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El objetivo general del presente plan de trabajo es estudiar el rol de la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo (LCR) en el transporte de la ghrelina plasmática al cerebro. Los objetivos específicos a abordar son:1) Estudiar la capacidad de las células de la barrera sangre-LCR para transportar la ghrelina circulante al cerebro. 2) Desarrollar y caracterizar un cultivo primario de tanicitos para estudios in vitro. 3) Estudiar si el transporte de ghrelina a través de la barrera sangre-LCR depende del receptor de ghrelina (GHSR). 4) Estudiar los mecanismos moleculares por los cuales la ghrelina es incorporada en los tanicitos hipotalámicos.

Los efectos de la cocaína sobre la transmisión GABAérgica del sistema tálamocortical son similares a los previamente descritos para un conjunto de patologías psiquiátricas y neurológicas englobadas bajo el nombre de síndrome de disritmia tálamocortical, que presenta coherencia anormal entre bajas y altas frecuencias a nivel tálamocortical. Se cree que la presencia de bajas frecuencias en individuos despiertos puede subyacer un procesamiento sensorial anormal. La cocaína ejerce sus propiedades en parte por el aumento en los niveles sinápticos de dopamina (DA) en los circuitos tálamocorticales somatosensoriales, seguido por el aumento de norepinefrina (NE) y serotonina (5-HT), debido a la inhibición de los transportadores encargados de la recaptación de DA (DAT), NE (NET) y 5-HT (SERT). El metilfenidato (Ritalina ®, estimulante legal para tratar el Trastorno por Déficit de Atención con Hiperactividad) bloquea DAT y NET, pero no afecta el SERT. En este trabajo de tesis se plantea un estudio comparativo de ambos psicoestimulantes a fines de dilucidar los mecanismos responsables del fenómeno de disritmia tálamocortical asociado al consumo de cocaína. En primera instancia se vio que la administración de cocaína, ya sea aguda o sub-crónica, medió incrementos en la densidad de corriente a través de canales de calcio de tipo T en las neuronas del núcleo Ventrobasal del tálamo y aumentó la frecuencia de miniaturas de GABA desde las terminales del núcleo reticular talámico, lo que sugiere anormalidades en la transmisión GABAérgica talámica. En comparación, el metilfenidato mostró efectos mucho más sutiles, lo que lleva a asociar las diferencias con la modulación serotoninérgica de la sinapsis inhibitoria entre el núcleo reticular del tálamo y el núcleo Ventrobasal, mediada por cocaína pero no por metilfenidato. A continuación, para poner a prueba dicha hipótesis, se realizaron experimentos de electrofisiología con rodajas obtenidas de animales naïve y se intentó emular los resultados de cocaína mediante la aplicación de 5-HT. Si bien este objetivo se logró, se encontró que los efectos de esta monoamina sobre la sinapsis GABAérgica en estudio siguen un curso temporal que indica que los receptores de 5-HT pueden sufrir un proceso de internalización. En conjunto los resultados obtenidos podrían contribuir a explicar la dinámica aberrante en la actividad tálamocortical de ratones tratados con cocaína, similar al síndrome de disritmia tálamocortical descrito en humanos. Las diferencias entre la cocaína y el metilfenidato a nivel tálamocortical parecen sugerir la existencia de mecanismos de homeostasis sináptica por los cuales la neurotransmisión GABAérgica desde el núcleo reticular del tálamo y las conductancias de calcio de las neuronas postsinápticas del núcleo Ventrobasal responderían aumentando la liberación espontánea de GABA y la densidad de corriente de calcio tipo T postsináptica tras el aumento transitorio de la 5-HT mediado por cocaína.

