y se alimentan en el agua fue el más importante. Relaciones entre la importancia de las principales categorías taxonómicas de presa y las abundancias de aves acuáticas y visones, muestran que insectos, ranas y lagartijas son más depredados cuando la abundancia de aves acuáticas es menor y la de visones es mayor, sugiriendo que en aquellos sitios donde este depredador exótico ha impactado sobre el ensamble de aves acuáticas, podría verse forzado a cambiar de dieta y a consumir tipos de presa menos provechosas, tales como insectos –que son poco digeribles– o ranas y lagartijas, que ofrecen menos recompensa energética por tiempo de manipulación. Al evaluar el efecto del Visón sobre las aves terrestres, se tuvieron en cuenta el efecto de borde a lo largo del ecotono ripario y las asociaciones de las aves con la estructura de la vegetación. Las especies focales fueron: Pteroptochos tarnii, Scelorchilus rubecula, Scytalopus magellanicus, Aphrastura spinicauda, Elaenia albiceps y Troglodytes aedon. Para el análisis de datos se ajustaron modelos lineales generalizados mixtos que se evaluaron según el enfoque de la teoría de la información. Las variables respuesta fueron la abundancia total y la riqueza específica del ensamble de aves terrestres, así como la abundancia relativa de las especies focales. Las variables explicatorias fueron la abundancia relativa de visones y las demás variables ambientales. Al haber tenido en cuenta los efectos de la estructura del hábitat sobre las aves, se observaron asociaciones de hábitat que no habían sido estudiadas previamente y que pueden ser explicadas por distintas hipótesis ecológicas. No se observó un efecto negativo del Visón sobre la abundancia y riqueza de las aves terrestres. Sin embargo, el efecto de este depredador exótico podría estar manifestándose en otras propiedades de las poblaciones relacionadas con el éxito reproductivo, la demografía y la dispersión. El enfoque y los análisis de datos usados para evaluar el efecto del Visón sobre las aves acuáticas fueron semejantes a los usados para el caso de las aves terrestres. Se tuvieron en cuenta los efectos del sustrato bentónico-costero, el área de juncal y el tipo de hábitat terrestre. Las especies focales fueron: Rollandia rolland, Podiceps major, Chloephaga poliocephala, Anas sibilatrix, A. flavirostris, A. georgica, Fulica armillata, Vanellus chilensis y Cinclodes patagonicus. La hipótesis del efecto perjudicial del Visón sobre las aves nativas se confirmó para algunas especies, indicando que la respuesta de las aves acuáticas a la depredación por visones es especie-específica. A nivel de comunidades, la variación en la abundancia de visones explicó la composición del ensamble de aves acuáticas y tuvo un efecto estadístico negativo sobre la abundancia total y la riqueza específica. Las especies más afectadas fueron C. poliocephala y V. chilensis –que nidifican y se alimentan en el ambiente terrestre del ecotono ripario–, así como A. flavirostris, que es la especie más pequeña de los patos estudiados. Curiosamente, el efecto estadístico sobre la abundancia del macá P. major fue positivo, lo cual podría deberse a que ésta sería una especie poco vulnerable a la depredación por visones, y a que las gallaretas –que compiten con macáes por sitios de nidificación– habrían sufrido un impacto débil pero negativo por la depredación de visones. La extensión de los juncales, la proporción de sustrato fangoso a lo largo de la costa, y la presencia de mallines o vegas en el hábitat terrestre adyacente a la costa, tuvieron efectos estadísticos positivos sobre las variables comunitarias y poblacionales de las aves acuáticas. Todos estos resultados, además de apoyar la hipótesis del efecto ecológico perjudicial del Visón sobre las aves acuáticas, justifican acciones de manejo tales como la remoción de visones, y sugieren que en un programa de control a largo plazo, los esfuerzos y recursos podrían concentrarse inicialmente en lagos con juncales extensos y costas fangosas asociadas a mallines o vegas. Así, en lagos pequeños y medianos del PN Lanín, la dieta del Visón incluye una gran variedad taxonómica y ecológica de presas. Hasta ahora, este depredador exótico no parecería haber afectado a las poblaciones de aves terrestres que habitan los bosques riparios, a pesar de consumir distintos Passeriformes. Sin embargo, sí podría haber causado un efecto ecológico perjudicial sobre las aves acuáticas, produciendo cambios en la composición de los ensambles, disminución en la abundancia total y en la riqueza específica, y declinación poblacional de distintas especies. Dado que las aves acuáticas son presas energéticamente provechosas, su disminución podría forzar al propio Visón a cambiar de dieta y a consumir presas menos provechosas. Futuros estudios experimentales podrían confirmar estas hipótesis mediante la remoción de visones, la cual podría servir tanto como práctica manipulativa en un esquema hipotético-deductivo, así como práctica de manejo en un plan adaptativo para revertir este problema de conservación.

