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El objetivo general de este trabajo es conocer la dinámica de las comunidades de artrópodos asociados a bosques de Nothofagus antartica (Ñire) del centro-oeste de Chubut, afectados por diferentes tipos de impactos. Los objetivos específicos del trabajo fueron: realizar el inventario de la fauna de artrópodos representada en ñirantales del centro-oeste de Chubut, determinando la riqueza específica de cada grupo; caracterizar la estructura de las comunidades de artrópodos asociadas a ñirantales sometidos a diferentes impactos ambientales; determinar la magnitud de los cambios intra- e inter-anuales en la estructura de la comunidad de artrópodos y evaluar el grado de interrelación de los artrópodos entre sí y con la estructura de la vegetación. El estudio se desarrolló entre julio de 2008 y mayo de 2010, realizándose muestreos de campo trimestrales (aproximadamente durante el período central de cada estación) y a lo largo de dos ciclos anuales. Se identificaron, localizaron y tipificaron sectores de bosque de Ñire afectados por diferentes tipos de impacto ambiental. Los tipos de perturbaciones seleccionados fueron: extracción de leña por manchones y por parquizado, conversión del bosque en pastura, e incendios sufridos hace 15 y 25 años. A modo de testigo, se consideraron fracciones de bosque virgen sin manejo. Por cada tipo de impacto se consideraron dos réplicas (en total 12 sitios de muestreo) separadas por una distancia superior a 1.500 metros. Los puntos de muestreos de artrópodos de los diferentes sitios de muestreo fueron seleccionados al azar. Para las capturas se utilizaron trampas “fluid interception”, “sticky traps” (trampas pegajosas) y se obtuvieron muestras del dosel de la vegetación y del suelo mediante el uso de sacabocados. A partir del material recolectado en los muestreos de artrópodos se estimaron parámetros tales como Rangos de Abundancia y Biodiversidad Específica (Índice de Shannon-Wiener, Índice de Equitatividad, Índice de Simpson). Para todos los casos en que se realizaron comparaciones se utilizó el número de individuos. Para evaluar si existen diferencias entre los atributos de las comunidades de artrópodos de distintos ñirantales se realizaron ANOVAs univariados con el programa Infostat (versión 2012) con pruebas a posteriori cuando las diferencias fueron significativas. Para revelar la importancia relativa de un factor ambiental o de varios factores ambientales sobre las comunidades estudiadas se realizaron análisis exploratorios tales como test paramétricos o no paramétricos. Se realizó una prueba de ANOVA (estadístico F) con prueba a posteriori (Newman – Keuls [N-K]; p<0,05) para determinar la existencia de diferencias significativas entre los años, entre las estaciones del año, entre los tipos de perturbación y la combinación entre ellos. El análisis estacional y la comparación inter-anual de la información permitieron determinar cómo los cambios en la estructura y composición de los tipos de perturbación asociados a los sitios de muestreo afectan a las comunidades de artrópodos a través de cambios en la estructura del bosque. El número de individuos pertenecientes a cada orden en cada tipo de impacto fue utilizado para realizar ordenamientos por Análisis de Correspondencia (DCA), con el objetivo de establecer relaciones entre los ambientes estudiados basadas en la diversidad de artrópodos y agrupar éstos sitios de acuerdo a su similitud interna. Además, el número de individuos y la presencia o ausencia de cada orden en cada tipo de perturbación se utilizó para realizar clasificaciones aglomerativas por métodos de agrupamiento de enlace completo, calculándose distancias euclidianas por el método del centroide, las que tuvieron como objetivo establecer relaciones entre los ambientes estudiados basadas en la diversidad de los artrópodos representados en las capturas. Las principales perturbaciones asociadas a los sitios de estudio determinaron la composición florística y riqueza de la vegetación y, en consecuencia, el estado de conservación de los ñirantales. Los sitios testigo con bosque virgen sin manejo considerados en este estudio presentaron un estrato arbóreo dominado por especies de origen nativo tales como Nothofagus antárctica (Ñire) y Maytenus boaria (Maitén); también en el estrato arbustivo predominaron especies de origen nativo, tales como Schinus patagonicus, Ribes sp., Berberis parodii, y lo mismo fue observado en el estrato herbáceo en que las especies nativas predominantes fueron Stipa sp., Bromus sp., Viola maculata y Valeria carnosa, entre otras. Estos ñirantales presentaron un estado de conservación adecuado y/u óptimo, lo cual permite la preservación de su variabilidad espacial y estacional. En el estrato arbóreo de los sitios