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Tesis para obtener el grado de Magíster Scientiae en Sanidad Animal, de la Universidad Nacional de Mar del Plata, en noviembre de 2009

Tesis presentada para optar al título de Doctor en Ciencias Biológicas, presentada en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Airres, el 15 de noviembre de 2018

Tesis presentada para optar al título de Doctor en Ciencias Biológicas, presentada en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Airres, el 15 de noviembre de 2018

Si bien se ha progresado sustancialmente en la dilucidación de los factores fisiológicos y ambientales que determinan la variabilidad fenotípica en los caracteres adaptativos del desarrollo, se conoce poco acerca de la arquitectura genética de los mismos. El estudio de la arquitectura genética requiere identificar y caracterizar los genes que contribuyen a la expresión fenotípica de los caracteres así como los factores que afectan la variabilidad de los mismos, lo cual puede lograrse por diversos medios. En el presente trabajo se analizó la variabilidad fenotípica para distintos caracteres adaptativos del desarrollo (Tiempo de Desarrollo larval y pupal, Viabilidad larval y pupal, Altura de formación de pupas, sus plasticidades fenotípicas, Coeficientes de Variación Ambiental y la relación entre Tiempo de Desarrollo Larval y Pupal) en el organismo modelo Drosophila melanogaster a dos temperaturas de cría usando un panel de 40 líneas derivadas de una población natural. Con los datos genómicos correspondientes a estas líneas se obtuvieron 1186 SNPs y 923 genes candidatos que orquestarían la expresión de estos distintos caracteres durante la ontogenia. Algunos de estos SNPs o genes fueron pleiotrópicos. Los genes candidatos estarían principalmente implicados en morfogénesis de distintas estructuras anatómicas, metamorfosis, comportamientos de locomoción o alimentación y metabolismo, entre otras funciones biológicas; varios de ellos forman parte de importantes pathways o cascadas de señalización con papeles decisivos en el desarrollo. Mediante el uso de líneas mutagenizadas, algunos de los genes candidatos más significativos para los distintos caracteres fueron validados. Por otro lado, con el objetivo de caracterizar la variabilidad para estos caracteres en otras poblaciones naturales y relacionarla con variables geográficas, se generaron líneas isogénicas derivadas de poblaciones naturales de dos locaciones argentinas situadas a diferente altitud, midiéndose en ellas los mismos caracteres a dos temperaturas de cría. Las tres poblaciones analizadas presentaron amplia variabilidad fenotípica para todos los caracteres medidos, determinada por el genotipo, el ambiente y la interacción entre ambos factores. Se detectó un grado de canalización microambiental variable en los fenotipos, dependiendo tanto del genotipo como del ambiente de origen y el de medición; las líneas provenientes de la localidad de altura presentaron mayor canalización en los fenotipos a bajas temperaturas y viceversa. En las tres poblaciones se detectaron correlaciones significativas entre distintos caracteres, particularmente entre los caracteres larvales, y se comprobó un desacople entre los caracteres para los estadíos larval y pupal. En conjunto, nuestros resultados resaltan el papel de importantes procesos del desarrollo conectados e interdependientes subyaciendo a los caracteres medidos, demuestran la existencia de variabilidad genética afectando estos procesos y por lo tanto la expresión de los caracteres y su robustez (a nivel macro y microambiental), y destacan la importancia de las fuerzas selectivas que operan sobre las poblaciones naturales en el establecimiento de esta variabilidad.

