Catálogo de publicaciones

Fil:Davidson, Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Universidad Nacional de Quilmes. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas (LEPP).

El estudio de la estructura y la dinámica de las tramas tróficas ayuda a comprender el funcionamiento de un ambiente acuático, a interpretar el modo en que los componentes del mismo se interrelacionan, y a evaluar la importancia relativa de las fuentes de energía pelágica y bentónica, entre otros aspectos. A pesar de la relevancia de desarrollar dicho tipo de estudios, la información previa sobre la estructura de la trama trófica del Lago Perito Moreno (LPM) es escasa y fragmentaria. A causa de esto resulta imprescindible desarrollar un estudio integral de la trama trófica del LPM que integre información de la totalidad de sus componentes. Estudios previos en lagos de los Parques Nacionales Nahuel Huapi (PNNH) y Los Alerces mostraron contenidos significativos de mercurio (Hg) en peces nativos e introducidos, si bien el área está alejada de las posibles fuentes antropogénicas de emisiones de este elemento contaminante. Por lo tanto, es fundamental el análisis de la transferencia de Hg en la trama trófica de los lagos de la región, y el LPM es el sistema ideal para un estudio preliminar de este tipo, principalmente debido a su menor tamaño en relación a otros lagos de la región con tramas tróficas similares y su accesibilidad. El análisis de los isótopos estables de carbono (delta13C) y nitrógeno (delta15N) es una herramienta de uso habitual en el estudio de la estructura de las tramas tróficas en ambientes acuáticos dado puede brindar información sobre flujos de energía, relaciones tróficas, patrones migratorios de peces, variaciones temporales y espaciales y ontogenéticas en la dieta de macroinvertebrados y peces, aportes antropogénicos al sistema y estimaciones de tasas de transferencia de elementos contaminantes como el mercurio en la trama trófica. Debido a sus múltiples aplicaciones, el uso esta técnica será de suma utilidad para analizar la trama trófica del LPM y la transferencia de Hg en la misma. El LPM está localizado en el PNNH. Es un lago ultraoligotrófico, de origen glacial, y está dividido en tres cuerpos de agua conectados entre sí (Moreno Este (ME), Moreno Oeste (MO) y Morenito), los cuales presentan características diferentes. Para analizar la trama trófica de este sistema, en el ME y en el MO se realizaron muestreos estacionales de perifiton, macrófitas, material proveniente del ambiente terrestre, plankton macroinvertebrados y peces. Las muestras fueron analizadas mediante Espectrometría de Masa de Relaciones Isotópicas y por Análisis por Activación Neutrónica Instrumental para obtener los valores de delta13C y de delta15N y las concentraciones de mercurio total (THg) y selenio (Se), respectivamente. Los valores de los isótopos estables de nitrógeno, mostraron un incremento desde los niveles tróficos inferiores (macrófitas y el perifiton) hasta los intermedios (plancton y macroinvertebrados) y los superiores (peces). Dentro de la comunidad de peces, los salmónidos introducidos y la especie nativa Percichthys trucha (Perca Criolla) ocuparon la posición trófica más alta, en tanto que las especies nativas Galaxias maculatus (Puyén Chico) y Olivaichthys viedmensis (Bagre Aterciopelado) se situaron en la más baja. Asimismo, la fracción de plancton de mayor tamaño (F3: > 200 micrómetros) se ubicó en un nivel trófico más elevado que las dos fracciones de menor tamaño (F1: (10 - 53) micrómetros; F2: (53 - 200) micrómetros). Dentro de la comunidad de los macroinvertebrados bentónicos, los hirudíneos, y los crustáceos decápodos Aegla sp. y Samastacus spinifrons presentaron la posición trófica más alta; Hyalella sp. y las larvas de insectos (tricópteros, plecópteros, odonatos y efemerópteros) mostraron una posición trófica intermedia, y los oligoquetos, larvas de quironómidos y moluscos (Chilina sp. y Diplodon chilensis) la más baja. Los valores de delta13C sugirieron que el fitoplancton, las macrófitas emergentes, los detritos de origen terrestre y el perifiton son posibles fuentes de carbono a la trama trófica del LPM. La similitud de los valores de delta13C de los peces adultos con los macroinvertebrados, el Puyén Chico y peces juveniles, indicaría que estos organismos son sus presas potenciales, observación que fue corroborada mediante el modelo de mezcla SIAR. Según dicho modelo, el Puyén Chico fue la presa que más aportó isotópicamente a la dieta de la Trucha Arco Iris, de la Trucha de Arroyo y de la Perca Criolla, en tanto que el resto de las presas (larvas de insectos, peces juveniles, moluscos y crustáceos) contribuyeron en menor medida y con porcentajes variables dependiendo del consumidor. Estos resultados son similares a los reportados mediante el análisis de contenidos estomacales publicados para el LPM. Se analizó la variación espacial de los valores de delta13C y delta15N considerando el ME separado del MO. Se observó que la estructura general de la trama trófica es similar