En las plantas, el término “senescencia” se utiliza para aludir al deterioro estructural y funcional que sufren muchos órganos en la fase terminal de su desarrollo. En particular, en las especies anuales todos los órganos vegetativos atraviesan un proceso generalizado de senescencia durante el final del desarrollo reproductivo (“senescencia monocárpica”). Se ha estudiado extensamente la senescencia de las hojas y flores, pero se ha desatendido la de otros órganos como las raíces. Como resultado del énfasis puesto en la senescencia foliar, la mayoría de los estudios se han focalizado en el desmantelamiento de los cloroplastos. Son escasos los estudios sobre las modificaciones que ocurren durante el envejecimiento en otras organelas, particularmente las mitocondrias. El objetivo general de la presente tesis fue determinar modificaciones funcionales y estructurales de mitocondrias durante la senescencia de hojas y raíces. De acuerdo a los resultados obtenidos, Arabidopsis thaliana sería un caso intermedio entre una planta monocárpica y una planta de crecimiento continuo, o por lo menos no presentó los síntomas de senescencia de una planta monocárpica típica. Estos resultados condujeron a realizar ensayos también en una especie monocárpica típica, como la soja (Glycine max). El patrón de cambio en el metabolismo radical a lo largo del desarrollo reproductivo fue similar en Arabidopsis thaliana y en soja. Esto indicaría que la actividad radical no está ligada a un proceso de senescencia como el que sufren los tejidos aéreos, y que es moderadamente distinto en Arabidopsis y soja. Las raíces mantuvieron su actividad metabólica y acumularon biomasa aún durante el período de crecimiento de las semillas. En plantas desfrutadas (plantas de soja a las cuales se les extrajo los frutos) las raíces parecerían ser el destino de fotoasimilados más importante, ya que incrementaron su biomasa 4,7 veces respecto del estadio inicial (es decir, en 54 días). La falta de compensación entre la cantidad de tejido producido y la actividad metabólica en estos tratamientos serían indicadores de desajustes metabólicos, y la AOX (Oxidasa Alternativa) podría cumplir una función de “alivio” de las presumiblemente grandes cantidades de productos reducidos de la fotosíntesis (fotosintatos) presentes en las raíces de las plantas desfrutadas. La disminución de la cantidad de proteína total y mitocondrial hacia las etapas finales del período de crecimiento de las semillas, podría indicar que existen procesos de exportación de N desde las raíces. El decaimiento de la actividad respiratoria de las raíces posterior a la muerte de las hojas, sugeriría que las raíces experimentan un envejecimiento por falta de fotoasimilados. Para estudiar este tema se realizaron ensayos en plantas inducidas a senescer en oscuridad. En plantas de Arabidopsis que fueron sometidas a oscuridad contínua aumentó la proporción de biomasa de las rosetas, respecto de las raíces. En las raíces decrecieron la actividad respiratoria, la cantidad de proteína mitocondrial y el número total de mitocondrias. Las mitocondrias de menor tamaño son la que se encontraron en mayor abundancia y las que más cambiaron en su cantidad debido a los tratamientos de oscuridad, por lo que parecería ser las que más contribuyen a la actividad respiratoria radical. En oscuridad disminuyó más marcadamente el número de mitocondrias activas que el de mitocondrias totales, lo que parece indicar que existieron conjuntos de mitocondrias con actividades basales o en “standby”. El contenido de azúcares solubles disminuyó, y esto podría explicar las caídas de las tasas metabólicas por un efecto de hambreado. El aumento de la respiración radical por el agregado temporario de glucosa confirmaría esta hipótesis. El estudio con mutantes KO en la vía autofágica (atg5-KO) de Arabidopsis thaliana no arrojó resultados concluyentes respecto de la participación de esta vía en la degradación de las mitocondrias radicales. De acuerdo a los datos obtenidos se puede concluir que se cumplió con el objetivo planteado en términos generales. También se ha aportado información respecto a temas poco estudiados como la fisiología de las raíces y las mitocondrias en el contexto de la senescencia.

