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La arteritis viral equina es una enfermedad viral muy importante económicamente en la industria equina cuya prevalencia continúa en aumento, posiblemente debido a la intensificación del transporte de caballos y semen congelado. Es una de las principales causas de aborto, neumoenteritis fulminante en recién nacidos y enfermedad respiratoria alrededor del mundo, donde el macho infectado puede convertirse en portador y transmisor del virus durante el servicio. El virus pertenece a la familia Arteriviridae, es envuelto, posee ARN de simple cadena y contiene numerosas proteínas. Las principales proteínas virales, en cuanto a su abundancia y antigenicidad, son la N (de la nucleocápside) y las proteínas gP5 y M (de membrana). El proceso de apoptosis se encuentra estrictamente controlado a nivel genético y diversos factores pueden alterar el proceso de manera de inducir o inhibir esta respuesta celular. Si bien hay estudios que muestran que este virus induce apoptosis en cultivos celulares identificando distintas enzimas participantes, no se conoce cuál o cuáles proteínas virales estarían involucradas en este proceso. El objetivo general de este trabajo es estudiar la inducción de la apoptosis en cultivos celulares tras la infección con el virus. Se estudiaron diferentes mecanismos moleculares implicados en este proceso mediante el empleo de distintas cepas virales de variada patogenicidad a través de la expresión diferencial de proteínas virales en cultivos. Como primer paso se utilizó el virión completo de las tres cepas virales seleccionadas (Bucyrus, LP-01 y GLD-LP-ARG) y se infectaron 3 líneas celulares (RK-13, Vero y BHK-21), incluyendo controles positivos y negativos. Luego se realizaron construcciones en pCDNA3.1(+) para cada uno de los genes correspondientes a las proteínas M, N y gP5 del VAE y se transfectaron cultivos celulares. Además se evaluó la vía del retículo, representada por la caspasa -12, utilizando distintos inhibidores en células RK-13. Se utilizaron tanto métodos cualitativos como cuantitativos. Nuestros resultados indican que la magnitud de apoptosis observada en los cultivos celulares infectados está directamente relacionada con la patogenicidad y la MOI de la cepa viral del VAE y el tiempo posinoculación. Se observó además que todas las construcciones recombinantes inducen un grado variable de apoptosis, siempre menor a la observada con el virión completo pero mayor respecto a los cultivos que expresan el vector vacío. Además, mediante la utilización de staurosporina, reconocido inductor de apoptosis, observamos un efecto antiapoptótico en las construcciones portadoras de la proteína M, mientras que, por el contrario, se observó un efecto sinérgico en aquellas que contenían los genes de las proteínas gP5 y N del VAE. Por último evidenciamos que la vía del retículo, representada por la caspasa 12, es una de las principales rutas apoptóticas activadas por el VAE. La participación en la muerte celular de los distintos genes virales evaluados, abre nuevos interrogantes que estarían destinados a comprender en mayor profundidad la patogenia de enfermedad, con la esperanza de potenciar y perfeccionar las herramientas de prevención, diagnósticas y terapéuticas disponibles actualmente, mediante la puesta a punto de otras herramientas de detección de la actividad viral en la célula huésped.

El herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi, KSHV, es el agente etiológico del sarcoma de Kaposi. Dentro del genoma viral, el receptor viral acoplado a proteína G (vGPCR) conduce a la oncogénesis y angiogénesis; su expresión persistente y actividad es necesaria para el mantenimiento del tumor. La forma hormonal activa de la vitamina D, 1α,25(OH)2D3, presenta efectos antineoplásicos en varios tipos de tumores. El potencial anti-proliferativo y antiinflamatorio del 1α,25(OH)2D3 en células endoteliales que expresan el vGPCR ha sido explorado por nuestro grupo. En los últimos años se ha incrementado el uso de análogos sintéticos del 1α,25(OH)2D3 con menor actividad calcemica para minimizar la hipercalcemia producida por dosis altas del metabolito. En este trabajo de Tesis Doctoral se profundizó en el mecanismo de acción antineoplásico del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527. Se obtuvo evidencia que ambos compuestos promueven la apoptosis a través de un desbalance entre los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 en células vGPCR. Se observó un aumento en los niveles de expresión de la proteína pro-apoptótica BIM y disminución de A20 por un mecanismo dependiente del VDR y un pico de inactivación en la fosforilación de BAD acompañado por la formación de complejos con Bcl-2, alterando posiblemente la integridad de la mitocondria. También, se demostró que el 1α,25(OH)2D3 y TX 527 inducen autofagia a través de la inactivación del eje PI3K/Akt/mTOR y regulación de BECN1 como parte del mecanismo antineoplásico de acción. Asimismo, ambos agonistas regulan la proliferación de las células vGPCR mediante la inactivación de ERK1/2 y p38 y aumento de la expresión de las fosfatasas MKP-3 y MKP-5. Eventos regulados por la expresión del VDR, con excepción de ERK1/2, debido probablemente a una regulación no genómica de esta quinasa. El Bortezomib, inhibidor del proteasoma y de la activación de NF-ĸB, disminuyó la proliferación celular e indujo apoptosis por un mecanismo similar a los agonistas del VDR en células vGPCR. Proceso acompañado además por la activación del factor de transcripción FOXO1, disminución en la expresión génica de VEGF y aumento del inhibidor del ciclo celular, p21. Debido a las limitaciones que presentan los cultivos celulares bidimensionales, se desarrolló un método para obtener esferoides multicelulares a partir de células endoteliales y transformadas por la expresión del vGPCR. Las células vGPCR cultivadas en una superficie de baja adherencia desarrollaron esferoides de mayor tamaño y el tratamiento con 1α,25(OH)2D3 produjo cambios morfológicos con la consecuente inducción de apoptosis. A nivel molecular, se observó un aumento en la expresión génica del VDR, BIM y p21 al aumentar la dosis. Además, el 1α,25(OH)2D3 provocó un aumento en los niveles proteicos de BIM y disminuyó la activación de ERK1/2 y Akt, permitiendo concluir que las células en cultivos tridimensionales responden al agonista de manera similar a lo observado en cultivos en monocapa. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen al conocimiento del mecanismo de acción anti-proliferativo del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527 en un modelo celular de sarcoma de Kaposi. A su vez, sustenta las bases para dar continuación a otros estudios en modelos in vivo y evaluar su potencial aplicación, sólo o en combinación con Bortezomib, en el tratamiento de esta patología.

La presente tesis analiza la ocurrencia de brotes epidémicos y su relacion causal con eventos de inundación en Argentina durante el periodo 2005 a 2007. Mediante el uso de informacion metereologica y epidemiológica, se analizaron la relación entre los diferentes descriptores de las inundaciones, y su relacion con la ocurrencia, numero y tipo de brotes epidémicos. Asimismo, se caracterizaron las condiciones ambientales por tipo de epidemia y factor ambiental. Mediante el uso de modelos lineales generalizados mixtos, se analizó la ocurrencia de casos por enfermedad y su relación con factores ambientales, observándose relaciones significativas como vegetación (NDVI), lluvias acumuladas semanalmente, lluvias máximas y temperaturas medias, máximas y mínimas. Se analizo en particular un brote epidémico de malaria Iguazú durante el año 2007, generándose un mapa de distribución potencial del vector y áreas más riesgosas, basado en la biología del vector, humedad de suelo, tipos de cobertura del suelo y cercanía a cuerpos de agua. Para la determinación de humedad de suelo se utilizaron imágenes SAR (ALOS Palsar) y modelos inversos. Finalmente se sugirieron productos de potencial uso para la gestión de epidemias postinundación, provistos por la red GeoNet Cast Americas, relacionados con estado de la vegetación y variables climáticas.