Se aislaron seis genes Lhc a partir de una biblioteca genómica de papa(Solanum tuberosum). Estos genes codifican polipéptidos que formarían parte de los complejos que captan la luz que luego es utilizada en la fotosíntesis. Estos genes se hallan en tandem y están separados por regiones de 1.3-1.4 kb. Todos poseen la misma orientación 5'( 3' y cada uno de ellos tiene su propio promotor localizado 5' río arriba de la región de código. Las proteínas deducidas a partir de las secuencias de bases, poseen todos los aminoácidos característicos de las proteínas CAB del PSII, Tipo I, las cuales están codificadas por los genes Lhcb1. Por lo tanto los genes aislados fueron denominados: Lhcb1*1, Lhcb1*2, Lhcb1*3, Lhcb1*4, Lhcb1*5 y Lhcb1*6. La región codificante de estos genes posee 798 pb excepto el Lhcb1*6 el cual fue aislado en forma incompleta (411 pb). Estos genes codifican proteínas de 265 aminoácidos, incluyendo el péptido señal. Los genes estudiados poseen un 94-98 por ciento de homología en sus secuencias de bases y codifican proteínas que poseen entre un 97.5 por ciento a 99.75 por ciento de identidad. Las regiones 5' flanqueantes de los seis genes poseen secuencias conservadas y que están presentes en otros genes cuya expresión es regulada por la luz (el fragmento de 62 pb localizado entre las cajas CAAT y TATA contiene tres secuencias GATA). La expresión de los genes Lhcb1 en las plantas de papa mostró ser específica de órgano. Diferentes transcriptos fueron detectados en las hojas de las plantas mientras que solo uno se detectó en los tallos y no hubo expresión en las raíces. Se determinó el sitio de iniciación de la transcripción para el gen Lhcb1*2. El mismo esta localizado a 69 nucleótidos río arriba del codón de iniciación de la traducción (codón ATG). Los resultados indicaron que la C en la secuencia CTTCAT constituye el primer nucleótido en el ARNm correspondiente al gen Lhcb1*2. La región localizada río arriba del gen Lhcb1*2 que se extiende hasta -1300pb fue secuenciada. Esta región contiene un motivo "G" (5'TGGTTGTGTC3') localizado entre las bases -162 a -171 con respecto al sitio de iniciación de la transcripción. Recientemente fue demostrado que el factor citosólico GBF, el cual se une al motivo "G", se transloca al núcleo en presencia de luz, mientras que en la oscuridad permanece en el citoplasma (Harter et al, 1994). Las funciones regularais de la región 5' flanqueaste del gen Lhcb1*2 fueron analizadas en plantas transgénicas de tabaco. En la construcción realizada, la región promotora del gen Lhcb1*2 dirige la expresión del gen reportero uidA, el cual codifica la enzima (-glucuronidasa (GUS). El análisis de las plantas transgénicas reveló que la región 5' flanqueante (-1300 a +10) del gen Lhcb1*2 es suficiente para conferir una respuesta a la luz a través del fotoreceptor fitocromo así como también una respuesta específica de órgano. Por otra parte, la expresión del gen uidA fue detectada en las plántulas transgénicas de tabaco a partir de las 72 hs luego de la germinación de las semillas. Este resultado se correlaciona con el tiempo de maduración de los cloroplastos (Oemüller et al,1986). Además, no se detectó expresión del gen uidA cuando las plántulas de tabaco transgénicas fueron cultivadas en presencia de un herbicida que impide el desarrollo de los cloroplastos. Por lo tanto, estos resultados indican que la presencia de cloroplastos maduros es necesaria para la expresión del GUS dirigida por el promotor del gen Lhcb1*2 aislado de plantas de papa. Se realizaron deleciones de la región promotora las cuales fueron fusionadas al gen uidA. De estos experimentos se pudo concluir que la región del promotor comprendida entre las bases -690 a +10 es suficiente para conferir una respuesta específica de órgano así como también una respuesta a la luz a través del fotoreceptor fitocromo.