Un espermatozoide móvil es uno de los requisitos necesarios para que se dé la fecundación de manera exitosa. En animales de fecundación externa los espermatozoides permanecen quiescentes en los testículos y durante la espermiación activan su motilidad. En los anfibios anuros como Bufo arenaurm, el contacto entre los gametos se da, primeramente, entre los espermatozoides y los factores que difunden rápidamente de la cubierta gelatinosa de los ovocitos (recuperados en una solución denominada EW, del inglés Egg Water). En este trabajo de tesis se estudiaron los factores del medio extracelular que activan el batido flagelar y los efectos de EW sobre los espermatozoides homólogos. Además se avanzó en el conocimiento de los mecanismos moleculares que gobiernan la activación flagelar. Para abordar estos estudios se realizaron ensayos bioquímicos y farmacológicos, utilizando como modelo espermatozoides del anfibio Bufo arenarum. En este trabajo de tesis se demuestra que la activación flagelar es iniciada por el choque hiposmótico del medio extracelular. Esta activación flagelar es reversible, sugiriendo la existencia de proteínas capaces de sensar cambios de presión osmótica. La activación flagelar está gobernada principalmente por dos vías de señalización: una dependiente de calcio y otra vía de señalización regulada por tmAC/AMPc/PKA. Además, se muestran evidencias que durante la activación flagelar se activarían proteínas serina/treonina fosfatasas que desfosforilan proteínas sustratos de PKC, localizadas en el flagelo del espermatozoide.

El objetivo del trabajo fue investigar los cambios en los mecanismos fisiológicos y metabólicos del cv. Navelate, en respuesta a prácticas culturales que favorecen el cuajado de frutos. La experiencia se realizó en una finca ubicada en Salto (Uruguay). Los tratamientos conformaron un arreglo factorial: a) fertilización inicial con urea, dosis: 800g y 1300g, b) ácido giberélico (AG3) a la caída de pétalos: 0 y 50 ppm, c) rayado de ramas a los 15 días posteriores a la aplicación de ‘AG3’: con rayado y sin rayado. Durante el periodo primaveral se evaluaron los efectos de los tratamientos sobre el metabolismo fotosintético, la dinámica de carbohidratos y del nitrógeno, la expresión de metabolitos relacionados al estrés celular, el cuajado de frutos de los diferentes tipos de brotes florales, y los niveles productivos. La mayor dosis de nitrógeno y la aplicación de rayado resultaron en un cuajado de frutos superior y un rendimiento más elevado. La aplicación de AG3, si bien provocó un retraso en la abscisión de frutos, no logró mejorar los niveles productivos, salvo bajo condiciones de mayor disponibilidad de nitrógeno o bien combinada con rayado. La fertilización inicial con alta dosis nitrogenada y la aplicación del rayado de ramas posterior a la caída de pétalos, produjeron cambios favorables en los mecanismos metabólicos y fisiológicos en el momento crítico del cultivo, lo cual resultó en una menor abscisión de frutos y un aumento de la producción del cv. Navelate, en las condiciones agroclimáticas de la citricultura del Río Uruguay.