El objetivo principal de esta tesis fue avanzar en el esclarecimiento del “efecto glucosa” sobre la regulación de la biosíntesis del hemo con el propósito de elaborar nuevas y/o más eficaces terapias para el manejo de las crisis de las porfirias agudas (PAs). Con este fin se generó un modelo murino de diabetes mellitus tipo 1 y se utilizó el vanadato (V) como un agente insulino-mimético. Ratones machos CF1 fueron diabetizados con una única dosis de estreptozotocina (STZ 170 mg/kg peso) y recibieron V (0,2 mg/ml) en el agua de bebida. El estudio se prolongó 32 días a partir de la inyección de STZ. Se estudió la expresión de los ARNms de la delta aminolevulinato sintetasa (ALA-S1) y de la ferroquelatasa (FQ) así como los niveles de sus proteínas y de las proteínas participantes en la vía PI3K/Akt. En los animales diabéticos a los 32 días de inyectados con STZ el ARNm y la proteína del ALA-S1 aumentaron observándose también una caída en la fosforilación de Akt y un incremento en la formación del complejo nuclear FOXO-PGC-1α. El vanadato revirtió este efecto a través de la activación de la vía PI3K/Akt reduciendo los niveles nucleares de dicho complejo. A los 32 días de inyectados con STZ el estado diabético produjo un aumento en el ARNm de la FQ que no fue acompañado por un incremento en los niveles de su proteína mientras que el vanadato provocó una caída en ambos parámetros. La inducción del ARNm de la FQ se debió a un incremento en la O-Glicosilación de Sp1 mientras que el vanadato revirtió este efecto. De acuerdo con estos resultados, la FQ es un segundo punto de control de la vía biosintética del hemo y el V es un posible agente terapéutico para los ataques de PAs.

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa de distribución mundial ocasionada por microorganismos del género Brucella. Dichas bacterias se comportan como patógenos intracelulares facultativos capaces de sobrevivir y multiplicarse dentro de las células del sistema mononuclear fagocítico y los tejidos asociados. Esta enfermedad es zoonótica y endémica en varios países en vías de desarrollo generando un problema serio para la salud pública y para la ganadería. La infección con B. abortus activa tanto el sistema inmune innato como adaptativo generando una respuesta pro-inflamatoria que favorece la diferenciación de células T hacia un perfil Th1, con la consecuente inducción de LT CD8+ citotóxicos. A pesar de esta respuesta inmune, dicha bacteria puede persistir dentro de los macrófagos que infecta, estableciendo una infección crónica.Resultados previos de nuestro laboratorio demuestran que la infección de monocitos/macrófagos humanos con B. abortus disminuye la expresión inducida por IFN-γ de las MHC-I en superficie. Como consecuencia, los macrófagos infectados presentan disminuida capacidad de presentación antigénica a los linfocitos T CD8+. Concretamente, observamos que la disminución de MHC-I reside en la capacidad de B. abortus para retener dichas moléculas dentro del aparato de Golgi. Sin embargo, aún desconocíamos varios aspectos relevantes de dicho fenómeno, a saber: los componentes de la bacteria involucrados, los mecanismos y las posibles vías de señalización gatilladas. En este trabajo, en primer lugar, observamos que la disminución de MHC-I depende de que las bacterias estén metabólicamente activas y no así de los factores de virulencia más relevantes de las bacterias. En concordancia con esto, recientemente se describió una nueva clase de PAMPs asociados a viabilidad bacteriana, llamados vita-PAMPs, siendo el ARN procariota uno de ellos, ya que los mismos se encuentran exclusivamente en bacterias vivas y se expresan activamente durante las fases tempranas de la infección. En este trabajo de tesis demostramos que un componente responsable de la disminución de MHC-I es el ARN de B. abortus. Aún más, los productos de la digestión del ARN con una ARNasa procariota fueron también capaces de reproducir este fenómeno. Asimismo, demostramos que el receptor a partir del cual se disparan los eventos que conducen a la disminución de MHC-I es el TLR8 humano/TLR7 murino. En cuanto a la vía de señalización involucrada, demostramos que el fenómeno es disparado de manera temprana (8 horas post infección), manteniéndose incluso a las 24 y 48 horas. Asimismo, el bloqueo del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), ErbB2 (HER2) o la6inhibición de la enzima convertidora de TNF-α (TACE), involucrada en la generación de ligandos solubles tipo EGF, resultaron en una reversión parcial de la expresión en superficie de MHC-I. Por otro lado, EGF y TGF-α recombinantes fueron capaces de reproducir la disminución de MHC-I mediada por B. abortus y su ARN, siendo este efecto sinérgico. Finalmente, cuando se realizó la infección con la bacteria en presencia de un inhibidor de la vía de las MAPK ERK (Erk1/2) se revirtió significativamente la disminución de la expresión de MHC-I. Aún más, la neutralización de EGFR en las células estimuladas con ARN o ligandos sintéticos, revirtió la disminución de la expresión de MHC-I, sugiriendo también una conexión entre TLR8 y la vía de EGFR. Respecto al mecanismo de retención de MHC-I, los resultados con un inhibidor de la acidificación de las cisternas del aparato de Golgi, monensina, sugieren que una incorrecta acidificación del aparato de Golgi mediada por B. abortus podría conducir al transporte impedido de estas moléculas a la superficie. Por último, observamos que estos fenómenos tienen relevancia biológica, dado que la reducida expresión de MHC-I provoca una disminución en la funcionalidad de los LT CD8+.En conjunto, nuestros resultados establecen que el vita-PAMP ARN es un componente utilizado por B. abortus para disminuir la expresión de MHC-I, mecanismo por el cual este patógeno podría evadir el reconocimiento y la eliminación por parte de los linfocitos T citotóxicos, persistiendo en el hospedador y estableciendo una infección crónica.