perturbados por incendios se observó una clara disminución de especies de origen nativo y un mayor porcentaje de especies de origen exótico, tales como el arbusto Rosa eglanteria (Rosa mosqueta). En dichos sitios el estado sanitario de los Ñires fue en general bueno, aunque el diámetro de los árboles fue bajo, lo que se corresponde con el estado de regeneración de los individuos. En el estrato arbóreo de los sitios con extracción de leña por manchones y por parquizado predominaron especies pertenecientes al estrato arbóreo de origen nativo tales como Ñire y Maitén. Estos Ñires presentaron un estado sanitario muy bueno y un tamaño relativamente grande, aunque no se registraron renovales, lo que sugiere que las prácticas allí realizadas (extracción de leña y actividades ganaderas) no favorecen el renuevo del bosque y que comprometen seriamente su rehabilitación natural. En los estratos herbáceo y arbustivo de estos sitios se observaron especies tales como Bromus sp., Schinus patagonicus, Poa ligularis y Senecio sp., entre otras, las que son propias de ambientes abiertos. Los sitios convertidos a pastura presentaron la mayor cobertura de especies herbáceas de origen nativo, características de zonas de explotación ganadera, tales como Stipa sp., Azorella trifoliolata, Poa ligularis, Madia sativa, entre otras. Allí no se registraron especies pertenecientes al estrato arbóreo, lo cual implica que la regeneración y rehabilitación del bosque se encuentra seriamente comprometida. En términos generales, se observó que los artrópodos asociados a los ñirantales considerados en este trabajo se mantuvieron activos durante todo el año, tolerando condiciones extremas durante los meses fríos y presentando picos de actividad durante los meses más cálidos. Los sitios de muestreo asociados a diferentes tipos de impacto presentaron características propias en cuanto a la composición florística y arquitectura de las plantas presentes y, en sintonía con ello, se observaron diferencias en la abundancia de los órdenes representados en los sitios sometidos a diferentes tipos de perturbación. Los análisis de ordenamiento permitieron diferenciar el agrupamiento de los órdenes según el tipo de impacto al que fueron sometidos los sitios. En relación a ello, es interesante destacar que los sitios prístinos presentaron mayor cantidad de individuos que los sitios perturbados, los que a su vez presentaron similitudes en relación al número de individuos y órdenes representados en las capturas. Se observó que, en comparación con los sitios vírgenes, la extracción de leña por parquizado y por manchones generó cambios en el número de individuos de los órdenes representados en las capturas. La riqueza de órdenes fue similar entre los ambientes sometidos a extracción de leña y los sitios vírgenes, lo cual puede deberse a que muchos de éstos artrópodos son generalistas y logran persistir ante los cambios ocasionados en el ambiente. Los resultados sugieren que las diferentes técnicas de extracción de leña consideradas en este trabajo no afectan de modo diferente la estructura de la comunidad de artrópodos. Lamentablemente, no fue posible comparar las estructuras de las comunidades de artrópodos antes y después de los incendios, por lo que no se puede tener certeza acerca de si tales eventos modificaron o no las estructuras de las comunidades pre-existentes en dichos sitios. Sin embargo, al comparar los sitios incendiados con los sitios vírgenes sin explotación se observó que la abundancia de los órdenes representados en las capturas presentaron diferencias, por lo que se puede especular que las estructuras de las comunidades de artrópodos fueron afectadas por los incendios, observándose mayor abundancia y riqueza de órdenes en sitios no afectados por el fuego que mantuvieron mayor cobertura arbórea y arbustiva. Los factores climáticos incidieron fuertemente sobre la diversidad y la abundancia de los artrópodos asociados a los bosques de Ñire considerados. La estacionalidad observada en la abundancia de los órdenes de artrópodos representados en las capturas y en los índices de diversidad y dominancia, estaría en estrecha relación con la temperatura del ambiente y, en menor medida, con el régimen de precipitaciones. La relación positiva entre la temperatura y el número de individuos de los órdenes representados en las capturas se observó en todos los sitios de muestreo, con excepción de los sitios convertidos a pastura. En los sitios convertidos a pasturas se observó una relación inversa entre el número de individuos y la diversidad de órdenes en las capturas y la temperatura. Estos incrementos relativos en la temperatura son consecuencia directa de los cambios producidos en las estructuras vegetales, debido a que al eliminarse la cobertura arbórea la temperatura aumenta. La