El impacto de una especie invasora se relacionea con su grado de novedad funcional rrespecto de la comunidad residente.. En esta tesis se propuso que la invasión de árboles exóticos en pastizales genera una cascada de efectos que involucran distintos niveles de organización, desde la demografía de las poblaciones herbáceas y la composición funcional del pastizal hasta atributos del ecosistema como la productividad primaria y la fertilidad del suelo.. Además, se anticipó que estos efectos se intensificarían a lo largo de gradientes naturales de invasión.. Se realizaron estudios observacionales y experimentales en dos pastizales post - agrícolas de la Pampa Interior invadidos alternativamente por Gleditsia triacanthos (acacia negra) o Ulmujs pumila (olmo siberiano).. Mediante censos de vegetación se observó que con el avance de la invasión desaparecieron del estrato herbáceo las especies perennes estivales e invernales.. En el caso de acacia, las especies anuales de invierno fueron favorecidas en estadíos intermedios de invasión pero decrecieron en los bosques más densos.. La productividad primaria neta aérea (PPNA) herbácea disminuyó con la invasión de árboles.. En los estadíos más avanzados de invasión de acacia y olmo se detectaron una reducción del carbono orgánico y un aumento de la alcalinidad superficial del suelo, respectivamente.. Experimentos de remoción de broza limitó el reclutamiento de herbáceas en estadios iniciales de la invasión, mientras que favoreció el reclutamiento de Lolium multiflorum en etapas intermedias de la invasión.. En cambio, en el sitio invadido por olmo, el reclutamiento de esta especie no fue afectado por la presencia de broza, pero aumentó con el agregado de semillas. Se analizó el rol de la luz como modulador de los efectos sobre la comunidad herbácea mediante un experimento de simulación del sombreo arbóreo combinado con transplantes recíprocos de parches de pastizal y de bosque.. El sombreo aumentó la cobertura de las especies anuales invernales, mientras que las especies perennes estibales mostraron cierta inercia en su respuesta al ambiente.. Los resultados de esta tesis muestran que los árboles exóticos actúan como ingenieros del ecosistema, afectando los ervicos que los pastizales secundarios proveen en los agroecosistemas.

El ozono es uno de los mayores contaminantes de la tropósfera alcanzando, según las proyecciones, niveles perjudiciales para los sistemas biológicos. Los efectos del estrés oxidativo del ozono pueden ocasionar muerte celular, reducción en el crecimiento y en la producción de semillas. Sus impactos sobre las plantas han sido bastante estudiados, pero no se ha considerado los efectos sobre las interacciones de éstas con los simbiontes benéficos. La simbiosis entre pastos y hongos Epichloë es considerada mutualista ya que, a los endófitos de transmisión vertical se los asocia con mejoras en el desempeño de las plantas. Sin embargo, los efectos del ozono sobre el balance redox de las plantas podrían impactar negativamente sobre el simbionte y los beneficios brindados a la planta hospedante. En esta tesis se estudiaron los efectos del ozono sobre la relación planta-endófito, con énfasis en los procesos que pueden afectar su persistencia y la transmisión del hongo. Se estudiaron los efectos del ozono sobre la interacción pasto-endófito a lo largo del ciclo de vida del hospedante (y sus consecuencias transgeneracionales), mediante la evaluación de dos procesos cruciales en la determinación de la frecuencia de la simbiosis en la población: (i) efecto del endófito sobre el desempeño del hospedador (o aptitud diferencial de plantas con y sin endófito) y (ii) eficiencia de transmisión o persistencia del endófito. Los resultados mostraron que el ozono causó daño oxidativo afectando el crecimiento de los pastos en general. Sin embargo, sus consecuencias negativas fueron más evidentes en plantas con endófito modificando la asignación de recursos hacia los órganos reproductivos. A su vez, la longevidad de las semillas producidas en las plantas simbióticas fue notablemente disminuida independientemente del ozono transgeneracional. Ello podría estar explicado por el mayor nivel de glutatión en estado oxidado (GSSG) y el mayor contenido hídrico mostrado por las semillas con endófitos. Por otro lado, el ambiente estresante experimentado por las plantas madre se transmitió a la descendencia; las plántulas provenientes de madres expuestas a ozono presentaron mayor supervivencia cuando se las exponía al ozono. Si bien en términos generales, las plántulas sin endófito mostraron una mayor supervivencia, las plántulas con endófito siempre presentaron una mejor respuesta transgeneracional al ozono: las plántulas provenientes de plantas tratadas con ozono mostraron una mayor supervivencia solo en escenarios de ozono. La transmisión del hongo desde la planta a la semilla no fue afectada por el ozono. Contrariamente el ozono afectó negativamente la longevidad del hongo impactando la transmisión de semilla a plántula y tuvo efectos más marcados en plantas expuestas al ozono en etapas vegetativas. Finalmente, se encontró una correlación positiva entre la biomasa del hongo y las defensas de origen fúngico (i.e. alcaloides), siendo ésta la primera vez que se documenta en semillas. En conclusión, las respuestas de la simbiosis frente al ozono fueron complejas dependiendo de la etapa ontogénica del hospedante que fue afectada por el contaminante. Si bien en algunas etapas y procesos, el endófito mejoró el desempeño del hospedante (e.g. biomasa, daño oxidativo, aptitud ecológica de la progenie), en otros ocurrió lo contrario (e.g. esfuerzo reproductivo, longevidad de semillas). Además, la persistencia del endófito en las semillas producidas por plantas expuestas a ozono, podría ser compensada por la mayor supervivencia de las plantas producidas por estas semillas en ambientes estresantes. Esta tesis contribuye con un nuevo conocimiento sobre los cambios en la relación simbiótica pasto-endófito bajo condiciones ambientales nóveles como es el aumento en la contaminación atmosférica por ozono a causa de la actividad antrópica.