El presente trabajo consta de las siguientes partes: Una introducción en la cual se establecen los objetivos del trabajo y las causas que motivaron su estudio. Los objetivos propuestos fueron: determinar el coeficiente de autodifusión D del titanio en fase beta (entre 900 y 1580°C), estudiar la variación de D con la temperatura, obtener valores para: la energía de activación (q)del proceso de la autodifusión, para el factor de frecuencia (D0) y para la variación de entropía de activación ΔS del proceso; predecir el tipo de mecanismo de la autodifusión sobre la base del signo de la variación de entrópia ΔS, y del valor del D0. En cuanto a las causas que determinaron la realización de este trabajo son de dos órdenes: científicos y tecnológico. Dentro de las primeras se encuentra la necesidad de comprobar si todos los elementos del grupo IV a de la Tabla Periódica (al cual pertenece el Titanio) presentan valores anormalmente bajos para q y D0 en el proceso de la autodifusión. La literatura presenta resultados de este tipo para el Titanio en fase alfa y para el Circonio en fase alfa y beta. El circonio pertenece con el Titanio, el Hafnio (z=40,22y72) el grupo antes citado. Entre las causas tecnológicas que impulsan al estudio de las propiedades del Titanio se encuentran las crecientes aplicaciones de este elemento en la industria, debido a su alta resistencia a la corrosión por agua salada y a la erosión. Primera parte: Consideraciones teóricas, en las cuales se exponen generalidades sobre la difusión y las leyes que la rigen; el método de seccionamiento que permite obtener el coeficiente de disfusión (en este caso el coeficiente de autodifusión D) utilizando trazadores radioactivos y sus variaciones el método de Gruzin y la generalización del mismo debida a Seibel. Este último método ha sido elegido para este trabajo, se exponen las causas de su elección. Esta primera parte se ha completado con consideraciones sobre la variación del coeficiente D con la temperatura, consideraciones sobre la energía de activación, sobre el factor de frecuencia y sobre la variación de la entropía de activación del proceso de la autodifusión. Se discute también la predicción del mecanismo de la autodifusión considerando el ΔS correspondiente y el D0. Segunda parte: incluye técnicas experimentales en general. Se dan las generalidades sobre el material utilizado (Ti) y sobre su radioisótopo (Ti^44), el análisis químico del Titanio utilizado, los tratamientos previos del material, la preparación de las muestras, el depósito del material radioactivo (se discuten varios tipos de depósito y se dan las causas de la elección del depósito electrolítico), los tratamientos térmicos de difusión (incluyendo las condiciones en que deben efectuarse y el error que se comete en las mediciones), las abrasiones y el contaje (equipos utilizados, condiciones de trabajo, error de las mediciones, etc) la obtención de las curvas de penetración y del gráfico ln р In/рXn=f(xn^2) del cual se obtiene el coeficiente D.Construcción del gráfico ln D=f(I/T) de la variación del coeficiente D con la temperatura y técnica autorradiográficas son los dos últimos puntos tratados en esta segunda parte. La tercera parte: incluye una discusión de los resultados y finalmente un cuadro en el que constan los resultados obtenidos. Se completa este trabajo con tres apéndices que desarrollan fórmulas utilizadas en el trabajo y con la bibliografía del mismo. Desarrollamos aquí a continuación los resultados obtenidos: Se utilizó el método de Gruzin generalizado para obtener los coeficientes de autodifusión del Titanio en fase beta (ente 900 y 1580°C) utilizando su isótopo radioactivo el Titanio ^44. La tabla I a continuación muestra dichos resultados: *Ver tabla en tesis* Se ha estudiado la variación del coeficiente de autodifusión con la temperatura y se encontró que responde a una ecuación de tipo Arrhenius. Se obtuvieron valores experimentales para la energía de activación de la autodifusión (Q) y para el factor de frecuencia D0) anormalmente bajos: *Cuadro en tesis* Se calcularon mediante ecuaciones empiricas y semi empiricas valores para Q y D0. Los datos calculados son mayores que los experimentales. Cuando se transportan los valores calculados y los experimentales a los gráficos representativos de esas relaciones empíricas y semi-empíricas se observan: a.- Los valores calculados se encuentran siempre agrupados con los valores experimentales de otros elementos cúbicos centrados cuyo comportamiento en la autodifusión es normal. La concordancia es excelente. b.- Los valores experimentales presentan un apartamiento anómalo. Este comportamiento se observa para el circonio y el uranio ɣ. El valor bajo de D0, así también como el valor negativo de la variación de la entropía de activación (ΔS=-7,42 Kcal/mol) permiten predecir un mecanismo de anillo de 4 átomos para la autodifusión. Este es un criterio experimental, aunque el mecanismo de anillos es el más frecuente en las estructuras poco compactas. Este mecanismo involucra una disminución de la energía de activación y de la entalpía, lo que justificaria los valores experimentales bajos de los mismos. La teoría del D0 de zener no resulta aplicable rigurosamente al Circonio o al Titanio pues no justificaría un valor negativo de la variación de la entropía de activación ΔS. Al no considerar zener en su teoría la contribución a la variación de la entropía total por la alteración de las frecuencias de vibración de los átomos en el punto de ensilladura (ΔS3) siempre obtiene para el ΔS total un valor positivo puesto que las otras dos contribuciones ΔS1 y ΔS2 son siempre positivas. La experiencia muestra en cambio valores negativos para el ΔS total; los de baja magnitud (del orden de -0,20 Kcal/mol.°K) fueron explicados por Zener como: Errores de experimentación. Caminos de difusión por "circuitos cortos". Esta teoría no explicaba, sin embargo, valores negativos de ΔS mayores, como los hallados para el Titanio en fase alfa o los de este trabajo. Los conceptos de Diones que justifica un ΔS negativo y los de Paxton, Pound y Bittleque los utilizan como criterios para determinar los mecanismos de la autodifusión constituyen las bases de este trabajo experimental. La tabla 2, a continuación, resume los datos de este trabajo para la autodifusión del Titanio en fase beta. *Ver tabla en tesis*