Introducción. El HIV es el agente causal del SIDA. Entender las formas en las que evade la respuesta inmune del hospedador es crítico para el desarrollo racional de una vacuna efectiva. Aunque la amplia extensión del tratamiento antirretroviral es capaz de impactar significativamente en los procesos naturales de selección y escape, pocos trabajos han estudiado esta temática. El objetivo de esta tesis fue identificar aquellas regiones virales sometidas a presión de selección inmune y evaluar el impacto del tratamiento antirretroviral en su selección y persistencia. Metodología y resultados. Mediante análisis estadístico se identificaron 12 mutaciones virales asociadas a escape inmune, 6 de ellas en regiones no caracterizadas previamente como epítopes. El análisis de secuencias obtenidas en los últimos 20 años de epidemia sugirió que varias de ellas han incrementado su frecuencia hasta estar presentes en la mayoría de las cepas virales actuales. La evaluación de la respuesta inmune péptido específica mostró reconocimiento principalmente de dos péptidos con restricción para el alelo HLA A02 (A02P65 y A02P84), uno para el alelo HLA A03 (A03P28) y uno para el alelo HLA B07 (B07P357). Para los dos últimos y para A02P65 se demostró que la variante de escape disminuía el reconocimiento por la respuesta inmune mientras que, para todos los casos, se evidenció la capacidad de inducir una respuesta polifuncional secretora tanto de IFN como de IL 2 y MIP 1 . Se evaluó también el nivel de agotamiento inmune y, aunque la técnica de tetrámeros presentó varios inconvenientes, se detectó una mayoría de respuesta no exhausta en los casos exitosos. La secuenciación del gen viral gag mostró la presencia de escape viral en la mayoría de los epítopes analizados y sugirió que la positividad de la respuesta inmunológica estaba asociada a una mayor afinidad del epítope por el alelo HLA que lo presenta. Al mismo tiempo, el análisis de secuencia de dicho gen viral en muestras repetidas de 50 pacientes separadas por un promedio de 3 años, demostró la presencia de recambio activo de variantes virales hacia el estado de escape durante el período de muestreo. Se encontró también que la selección activa resulta menos frecuente en los pacientes bajo tratamiento y el análisis del virus en dichos pacientes sugirió que esto sería debido a una reducción significativa de la capacidad evolutiva del virus en el contexto del tratamiento altamente efectivo. Finalmente, un análisis filogenético más profundo de las secuencias estudiadas permitió datar el inicio de la epidemia del HIV 1 en Argentina en la primera mitad de la década de 1970. Conclusiones. El presente trabajo de tesis permitió caracterizar regiones de la proteína viral Gag de frecuente reconocimiento inmune sobre las cepas del HIV 1 circulantes en nuestra región y caracterizar su dinámica a nivel poblacional a lo largo de veinte años de epidemia. El conjunto de datos obtenido de los ensayos inmunológicos confirma la aproximación estadística para identificar sitios de reconocimiento inmune demostrando respuestas citotóxicas polifuncionales mientras que el estudio de muestras seriadas en pacientes, la mayoría de ellos en estados clínicos avanzados, sugiere que la selección del escape viral se extiende más allá de los primeros momentos de la infección. En este sentido, el inicio del tratamiento puede tener un beneficio adicional al prevenir dicho escape por reducción significativa de la evolución viral.