La presencia de campilobacterias en ambientes acuáticos ha sido estudiada por diferentes autores con resultados variables: algunos autores no lograron detectarlas y otros informan altas frecuencias de aislamiento. Fueron reportados diferentes factores bióticos y abióticos que podrían influir sobre la presencia de especies de Campylobacter en aguas superficiales, entre los que se incluyen el contenido de oxígeno, la presencia de nutrientes, la temperatura, el pH, el tipo de agua, la exposición a la luz ultravioleta (UV), la humedad, el origen de la cepa, e interacciones bióticas. A pesar de las discrepancias, la temperatura, la interacción con la flora autóctona y la radiación solar, son consideradas como los factores determinantes de supervivencia más significativos dentro de los ambientes acuáticos. Campylobacter coloniza el tracto digestivo de un amplio rango de huéspedes animales de sangre caliente, siendo las aves de corral el reservorio de mayor importancia, el cual puede constituir la fuente de contaminación para el hombre, otros animales, alimentos y cuerpos de agua. El género Campylobacter se ha expandido de manera constante y actualmente comprende 21 especies y 8 subespecies. Cuatro especies son conocidas como “Campilobacterias termotolerantes”, ellas son Campylobacter jejuni (C. jejuni), Campylobacter coli (C. coli), Campylobacter lari (C. lari) y Campylobacter upsaliensis (C. upsaliensis). Las únicas especies de importancia para la salud pública debido a su rol como enteropatógenos son C. jejuni (80%), y C. coli (10%), estos son agentes zoonóticos de infecciones intestinales que pueden contaminar cuerpos de agua. Ambas especies pueden sobrevivir en agua, desde unos pocos días a varias semanas dependiendo de la temperatura del agua. El agua juega un rol importante en la ecología de Campylobacter spp. Este es ubicuo en el medio ambiente ya que se ha aislado de arroyos, ríos, lagos, lagunas, estanques, arroyos, estuarios, canales de drenaje, aguas subterráneas, bahías, aguas marinas, aguas no tratadas contaminadas con materia fecal; además se registraron brotes a partir de agua corriente. El agua de uso recreacional está contaminada regularmente con materia fecal por su carácter de superficial y como resultado de ello, las superficies acuosas contienen microorganismos relacionados con infecciones gastrointestinales humanas. El destino de estos microorganismos suele ser más de supervivencia que de crecimiento, por lo cual el agua puede ser considerada como un importante reservorio y a la vez un vehículo de transmisión de estos. Pese al uso de medios de enriquecimiento y técnicas de filtración, el cultivo de Campylobacter a partir de muestras de agua (como en la mayoría de las muestras ambientales) es en muchas ocasiones de muy bajo rendimiento. De la exhaustiva revisión bibliográfica realizada en bases de datos nacionales e internacionales, no se encontraron trabajos hechos en Argentina en los que se estudiara la presencia de Campylobacter en ambientes acuáticos. Debe destacarse que la vigilancia de los microorganismos patógenos en los ambientes frecuentados por la población es clave para entender la epidemiología de las enfermedades humanas y poder establecer medidas profilácticas y /o de control. Teniendo en consideración que en nuestra región coexisten muchos factores ecológicos que podrían facilitar la transmisión de campilobacterias, el conocimiento que se tenga de la distribución de estas bacterias, podría ser un dato epidemiológico que contribuiría a mejorar las medidas de prevención y control de esta zoonosis. Todo lo antedicho despertó el interés por conocer cuál es la relación entre estos patógenos a fin de descartar o incluir al medio acuático natural como reservorio de campilobacterias a la vez que se propone estudiar la sobrevida de estas bacterias en el laboratorio bajo condiciones controladas similares a las de los ambientes acuáticos de nuestra región, a fin de conocer si los factores ambientales condicionan la presencia de Campylobacter en aguas de uso recreacional de nuestra región.