abundancia de individuos de los órdenes representados en las capturas estuvo positivamente correlacionada con la cobertura del estrato arbóreo. La preferencia de los artrópodos por ambientes con mayor cobertura vegetal se debería a la mayor disponibilidad de alimento, refugio y otras condiciones asociadas a la cobertura de la vegetación. Dado que se observó una mayor abundancia de individuos en los sitios vírgenes, los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que las perturbaciones asociadas a los sitios de muestreo pueden afectar de manera significativa la abundancia y diversidad de artrópodos. La eliminación del estrato arbóreo, y el consecuente incremento de los estratos arbustivo y herbáceo, resulta en la disminución de hábitats favorables, generando también cambios en las condiciones climáticas (principalmente el incremento de la temperatura), aumento en la presión de predación, entre otros factores, lo cual afecta negativamente la abundancia de artrópodos. Los órdenes de artrópodos dominantes en todos los sitios de muestreo fueron dípteros, coleópteros, homópteros e himenópteros. En relación a las técnicas de muestreo, en este estudio se observó que las muestras provenientes de las trampas “sticky traps”, “fluid interception”, y del dosel de la vegetación capturaron una mayor cantidad de individuos pertenecientes al orden Diptera, lo que se debería a que estas trampas son más eficientes en la captura de individuos voladores. Las muestras provenientes de las trampas “fluid interception”, del suelo y del dosel de la vegetación fueron más abundantes y diversas que las provenientes de las trampas “sticky traps”. Según los resultados aquí presentados puede considerarse que la mayoría de los artrópodos representados en los sitios de muestreo, son capaces de sobrevivir en áreas afectadas y modificadas por perturbaciones, siempre que se logre mantener y recuperar la cobertura de los estratos, principalmente el arbóreo. El reemplazo del estrato arbóreo por especies arbustivas y especies herbáceas en zonas utilizadas para pasturas y extracción de leña o perturbadas por incendios afecta drásticamente la dinámica comunitaria de los artrópodos dado que estas zonas quedan expuestas a condiciones climáticas rigurosas. Es imprescindible mantener bosques vírgenes sin manejo que incluyan características propias y específicas, tales como refugios contra depredadores, condiciones micro-climáticas adecuadas para el crecimiento y desarrollo de los individuos, disponibilidad de recursos, entre otras, ya que permiten el mantenimiento de la biodiversidad original del ecosistema. La conservación de los bosques del sur de Argentina requiere de esfuerzos conjuntos entre diferentes actores, tales como las instituciones técnico-científicas, agencias de gobierno y la comunidad, tendientes a la elaboración de propuestas superadoras de los modelos de producción que afectan el medio ambiente.

Tesis presentada para optar al Grado de Doctor en Ciencias Naturales

Fil:Mariscotti, Mario Alberto Juan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Hipótesis: - La comunidad microbiana de un suelo limpio cambia debido a la contaminación con una mezcla compleja de hidrocarburos. - Dicho cambio esta relacionado con la carga inicial del contaminante. - La comunidad microbiana de sistemas contaminados se modifica durante un proceso de biorremediación. - La comunidad del suelo restablece sus condiciones originales al desaparecer el contaminante. Objetivo general: Estudiar los cambios producidos en la comunidad microbiana de un suelo limpio como consecuencia de la contaminación con un residuo petroquímico y durante el proceso de biorremediación. Evaluar la capacidad de biorestauración del suelo una vez finalizado el tratamiento. En forma particular, se plantearon los siguientes objetivos: a) Analizar la composición microbiológica del residuo petroquímico API, con el fin de determinar si los grupos microbianos predominantes intervienen en el proceso de biorremediación del residuo en suelo. b) Determinar la cinética de eliminación de los hidrocarburos durante el proceso de biorremediación, su influencia sobre la dinámica de las poblaciones microbianas cultivables y sobre la actividad de la comunidad microbiana completa, en suelo limpio y sistemas contaminados con distintas concentraciones del residuo petroquímico. c) Analizar los cambios en la estructura de las comunidades microbianas mediante técnicas convencionales de aislamiento e identificación de los grupos dominantes en puntos seleccionados durante el tratamiento, y mediante técnicas cultivo independiente. d) Evaluar el grado de restauración alcanzado comparando la estructura y función de las comunidades establecidas al finalizar el proceso de biorremediación con la comunidad del suelo limpio.

