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El Síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune crónica que se caracteriza por una progresiva disfunción secretoria con escasa correlación con el daño tisular en las glándulas. No hay evidencias claras sobre su patogenia y el tratamiento es sintomático con un alivio meramente marginal. Se ha propuesto que previo al ataque autoinmune hay una pérdida en el equilibrio homeostático de las glándulas con activación de células acinares que podrían aumentar la susceptibilidad del tejido a una respuesta autoinmune. Los ratones diabéticos no obesos (NOD) son un modelo muy interesante para estudiar el SS ya que desarrollan una disfunción secretoria con pérdida de temprana de la homeostasis glandular con una moderada infiltración linfocitaria. Los macrófagos, son células plásticas, que tienen un papel central en el mantenimiento de la homeostasis tisular por su función fagocítica para la remoción de productos de degradación y células apoptóticas, función que realizan en forma ‘silenciosa’ y rápida evitando una respuesta inflamatoria deletérea. El péptido intestinal vasoactivo (VIP) es un neurotransmisor autonómico pro‐secretorio y vasodilatador, que tiene efecto trófico sobre acinos y, junto a sus receptores VPAC, se localiza en células inmunes con un marcado efecto anti‐inflamatorio e inmunomodulador. Basados en los efectos pro‐secretorios y tróficos del VIP sobre los acinos como de sus propiedades anti‐inflamatorias hipotetizamos que la liberación local de VIP por diversos tipos celulares podría modular procesos apoptóticos e inflamatorios en la interacción de células inmunes con células epiteliales contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis tisular glandular. Asimismo, hipotetizamos que estos mecanismos modulados por VIP se verían alterados en condiciones de ruptura de la homeostasis tisular. En este trabajo en primer lugar se estudio el papel del VIP en el mantenimiento de la homeostasis glandular en el modelo murino NOD. Se observo que hay una disminución en la expresión de VIP en las glándulas salivales de ratones NOD que no se observa en la cepa control. La pérdida en la expresión del VIP endógeno se ve asociada con la pérdida de células acinares. Por otro lado, el ‘clearance’ de acinos apoptóticos por macrófagos se encuentra desregulado en los macrófagos NOD. Sin embargo durante el proceso fagocítico dichos macrófagos adquieren un perfil alternativo de activación. Finalmente, se analizó la contribución del sistema VIP/VPAC en un modelo in vitro de co‐cultivo de células mononucleares totales o monocitos de pacientes con síndrome de Sjögren y células epiteliales de glándula submaxilar (HSG). En primer lugar caracterizamos el sistema VIP/VPAC en monocitos y su capacidad fagocítica de células HSG apoptóticas donde observamos que los monocitos de pacientes con SS presentan incrementada la expresión del receptor VPAC2 ausente en los monocitos controles y su capacidad fagocítica se ve alterada. No solo fagocitan en menor cantidad sino que adquieren un perfil fenotípico inflamatorio que no puede ser modulado por VIP. En los co‐cultivos se estudió el perfil funcional y fenotípico de ambos tipos celulares luego de la interacción. Nuestros resultados indican que la interacción puede modular tanto a las células epiteliales como a los monocitos contribuyendo a la generación de un microambiente proinflamatorio, donde el VIP fue capaz de modular parcialmente dicho microambiente.

El objetivo del presente trabajo de tesis es contribuir en el hallazgo de compuestos terapéuticos frente a la enfermedad de la diarrea viral bovina (DVB) y a las parasitosis debidas a Trypanosoma cruzi y Trypanosoma brucei. Para cumplir con dicho objetivo, se realizó un estudio exhaustivo y multidisciplinario que comprendió la síntesis, evaluación biológica y estudios computacionales de tiosemicarbazonas de 1-indanonas N 4 -aril sustituidas (N 4 -TSCs). Se sintetizaron y caracterizaron 30 N 4 -TSCs, de las cuales 24 son descriptas por primera vez en el marco de esta tesis. Los compuestos preparados poseen diferentes sustituyentes en el núcleo indánico y en la posición para del arilo unido al N 4 con el fin de evaluar la variación de la actividad según el patrón de sustitución. La síntesis fue llevada a cabo mediante dos metodologías, una convencional y otra utilizando tecnología de microondas, por lo cual se pudo determinar qué método resulta más ventajoso según tiempos y rendimientos de reacción. Se determinaron las actividades de las N 4 -TSCs frente al virus de la DVB (VDVB), a partir de las cuales se realizó un estudio de la relación estructura-actividad en el que se identificaron patrones estructurales claves para la actividad de las N 4 -TSCs como agentes anti-VDVB. El compuesto más activo fue identificado como probable inhibidor de la ARN polimerasa viral dependiente de ARN por lo cual se llevaron a cabo estudios computacionales de docking y de dinámica molecular con esta enzima. Los resultados computacionales obtenidos permitieron conocer en detalle las características de esta serie de compuestos que serían determinantes para su