El extremo austral de la región Patagónica es un área de gran interés para la reconstrucción paleoambiental del Holoceno por su situación geográfica y climática única dentro del Hemisferio Sur. El objetivo de la presente investigación fue estimar variaciones pasadas en parámetros ambientales climáticamente controlados durante el Holoceno Medio y Tardío mediante estudios paleolimnológicos basados en un bioproxy, los ostrácodos (Crustacea: Ostracoda). Se analizó la hidroquímica de más de 30 cuerpos de agua lénticos actuales del sur de Santa Cruz, con el objetivo de caracterizar el gradiente ambiental subyacente. A su vez, se evaluó la distribución de los ostrácodos patagónicos en función de la concentración y composición de solutos de sus aguas huésped. Los datos generados fueron utilizados para elaborar una función de transferencia para la reconstrucción cuantitativa de variaciones pasadas en la salinidad, la cual fue aplicada a testigos sedimentarios lacustres cuyo registro abarca los últimos miles de años. Asimismo, se realizaron inferencias semi-cuantitativas sobre la composición de solutos (tipo de agua) en dichos ambientes. Esta información, junto con datos obtenidos a partir de otros proxies - biológicos, sedimentológicos y/o magnéticos – fue utilizada para reconstruir variaciones pasadas en el balance hídrico de los cuerpos de agua estudiados, las cuales a su vez permitieron evaluar cambios en los regímenes de precipitaciones y patrones de circulación atmosférica sobre la Patagonia Astral durante la segunda mitad del Holoceno.

En el presente trabajo se estudió el género Pleurotus (Fr.) P. Kumm. en la República Argentina. Para conocer su biodiversidad, se analizaron los caracteres macro- y micromorfológicos de colecciones obtenidas a campo y de distintos herbarios nacionales (BAFC, LPS, LIL). Se utilizaron los cruzamientos intra- e interespecíficos entre cultivos monospóricos, obtenidos a partir de las fructificaciones de los aislamientos depositados en el cepario BAFC y de basidiocarpos coleccionados, como herramienta para la correcta delimitación de especies. Se concluyó que en la Argentina hay, hasta el momento, 6 especies, una de ellas representada por tres variedades: P. albidus, P. cystidiosus, P. djamor var. djamor, P. djamor var. cyathiformis, P. djamor var. roseus, P. ostreatus, P. pulmonarius y P. rickii. Se estudió la temperatura y el medio de cultivo óptimo de 28 cepas del género. Se caracterizaron los cultivos en medio sólido mediante la reacción enzimática con ácido gálico, ác. tánico, tirosina, p-cresol y guayacol, así como la degradación de Poly R-478 y Azure B. Se hizo el estudio de cultivo con base en la metodología propuesta por Nobles y en otros medios como agar papa glucosado, agar grano y medio sintético completo. Se utilizaron las técnicas de cultivo para la obtención de basidiocarpos con tres aplicaciones: 1) permitir que las fructificaciones pudieran ser estudiadas macro y micromorfológicamente en estado fresco; 2) obtener de ellas la esporada necesaria para lograr cultivos monospóricos y 3) analizar la capacidad productiva. Se ensayaron especies nativas en distintos sustratos artificiales con el fin de verificar su potencial productivo, encontrando diferencias entre las distintas cepas y sustratos ensayados.