Fil:Davidson, Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Universidad Nacional de Quilmes. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas (LEPP).

El estudio de la estructura y la dinámica de las tramas tróficas ayuda a comprender el funcionamiento de un ambiente acuático, a interpretar el modo en que los componentes del mismo se interrelacionan, y a evaluar la importancia relativa de las fuentes de energía pelágica y bentónica, entre otros aspectos. A pesar de la relevancia de desarrollar dicho tipo de estudios, la información previa sobre la estructura de la trama trófica del Lago Perito Moreno (LPM) es escasa y fragmentaria. A causa de esto resulta imprescindible desarrollar un estudio integral de la trama trófica del LPM que integre información de la totalidad de sus componentes. Estudios previos en lagos de los Parques Nacionales Nahuel Huapi (PNNH) y Los Alerces mostraron contenidos significativos de mercurio (Hg) en peces nativos e introducidos, si bien el área está alejada de las posibles fuentes antropogénicas de emisiones de este elemento contaminante. Por lo tanto, es fundamental el análisis de la transferencia de Hg en la trama trófica de los lagos de la región, y el LPM es el sistema ideal para un estudio preliminar de este tipo, principalmente debido a su menor tamaño en relación a otros lagos de la región con tramas tróficas similares y su accesibilidad. El análisis de los isótopos estables de carbono (delta13C) y nitrógeno (delta15N) es una herramienta de uso habitual en el estudio de la estructura de las tramas tróficas en ambientes acuáticos dado puede brindar información sobre flujos de energía, relaciones tróficas, patrones migratorios de peces, variaciones temporales y espaciales y ontogenéticas en la dieta de macroinvertebrados y peces, aportes antropogénicos al sistema y estimaciones de tasas de transferencia de elementos contaminantes como el mercurio en la trama trófica. Debido a sus múltiples aplicaciones, el uso esta técnica será de suma utilidad para analizar la trama trófica del LPM y la transferencia de Hg en la misma. El LPM está localizado en el PNNH. Es un lago ultraoligotrófico, de origen glacial, y está dividido en tres cuerpos de agua conectados entre sí (Moreno Este (ME), Moreno Oeste (MO) y Morenito), los cuales presentan características diferentes. Para analizar la trama trófica de este sistema, en el ME y en el MO se realizaron muestreos estacionales de perifiton, macrófitas, material proveniente del ambiente terrestre, plankton macroinvertebrados y peces. Las muestras fueron analizadas mediante Espectrometría de Masa de Relaciones Isotópicas y por Análisis por Activación Neutrónica Instrumental para obtener los valores de delta13C y de delta15N y las concentraciones de mercurio total (THg) y selenio (Se), respectivamente. Los valores de los isótopos estables de nitrógeno, mostraron un incremento desde los niveles tróficos inferiores (macrófitas y el perifiton) hasta los intermedios (plancton y macroinvertebrados) y los superiores (peces). Dentro de la comunidad de peces, los salmónidos introducidos y la especie nativa Percichthys trucha (Perca Criolla) ocuparon la posición trófica más alta, en tanto que las especies nativas Galaxias maculatus (Puyén Chico) y Olivaichthys viedmensis (Bagre Aterciopelado) se situaron en la más baja. Asimismo, la fracción de plancton de mayor tamaño (F3: > 200 micrómetros) se ubicó en un nivel trófico más elevado que las dos fracciones de menor tamaño (F1: (10 - 53) micrómetros; F2: (53 - 200) micrómetros). Dentro de la comunidad de los macroinvertebrados bentónicos, los hirudíneos, y los crustáceos decápodos Aegla sp. y Samastacus spinifrons presentaron la posición trófica más alta; Hyalella sp. y las larvas de insectos (tricópteros, plecópteros, odonatos y efemerópteros) mostraron una posición trófica intermedia, y los oligoquetos, larvas de quironómidos y moluscos (Chilina sp. y Diplodon chilensis) la más baja. Los valores de delta13C sugirieron que el fitoplancton, las macrófitas emergentes, los detritos de origen terrestre y el perifiton son posibles fuentes de carbono