Se han estudiado aquí dos métodos de determinación de la durabilidad de vidrios: uno efectúa el ataque sobre el vidrio previamente reducido a polvo, y el otro, en cambio, utiliza el objeto a analizar en su forma definitiva. En este último caso se desarrollaron dos variantes: a) ataque al baño maria, para vidrios muy alcalinos, y b) ataque al autoclave, para vidrios "tipo neutro". Se estudió también la relación entre las alcalinidades determinadas por estos dos métodos y la composición química, para lo cual se realizó el análisis de todos los vidrios utilizados en los ensayos. Se determinaron asimismo las densidades de los mismos vidrios, buscando la relación que pudiera haber con la alcalinidad y con la composición química.

En los años noventa, en la ciudad de Rafaela, provincia de Santa Fe, el surgimiento de un nuevo grupo de dirigentes, un nuevo método de gestión municipal, la dinámica del sector empresario y la potenciación del trabajo conjunto entre los distintos sectores para la definición y ejecución de políticas de desarrollo, modificaron relaciones históricas entre intereses políticos y económicos, dando lugar a una nueva visión del desarrollo local. Esta transformación se enmarcó en el proceso de reformas y cambios en las relaciones entre política y economía que tuvieron lugar durante el menemismo, pero con ciertos rasgos específicos propios de una ciudad como Rafaela, con determinado perfil económico, con determinados actores políticos y empresariales. Para llevar adelante este tópico se parte de conceptos fundamentales como la idea de cambio, para explicar las alteraciones y permanencias en las estructuras locales subyacentes, los agentes del cambio, sus acciones y sus roles; la noción de Estado local y regional, para dar cuenta de la lógica propia de la política en una dimensión más particular; y los conceptos de representación y régimen político, como determinantes en el análisis de las formas en que los agentes accedieron a la toma de decisiones y cómo se tomaron e implementan esas decisiones. La metodología de trabajo implica un estudio predominantemente cualitativo, con el agregado de algunos componentes cuantitativos. Esto incluye instancias de entrevistas, recopilación y análisis de fuentes primarias y secundarias, análisis estadístico de procesos electorales y de procesos económicos. A través de esta propuesta de investigación se intenta dar cuenta de las nuevas relaciones entre Estado, representación y base socioeconómica que tuvieron lugar en la ciudad de Rafaela durante la década de los noventa. Se trata de determinar qué nuevos vínculos se establecieron entre el Estado local o municipal, un sistema de partidos renovado y una determinada estructura socioeconómica en la que operaron diferentes actores sociales, especialmente sectores del empresariado. Todo esto articulado por el régimen político, simiente de estas nuevas relaciones en esta localidad.