actividad. Por otro lado, se llevó a cabo la evaluación de las N 4 -TSCs frente a T. cruzi para las formas epimastigote, tripomastigote y amastigote. Los resultados obtenidos mostraron que cuatro compuestos fueron activos frente a los tres estadios del parásito. De acuerdo a los antecedentes en literatura para este tipo de compuestos como inhibidores de la enzima cruzipaína, varias N 4 -TSCs fueron evaluadas frente a esta enzima. Los compuestos no mostraron ser inhibidores de la cruzipaína. Se llevaron a cabo estudios in vitro frente a T. brucei, los cuales mostraron que varios compuestos fueron activos frente al parásito. Uno de los derivados (N 4 -TSC 8) se destacó por su potencia y se estudió su capacidad de inhibir las proteasas del parásito. Los resultados indicaron que estas enzimas no serían el blanco de acción del compuesto. Teniendo en cuenta los valores de actividad se realizó un estudio de relación estructuraactividad cuantitativa (QSAR), el cual permitió establecer una posible conformación activa y determinar las propiedades de las cuales dependería la actividad biológica estudiada. Asimismo, mediante distintos ensayos se estudió por citometría de flujo el tipo de muerte celular que induce el compuesto 8 en T. brucei. Los resultados indicaron que el compuesto desencadena en los parásitos un proceso similar a la apoptosis. Por otro lado, se evaluó la citotoxicidad de todos los compuestos sobre células de mamífero, no evidenciándose efectos tóxicos a las máximas concentraciones que pudieron ser investigadas las N 4 -TSCs. A partir de los resultados de la presente tesis se identificaron compuestos activos como antivirales y antiparasitarios, se estudió la relación estructura-actividad, se realizaron estudios del mecanismo de acción y del tipo de muerte celular. Asimismo, se generaron modelos teóricos de QSAR, y se llevaron a cabo estudios de docking y dinámica molecular que permitieron conocer las características moleculares que estarían implicadas en la acción de estos compuestos. Finalmente, los resultados alcanzados permiten sentar bases para continuar con el diseño de nuevas moléculas antivirales y antiparasitarias. La información obtenida podrá ser aplicada en otras estrategias de la Química Medicinal como el cribado virtual de librerías de compuestos y la posterior farmacomodulación de los candidatos más prometedores para el tratamiento de la enfermedad de la DVB y las tripanosomiasis.

El presente trabajo de Tesis Doctoral, se centró en el desarrollo de nuevas Plataformas de Liberación de Fármacos (PLFs) basadas en nanotecnología como estrategia de optimización de la farmacoterapia relacionada a patologías oculares neovasculares. El trabajo comprendió, la obtención de nanocápsulas lipídicas para la vehiculización de acetónido de triamcinolona y bevacizumab, abordando la terapia convencional para el tratamiento de estas patologías. Además, se estudió el efecto de doxiciclina clorhidrato sobre la angiogénesis como terapia alternativa. En cuanto al desarrollo tecnológico, por un lado, se obtuvieron nanocápsulas lipídicas cargadas con acetónido de triamcinolona (NCLs-TA) mediante el método de inversión de fases, luego de un estudio acabado sobre la composición, incorporación del fármaco y estabilidad de la formulación. Las NCLs-TA mostraron un tamaño medio de partícula (TMP) menor a 50 nm, una distribución estrecha de tamaño y un potencial zeta (PZ) levemente negativo. Además, las NCLs-TA no resultaron citotóxicas en Células Epiteliales de Córnea Humana y, mostraron una reducción de la secreción de interleuquina (IL)-6 en un modelo de eficacia terapéutica in-vitro, a partir del cual se puede inferir la efectividad de su efecto antiinflamatorio. Por otro lado, se obtuvieron nanocápsulas lipídicas cargadas con bevacizumab (NCLs-BVZ) a partir de 1,5 mg; 2,5 mg y 3,0 mg inicales de anticuerpo, mediante el método de post-inserción. Las formulaciones mostraron un TMP entre 123 y 314 nm, un índice de polidispersidad entre 0,23 y 0,39; un PZ entre -28 y -14 mV, y una capacidad de carga de anticuerpo entre 1,30 y 2,94 mg. Las NCLs-BVZ demostraron la capacidad de bevacizumab de unión a su antígeno (Factor de Crecimiento de Endotelio Vascular) in-vitro y, una reducción de la formación de túbulos en un estudio de angiogénesis in-vitro, a partir del cual se puede inferir su efecto antiangiogénico. Por último, en el estudio de prueba de concepto del efecto antiangiogénico de doxiciclina clorhidrato, se demostró que este fármaco reduce la secreción de metaloproteinasas de matriz tanto en estudios in-vitro como en homogenatos de retina provenientes de estudios in-vivo y, además, demostró la reducción de formación de túbulos en un estudio de angiogénesis in-vitro. En este trabajo, tanto la mejora de la terapia convencional de enfermedades oculares neovasculares como la exploración de nuevas terapias alternativas se abordaron con éxito. En este sentido, ambas formulaciones de nanocápsulas lipídicas como el nuevo fármaco alternativo ensayado pueden ser una estrategia interesante para mejorar la efectividad y la seguridad de los tratatmientos de las enfermedades oculares neovasculares.