a la trama trófica del LPM. La similitud de los valores de delta13C de los peces adultos con los macroinvertebrados, el Puyén Chico y peces juveniles, indicaría que estos organismos son sus presas potenciales, observación que fue corroborada mediante el modelo de mezcla SIAR. Según dicho modelo, el Puyén Chico fue la presa que más aportó isotópicamente a la dieta de la Trucha Arco Iris, de la Trucha de Arroyo y de la Perca Criolla, en tanto que el resto de las presas (larvas de insectos, peces juveniles, moluscos y crustáceos) contribuyeron en menor medida y con porcentajes variables dependiendo del consumidor. Estos resultados son similares a los reportados mediante el análisis de contenidos estomacales publicados para el LPM. Se analizó la variación espacial de los valores de delta13C y delta15N considerando el ME separado del MO. Se observó que la estructura general de la trama trófica es similar

Se aislaron seis genes Lhc a partir de una biblioteca genómica de papa(Solanum tuberosum). Estos genes codifican polipéptidos que formarían parte de los complejos que captan la luz que luego es utilizada en la fotosíntesis. Estos genes se hallan en tandem y están separados por regiones de 1.3-1.4 kb. Todos poseen la misma orientación 5'( 3' y cada uno de ellos tiene su propio promotor localizado 5' río arriba de la región de código. Las proteínas deducidas a partir de las secuencias de bases, poseen todos los aminoácidos característicos de las proteínas CAB del PSII, Tipo I, las cuales están codificadas por los genes Lhcb1. Por lo tanto los genes aislados fueron denominados: Lhcb1*1, Lhcb1*2, Lhcb1*3, Lhcb1*4, Lhcb1*5 y Lhcb1*6. La región codificante de estos genes posee 798 pb excepto el Lhcb1*6 el cual fue aislado en forma incompleta (411 pb). Estos genes codifican proteínas de 265 aminoácidos, incluyendo el péptido señal. Los genes estudiados poseen un 94-98 por ciento de homología en sus secuencias de bases y codifican proteínas que poseen entre un 97.5 por ciento a 99.75 por ciento de identidad. Las regiones 5' flanqueantes de los seis genes poseen secuencias conservadas y que están presentes en otros genes cuya expresión es regulada por la luz (el fragmento de 62 pb localizado entre las cajas CAAT y TATA contiene tres secuencias GATA). La expresión de los genes Lhcb1 en las plantas de papa mostró ser específica de órgano. Diferentes transcriptos fueron detectados en las hojas de las plantas mientras que solo uno se detectó en los tallos y no hubo expresión en las raíces. Se determinó el sitio de iniciación de la transcripción para el gen Lhcb1*2. El mismo esta localizado a 69 nucleótidos río arriba del codón de iniciación de la traducción (codón ATG). Los resultados indicaron que la C en la secuencia CTTCAT constituye el primer nucleótido en el ARNm correspondiente al gen Lhcb1*2. La región localizada río arriba del gen Lhcb1*2 que se extiende hasta -1300pb fue secuenciada. Esta región contiene un motivo "G" (5'TGGTTGTGTC3') localizado entre las bases -162 a -171 con respecto al sitio de iniciación de la transcripción. Recientemente fue demostrado que el factor citosólico GBF, el cual se une al motivo "G", se transloca al núcleo en presencia de luz, mientras que en la oscuridad permanece en el citoplasma (Harter et al, 1994). Las funciones regularais de la región 5' flanqueaste del gen Lhcb1*2 fueron analizadas en plantas transgénicas de tabaco. En la construcción realizada, la región promotora del gen Lhcb1*2 dirige la expresión del gen reportero uidA, el cual codifica la enzima (-glucuronidasa (GUS). El análisis de las plantas transgénicas reveló que la región 5' flanqueante (-1300 a +10) del gen Lhcb1*2 es suficiente para conferir una respuesta a la luz a través del fotoreceptor fitocromo así como también una respuesta específica de órgano. Por otra parte, la expresión del gen uidA fue detectada en las plántulas transgénicas de tabaco a partir de las 72 hs luego de la germinación de las semillas. Este resultado se correlaciona con el tiempo de maduración de los cloroplastos (Oemüller et al,1986). Además, no se detectó expresión del gen uidA cuando las