Los receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChRs) son receptores ionotrópicos excitatorios pertenecientes a la superfamilia de receptores pentaméricos activados por ligando. Estos se forman a partir de cinco subunidades iguales o diferentes (homoméricos y heteroméricos, respectivamente). En vertebrados, los nAChRs se clasifican funcionalmente y según el sitio de expresión en neuronales y no neuronales. Los neuronales pueden ensamblarse a partir de al menos 9 subunidades diferentes por lo que su función puede ser regulada por la composición o estequiometría de las subunidades que se combinan para dar lugar a un receptor funcional. Las subunidades α9 y α10, que se expresan en las células ciliadas del oído interno y median la neurotransmisión en la sinapsis entre las fibras eferentes olivococleares y las células sensoriales del oído interno, constituyen un caso particular de nAChR, ya que no se co-ensamblan con otras subunidades de nAChRs, no se expresan en el sistema nervioso central y presentan una farmacología peculiar. Por ejemplo, la nicotina funciona como un antagonista de estos receptores. Respecto de la historia evolutiva, se ha determinado que, a diferencia de la mayoría de las subunidades de nAChRs neuronales que estuvieron sujetas a selección purificadora, la subunidad α10 sufrió selección positiva en el linaje de mamíferos. Más aún, se han determinado importantes diferencias en las propiedades biofísicas de los nAChRs α9α10 de rata y pollo. Dado que las subunidades α9 y α10 de los nAChRs son las únicas que se expresan en las células ciliadas de la cóclea y que no se ensamblan con otras subunidades nicotínicas, proponemos que la única fuente de adquisición de variantes funcionales adaptadas a las necesidades de las distintas especies de vertebrados ha sido la incorporación de sustituciones no sinónimas en la región codificante de la proteína. Por otro lado, dado que los nAChRs neuronales pueden ensamblarse a partir de diferentes subunidades presentes en el sistema nervioso central, la variabilidad funcional podría estar dada por la combinatoria de subunidades que se expresan en una región específica del cerebro en cada especie particular. Para poner a prueba esta hipótesis, hemos estudiado, en primer lugar, las propiedades biofísicas de los nAChRs recombinantes α9α10, α4β2 y α7 (estos dos últimos nAChRs neuronales de alta expresión en el CNS) de tres especies de vertebrados: Rattus novergicus (Mammalia), Gallus gallus (Sauropsida) y Xenopus tropicalis (Amphibia) utilizando la técnica de expresión heteróloga en oocitos seguida de fijación del voltaje con dos microelectrodos. Hemos determinado que, mientras que las propiedades biofísicas de los nAChR neuronales α4β2 y α7 no varían entre especies de vertebrados, las propiedades biofísicas de los nAChRs α9α10 difieren drásticamente entre especies. En segundo lugar, determinamos que las secuencias aminoacídicas de las subunidades que se expresan en el epitelio auditivo presentan mucha divergencia entre especies de vertebrados, mientras que las subunidades restantes presentan restricciones a los cambios en sus secuencias y estuvieron sujetas a selección purificadora. Por último, hemos estudiado en forma comparada los patrones de expresión espacial de varias subunidades neuronales en el cerebro de diferentes especies de amniotas. Los resultados demuestran que los patrones de expresión espacial de una misma subunidad neuronal son diferentes entre distintas especies, lo cual refleja divergencia de sus secuencias regulatorias. En conjunto, nuestros resultados apoyan la hipótesis de que la historia evolutiva de cada subunidad está determinada por los mecanismos con los que cuentan el oído interno y el cerebro para generar variabilidad funcional de los receptores nicotínicos.