El Neotrópico posee la avifauna más diversa del mundo con más de 3.000 especies que se reproducen en sus tierras. Gran parte de esta diversidad se encuentra concentrada en sus ambientes selváticos, entre los cuales se incluyen la Selva Atlántica y las Yungas y su transición con la selva Amazónica. En esta tesis se estudiaron los patrones y procesos responsables de la diversificación de las aves neotropicales a través del análisis de tres especies de Passeriformes de ambientes selváticos sudamericanos: Habia rubica (Cardinalidae), Ramphotrigon megacephalum (Tyrannidae) y Pipraeidea melanonota (Thraupidae). Las tres especies poseen distribuciones disyuntas que incluyen poblaciones alopátricas en la Selva Atlántica y el complejo Yungas-Amazonas, y a su vez representan algunas de las principales radiaciones de Passeriformes del Neotrópico. Se utilizó un enfoque integrador, combinando análisis genéticos (marcadores nucleares y mitocondriales) con el estudio de la variación fenotípica (coloración del plumaje) y comportamental (vocalizaciones). Los resultados sugieren que las historias evolutivas de estas especies han sido afectadas de distinta forma por un factor común: el establecimiento del corredor de vegetación abierta que aisla actualmente a la Selva Atlántica del complejo Yungas-Amazonas. No obstante, la diversificación de cada una de estas especies evidenció, al mismo tiempo, ciertos atributos idiosincráticos, sugiriendo que sus historias evolutivas han sido moldeadas por factores tanto compartidos como específicos de las mismas. Las diferencias en las historias evolutivas de estas tres especies podrían asociarse a sus ecologías contrastantes. En conclusión, esta tesis sustenta la idea de que la diversificación de la avifauna neotropical no puede ser restringida a una única ventana temporal ni explicada a través de uno o unos pocos mecanismos evolutivos. PALABRAS CLAVE: Amazonas, Ambientes selváticos, Aves, Canto, Citocromo b, COI, Coloración, Diversificación, Especiación, Filogenética, Filogeografía, Habia rubica, Neotrópico, Pipraeidea melanonota, Ramphotrigon megacephalum, Selva Atlántica, Yungas.

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En este Trabajo de Tesis se estudiaron los polisacáridos del alga roja Polysiphonia nigrescens, recolectada en las costas de Cabo Corrientes (Mar del Plata). Este alga biosintetiza agaranos sulfatados parcialmente ciclados y altamente sustituidos en C-6, principalmente con sulfato, aunque también se han encontrado éteres metílicos y ramificaciones simples de β-D-xilosa. Las dos díadas presentes en los galactanos de esta especie son: G6S→L6S (precursora) y G6S→LA. También se aisló una fracción compuesta por agarosa sulfatada. Además se sintetizaron agarosas cationizadas de distinto grado de sustitución (0,04-0,77), empleando cloruro de 3-cloro-2-hidroxipropil trimetilamonio. Se evaluaron diferentes parámetros de la reacción sobre el grado de sustitución y el peso molecular: concentración de reactivos, temperatura, tiempo y el agregado de NaBH4. Los productos se caracterizaron mediante microscopía electrónica de barrido, FT-IR, viscosimetría y RMN. Productos de metanólisis se estudiaron por espectrometría de masa ESI. Algunas agarosas cationizadas, se desempeñaron en la floculación de coloides de manera comparable a poliacrilamidas comerciales. Finalmente, se prepararon los siguientes complejos interpolielectrolito (IPECs) estequimétricos: eudragit E - carragenano kappa, almidón cationizado - carragenano kappa, eudragit E - agaranos de P. nigrescens y agarosa cationizada - agaranos de P. nigrescens. Se estudiaron dichos IPECs: turbidimetría, análisis elemental, FT-IR, microscopía electrónica de barrido y óptica, área superficial, ángulo de reposo, perfil de compactabilidad e hinchamiento. Se prepararon comprimidos por compresión directa, constituidos por los IPECs e ibuprofeno como droga modelo. Los perfiles de liberación de la droga ajustaron adecuadamente a dos modelos matemáticos, presentando cinéticas cercanas a orden cero.

Fil:Slezak de Fernández, Verónica Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.