plántulas de tabaco transgénicas fueron cultivadas en presencia de un herbicida que impide el desarrollo de los cloroplastos. Por lo tanto, estos resultados indican que la presencia de cloroplastos maduros es necesaria para la expresión del GUS dirigida por el promotor del gen Lhcb1*2 aislado de plantas de papa. Se realizaron deleciones de la región promotora las cuales fueron fusionadas al gen uidA. De estos experimentos se pudo concluir que la región del promotor comprendida entre las bases -690 a +10 es suficiente para conferir una respuesta específica de órgano así como también una respuesta a la luz a través del fotoreceptor fitocromo.

Introducción. El HIV es el agente causal del SIDA. Entender las formas en las que evade la respuesta inmune del hospedador es crítico para el desarrollo racional de una vacuna efectiva. Aunque la amplia extensión del tratamiento antirretroviral es capaz de impactar significativamente en los procesos naturales de selección y escape, pocos trabajos han estudiado esta temática. El objetivo de esta tesis fue identificar aquellas regiones virales sometidas a presión de selección inmune y evaluar el impacto del tratamiento antirretroviral en su selección y persistencia. Metodología y resultados. Mediante análisis estadístico se identificaron 12 mutaciones virales asociadas a escape inmune, 6 de ellas en regiones no caracterizadas previamente como epítopes. El análisis de secuencias obtenidas en los últimos 20 años de epidemia sugirió que varias de ellas han incrementado su frecuencia hasta estar presentes en la mayoría de las cepas virales actuales. La evaluación de la respuesta inmune péptido específica mostró reconocimiento principalmente de dos péptidos con restricción para el alelo HLA A02 (A02P65 y A02P84), uno para el alelo HLA A03 (A03P28) y uno para el alelo HLA B07 (B07P357). Para los dos últimos y para A02P65 se demostró que la variante de escape disminuía el reconocimiento por la respuesta inmune mientras que, para todos los casos, se evidenció la capacidad de inducir una respuesta polifuncional secretora tanto de IFN como de IL 2 y MIP 1 . Se evaluó también el nivel de agotamiento inmune y, aunque la técnica de tetrámeros presentó varios inconvenientes, se detectó una mayoría de respuesta no exhausta en los casos exitosos. La secuenciación del gen viral gag mostró la presencia de escape viral en la mayoría de los epítopes analizados y sugirió que la positividad de la respuesta inmunológica estaba asociada a una mayor afinidad del epítope por el alelo HLA que lo presenta. Al mismo tiempo, el análisis de secuencia de dicho gen viral en muestras repetidas de 50 pacientes separadas por un promedio de 3 años, demostró la presencia de recambio activo de variantes virales hacia el estado de escape durante el período de muestreo. Se encontró también que la selección activa resulta menos frecuente en los pacientes bajo tratamiento y el análisis del virus en dichos pacientes sugirió que esto sería debido a una reducción significativa de la capacidad evolutiva del virus en el contexto del tratamiento altamente efectivo. Finalmente, un análisis filogenético más profundo de las secuencias estudiadas permitió datar el inicio de la epidemia del HIV 1 en Argentina en la primera mitad de la década de 1970. Conclusiones. El presente trabajo de tesis permitió caracterizar regiones de la proteína viral Gag de frecuente reconocimiento inmune sobre las cepas del HIV 1 circulantes en nuestra región y caracterizar su dinámica a nivel poblacional a lo largo de veinte años de epidemia. El conjunto de datos obtenido de los ensayos inmunológicos confirma la aproximación estadística para identificar sitios de reconocimiento inmune demostrando respuestas citotóxicas polifuncionales mientras que el estudio de muestras seriadas en pacientes, la mayoría de ellos en estados clínicos avanzados, sugiere que la selección del escape viral se extiende más allá de los primeros momentos de la infección. En este sentido, el inicio del tratamiento puede tener un beneficio adicional al prevenir dicho escape por reducción significativa de la evolución viral.