En el presente trabajo se estudia la evolución de la recristalización de uranio fuerte y débilmente deformado en frío, desde dos aspectos diferentes. En la primera parte se analiza la evolución de la estructura muy fuertemente deformada en frío por laminación. La evolución de este fenómeno se siguió por medio de la micrografía y ensayos de durometría. Para cada estructura se realizaron ensayos de tracción analizándose luego las curvas correspondientes. Es estudio de las estructuras restauradas y parcialmente recristalizadas permitió descubrir y explicar interesantes anomalías en el comportamiento plástico del uranio. Estas anomalías en la ductilidad del uranio son semejantes a las encontradas en metales que cristalizan en el sistema hexagonal compacto (Zn-Mg) y en cúbico de cara centrada (Fe). Debido a la heterogeneidad de la estructura de laminado la evolución de la recistralización no es homogénea. Con recocidos cortos a baja temperatura se observa que la recristalización avanza por zonas. Así pues, en una estructura parcialmente recristalizada encontramos simultáneamente zonas restauradas y zonas recristalizadas. Estas estructuras presentan gran ductilidad, resultado obtenido en los ensayos de tracción. La deformación se realiza por zonas presentando una primer región confluencia como si actuaran granos grandes. La segunda región de endurecimiento por trabajado variable y una tercer región de gran alargamiento a carga constante. La importancia tecnológica de estas conclusiones reside en el desarrollo de un nuevo método de laminado de uranio que simplifica y abarata la operación. Después de 5 hs 450°C micrográficamente se observa una estructura totalmente recristalizada. La estructura presenta cierta clase de bandeado, nomas en que los granos están débilmente desorientados entre sí. Al aumentar la temperatura, aumenta también la desorientación entr los granos y el tamaño. Los ensayos de tracción realizados con estas estructuras muestran un cambio en el endurecimiento por trabajo durante el ensayo. Presentan poca elongación y alta carga de rotura, característica de la fragilidad del uranio. Para recocido prolongados no se observa un crecimiento exagerado de grano, fenómeno observado en uranio de puresa semejante pero distinta composición. El máximo tamaño de grano obtenido es de 40 µ ; y aumenta el factor tiempo los granos se reorientan eliminándose límites de grano de gran ángulo. Las inclusiones inhiben fuertemente el crecimiento de grano cuando la "fuerza motriz" es sólo la tensión superficial del límite de grano. Una impureza como el H2 en concentraciones tan pequeñas como 10 ppm, podría ser responsable de esta inhibición. Las curvas tensión/deformación permite ser una fluencia en su primera parte semejante a la de las estructuras parcialmente recristalizadas. Todos los estudios realizados en uranio muestran la gran importancia del método de preparación del material en su comportamiento posterior. Se estudió en detalle el efecto del recocido previo a la laminación, que son: a) recocido en fase β (30 minutos a 720°C) + 2hs a 500°C, y b) 48 hs 350°C. El recocido a) es el utilizado por muchos investigadores en la preparación del metal y el b) es el recocido preconizado en este trabajo, para la obtención de una estructura parcialmente recristalizada. Micrográficamente se observa que en el material con el recocido previo de 48 hs 350°C, la recristalización avanza más rápidamente siguiendo las mismas etapas que en el material con recocido de fase β. Por medio de los ensayos de durometría (Vickers Pyramidal Numbers) no se observa la anomalía obtenida en la ductilidad, su evolución es normal, es decir coincida con lo observado en los demás metales. En estructuras laminadas o totalmente recristalizadas (sin bandeado) la forma de la impronta es cuadrada, mientras que en estructuras bandeadas la impronta se deforma tomando forma romboédrica. En la segunda parte se analizan las condiciones para las que se inicia la recristalización en estructuras débilmente deformadas por tracción. La evolución de este fenómeno se siguió micrográficamente. Por medio de los ensayos de tracción y el análisis de las curvas tensión/deformación por el método diferencial se determinó el valor de la tensión crítica necesaria para producir recristalización. Este valor, que se obtuvo experimentalmente haciendo ensayos por aproximación en policristales de 15 µ y 40 µ coincide con el punto de transición de la curva de tracción de estructuras bien recristalizadas y tamaño de grano uniforme. La tensión correspondiente a ese punto es cercana a los 50 kg/mm observado experimentalmente y es la misma para granos grandes y monocristales. Esta tensión es independiente del porcentaje de alargamiento. En estructuras de grano la forma de la curva depende de la orientación, por lo tanto no es posible, en muchas de ellas aplicar el método diferencial. Se puede observar que los valores del alargamiento para 50 kg/mm^2 para 15 µ es de 3.25% ya que para granos de 2000 µ llega a 12.75%. Aplicando la ecuación de Ludwick se observa que los coeficientes en la parte de ordenada al origen no varían sistemáticamente con el tamaño del grano. El valor del punto de transición varía mucho con el tamaño de grano, acercándose los valores para policristales de 15 µ a 40 µ, siendo el mismo valor que el obtenido por el método diferencial.

Tesis (Doctor en Física)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Matemática, Astronomía y Física, 2010.

El proyecto presentado comprende la aplicación de técnicas de Percepción Remota y SIG en el campo de la agricultura, para la identificación, estimación, mapeo y evaluación del área cultivada con soja, Glycine max, en el partido d Mercedes de la provincia de Buenos Aires, entre las campañas agrícolas 1997/98 y 2006/07.Se utilizaron un total de seis imágenes del satélite Landsat (path/row): 225-084, permitiendo por sus fechas y empleo combinado de a pares, conjuntamente con el calendario agrícola y el trabajo de campo en la zona durante la campaña agrícola 2006/07, el estudio mencionado en el resto de las campañas.Se aplico la metodología de interpretación y análisis visual, previa aplicación de operaciones digitales sobre las imágenes como el ensanche de contraste, la selección y despliegue de la mejor composición a color multibanda para el fin propuesto, que mejoraron visualmente las imágenes Por medio del software ArcView Gis 3.2 con la extensión Image Análysis, se calculo el área con soja total del partido y por superficie de circunscripción catastral como por Unidad Cartográfica de suelo, ordenando y clasificando éstas, por sus Índice de Productividad.Se presentaron los resultados logrados con el objeto de evaluar y concluir sobre la distribución y evolución tanto en el espacio como en el tiempo del cultivo en el partido de Mercedes (B

Fil:Giambiagi, Laura Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.