Tesis para obtener el grado de Doctor, de la Universitat Politècnica de València (España), en 2015

Se analizó la incidencia que tiene el procesamiento de semilla de girasol, sobre su calidad fisiológica, durante la secuencia operativa de la planta de procesamiento de Tecnoseeds Venado Tuerto. Se utilizaron dos híbridos de cáscara negra. Se evaluaron ocho etapas de procesamiento: 1) Testigo (ingreso a la planta de procesamiento), 2) Prelimpieza, 3) Salida conjunta grado 1 y 2, 4) Salida conjunta grado 3 y 4, 5) Grado 1, 6) Grado 2, 7) Grado 3 y 8) Grado 4. La calidad fisiológica de las semillas se determinó mediante las técnicas de Prueba de germinación estándar, Prueba de frío, Prueba de envejecimiento acelerado, Viabilidad por Prueba topográfica por Tetrazolio y Prueba de conductividad eléctrica a las 4 y 20 horas. Los resultados se analizaron mediante ANOVA y comparación de medias de Test de Tuckey y Duncan. Se encontró que durante las distintas etapas de procesamiento la calidad fisiológica de las semillas de girasol no fue afectada. Postulamos que, la capacidad de las semillas de girasol, de conservar su calidad fisiológica durante el procesamiento, podría atribuirse fundamentalmente a las características estructurales del aquenio, el cual presenta alta rigidez en su pericarpio y una cámara de aire que amortiguaría los potenciales daños mecánicos operados durante el procesamiento.

Fundamentación del estudio. Según la Encuesta Nacional de Nutrición y Salud de Argentina realizada en los años 2004-2005 en niños y mujeres entre 10 y 49 años (ENNYS, 2007), el calcio resultó uno de los nutrientes más críticos, con un 94,3% de mujeres que presentaron una ingesta menor a la ingesta diaria recomendada (IDR) (1000 mg/día), independiente de su localización geográfica, situación socioeconómica o edad. En el caso de los niños menores de 2 años el 28% no cubrían la ingesta adecuada de este mineral, mientras que en el grupo de 2 a 5 años esta cifra llegaba al 45,6%. Esos resultados evidencian que el calcio es uno de los nutrientes más críticos en mujeres y niños. Una dieta con aportes adecuados de calcio podría contribuiría a controlar enfermedades causadas por deficiencia de este elemento como son la osteopenia y la osteoporosis. Un alimento de consumo masivo por parte de la población es el pan, por lo que la incorporación de calcio a harina de trigo para la obtención de panes nutricionalmente enriquecidos en este mineral resulta un desafío no sólo nutricional, sino también tecnológico. El calcio no sólo debe estar presente en el alimento, también debe ser absorbido por el organismo; una alternativa para aumentar su biodisponibilidad es incorporarlo junto con prebióticos como FOS-Inulina a la formulación.

En nuestro laboratorio nos encontramos investigando la utilidad de la porción proteica de la lipoproteína de membrana externa de 19 kiloDalton de Brucella abortus (U-Omp19) como adyuvante vacunal. Resultados previos proponían a U-Omp19 como un inhibidor de serin proteasas de estómago e intestino. En esta tesis hemos comprobado que U-Omp19 posee actividad de inhibidor de cisteín proteasas lisosomales y que la co-administración de U-Omp19 inhibe parcialmente la degradación del antígeno (Ag) dentro de las células presentadoras de Ag incrementando su vida media y promoviendo su presentación cruzada a las células T CD8+. UOmp19 también es capaz de activar células dendríticas (DCs) induciendo un aumento en la expresión de moléculas co-estimulatorias y secreción de citoquinas pro-inflamatorias. Por último, estudiamos la respuesta inmune inducida en ratones luego de la co-administración de OVA y U-Omp19 por vía subcutánea. Observamos que U-Omp19 como adyuvante de OVA induce una eficiente respuesta inmune celular de tipo T CD8+ y citotóxica con producción de IFN-γ. Los resultados obtenidos indican que la actividad adyuvante de U-Omp19 está dada, por un lado, por su capacidad de activar DCs y por otro lado, por promover la estabilidad y la presentación de Ags a través de su acción como inhibidor de proteasas, éste último representa un novedoso mecanismo aún no descripto para un adyuvante vacunal.