Los receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChRs) son receptores ionotrópicos excitatorios pertenecientes a la superfamilia de receptores pentaméricos activados por ligando. Estos se forman a partir de cinco subunidades iguales o diferentes (homoméricos y heteroméricos, respectivamente). En vertebrados, los nAChRs se clasifican funcionalmente y según el sitio de expresión en neuronales y no neuronales. Los neuronales pueden ensamblarse a partir de al menos 9 subunidades diferentes por lo que su función puede ser regulada por la composición o estequiometría de las subunidades que se combinan para dar lugar a un receptor funcional. Las subunidades α9 y α10, que se expresan en las células ciliadas del oído interno y median la neurotransmisión en la sinapsis entre las fibras eferentes olivococleares y las células sensoriales del oído interno, constituyen un caso particular de nAChR, ya que no se co-ensamblan con otras subunidades de nAChRs, no se expresan en el sistema nervioso central y presentan una farmacología peculiar. Por ejemplo, la nicotina funciona como un antagonista de estos receptores. Respecto de la historia evolutiva, se ha determinado que, a diferencia de la mayoría de las subunidades de nAChRs neuronales que estuvieron sujetas a selección purificadora, la subunidad α10 sufrió selección positiva en el linaje de mamíferos. Más aún, se han determinado importantes diferencias en las propiedades biofísicas de los nAChRs α9α10 de rata y pollo. Dado que las subunidades α9 y α10 de los nAChRs son las únicas que se expresan en las células ciliadas de la cóclea y que no se ensamblan con otras subunidades nicotínicas, proponemos que la única fuente de adquisición de variantes funcionales adaptadas a las necesidades de las distintas especies de vertebrados ha sido la incorporación de sustituciones no sinónimas en la región codificante de la proteína. Por otro lado, dado que los nAChRs neuronales pueden ensamblarse a partir de diferentes subunidades presentes en el sistema nervioso central, la variabilidad funcional podría estar dada por la combinatoria de subunidades que se expresan en una región específica del cerebro en cada especie particular. Para poner a prueba esta hipótesis, hemos estudiado, en primer lugar, las propiedades biofísicas de los nAChRs recombinantes α9α10, α4β2 y α7 (estos dos últimos nAChRs neuronales de alta expresión en el CNS) de tres especies de vertebrados: Rattus novergicus (Mammalia), Gallus gallus (Sauropsida) y Xenopus tropicalis (Amphibia) utilizando la técnica de expresión heteróloga en oocitos seguida de fijación del voltaje con dos microelectrodos. Hemos determinado que, mientras que las propiedades biofísicas de los nAChR neuronales α4β2 y α7 no varían entre especies de vertebrados, las propiedades biofísicas de los nAChRs α9α10 difieren drásticamente entre especies. En segundo lugar, determinamos que las secuencias aminoacídicas de las subunidades que se expresan en el epitelio auditivo presentan mucha divergencia entre especies de vertebrados, mientras que las subunidades restantes presentan restricciones a los cambios en sus secuencias y estuvieron sujetas a selección purificadora. Por último, hemos estudiado en forma comparada los patrones de expresión espacial de varias subunidades neuronales en el cerebro de diferentes especies de amniotas. Los resultados demuestran que los patrones de expresión espacial de una misma subunidad neuronal son diferentes entre distintas especies, lo cual refleja divergencia de sus secuencias regulatorias. En conjunto, nuestros resultados apoyan la hipótesis de que la historia evolutiva de cada subunidad está determinada por los mecanismos con los que cuentan el oído interno y el cerebro para generar variabilidad funcional de los receptores nicotínicos.