La relación entre el cambio climático y los recursos de agua dulce es una de las principales preocupaciones de la comunidad científica y la sociedad en general. Sin embargo, el cambio climático es sólo uno de los diversos factores que ponen en riesgo los recursos hídricos. Los cambios en el uso de suelo, el manejo de agroquímicos y la instalación de represas, entre otros factores, también pueden alterar el sistema hidrológico. El presente trabajo se centra en Sudamérica, en particular en la cuenca del Plata, dado que esta región es sumamente relevante por ser una de las principales fuentes de agua dulce en el mundo y por tener una gran importancia socio-económica. Una mejor comprensión de la variabilidad hidrológica de la cuenca en el contexto de la variabilidad y el cambio climático es imprescindible para generar información que pueda ser relevante para hidrólogos y responsables de la gestión de los recursos hídricos. En consecuencia, el objetivo general en el que se enmarca la presente Tesis Doctoral consiste en avanzar en el conocimiento y caracterización estadística de la variabilidad hidrológica de los grandes ríos de la cuenca del Plata en respuesta a diferentes forzantes climáticos locales y regionales y realizar una evaluación de la habilidad de Modelos Climáticos Globales (MCGs) para representar dichos forzantes. Los MCGs analizados en cuanto a su habilidad para representar el clima presente (precipitación, transporte y convergencia de humedad) fueron los que conforman las bases denominadas WCRP/CMIP3 y CMIP5. En esta tarea se utilizaron los valores mensuales provistos por cada MCG para el clima presente (experimentos 20C3M para CMIP3 e historical para CMIP5) y se realizó un estudio comparativo del desempeño de ambas generaciones de MCGs. Asimismo, se elaboraron escenarios futuros de precipitación y transporte/convergencia de humedad a partir de los MCGs que mejor habilidad demostraron para representar el clima presente. En particular las simulaciones que se utilizaron correspondieron a los escenarios SRESA1B para CMIP3, y RCP4.5, para CMIP5. El principal objetivo de este último estudio fue el de analizar si la convergencia de humedad podría ser el principal mecanismo que permita explicar los escenarios futuros de precipitación. Por otra parte, se realizó una caracterización estadística de la precipitación y de los caudales de diferentes ríos que conforman la cuenca del Plata en términos de escalas espaciales y temporales. Más aún, se estudió exhaustivamente la variabilidad temporal de los caudales correspondientes a los puntos de cierre de 6 sub-cuencas definidas dentro de la Cuenca del Plata a través de un análisis espectral realizado en el marco MEM (en inglés, Maximum Entropy Method). Finalmente se propuso evaluar en qué medida la variabilidad de la precipitación permitía explicar la variabilidad de los caudales. Para este propósito se diseñaron dos modelos estadísticos de relación entre el caudal y la precipitación (RRM, rainfall-runoff model) a partir del planteo de balance de agua para escalas temporales donde el almacenaje de agua en el suelo es despreciable. A partir de la regresión lineal entre la información histórica de la precipitación caída en cada sub-cuenca y los caudales en los puntos de cierre correspondientes, se dedujeron los hidrogramas unitarios en cada caso para estudiar el retardo de los caudales y se compararon los espectros correspondientes a los caudales simulados y observados. Finalmente, la evapotranspiración se estimó a través de diversas parametrizaciones propuestas en la literatura, entre ellas una que considera el efecto de la vegetación con el objetivo de estimar las consecuencias de los cambios en el uso de suelo sobre los caudales. Palabras claves: Cuenca del Plata, Cambio Climático, Variabilidad Climática, Modelos Climáticos Globales, Modelo Estadístico, Precipitación, Transporte de Humedad, Caudales Superficiales

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La variabilidad de escala sinóptica que se observa en la vecindad de Sudamérica durante el invierno y la primavera es analizada en detalle en esta tesis con el fin de mostrar el impacto que la misma produce en los cambios de ozono y de radiación ultravioleta, en particular en la vecindad de Ushuaia. El análisis de la distribución espacial de la variabilidad media de las perturbaciones sinópticas (storm-tracks) sobre el Hemisferio Sur mostró que presenta una gran correlación con la distribución correspondiente a la variabilidad de las perturbaciones de ozono de alta frecuencia (ozone-tracks). Los modos principales de variabilidad atmosférica de escala sinóptica sobre América del sur extratropical son identificados y caracterizados para seis inviernos (1983-88) y quince primaveras (1979-93). Dichos modos surgen luego de aplicar la técnica de funciones ortogonales empíricas extendidas y rotadas (REEOFs) a la perturbación temporal de alta frecuencia(que se obtiene luego de remover el campo medio climatológico y su variabilidad interanual) de la componente meridional del viento en 300 hPa. Los patrones asociados a los principales REEOFs muestran un tren de ondas desplazándose a lo largo de las latitudes del jet subpolar, sobre 50º-55º S en invierno y 55º-60º S en primavera. En ambas estaciones se observa que se trata de ondas baroclínicas con sus máximos en la alta tropósfera; aunque para los meses de primavera dichas ondas se hallan más extendidas en la vertical con amplitudes significativas hasta 30 hPa. La distribución de ozono asociada a los modos sinópticos más activos muestra que durante el invierno la correspondencia entre mínimos (máximos) de ozono y cuñas (vaguadas) es directa y por lo tanto indica una modulación dinámica del campo de ozono por las perturbaciones sinópticas. Durante la primavera, la distribución de temperatura y viento del estado medio propicia una mayor propagación en la vertical hacia la estratósfera de la energía emanante de la tropósfera. Además también en esta época, las variaciones de ozono son mayores en valor absoluto a las del invierno y adoptan una forma de "S" invertida y alargada en la dirección zonal. Se encontró que una perturbación negativa (positiva) de ozono, se asocia en su porción meridional, a la parte norte de un sistema anticiclónico (ciclónico), que típicamente ondula la tropopausa hacia arriba (abajo) y causa que la densidad del ozono en la baja estratósfera alcance un mínimo (máximo). En cambio, la porción más austral de la perturbación de ozono se asocia al extremo sudoeste del sistema ciclónico (anticiclónico) ubicado corriente abajo, que durante esta época está relacionado con la advección de aire estratosférico pobre (rico) en ozono y por lo tanto el contenido total de la columna disminuye (aumenta) en dicha región. Asimismo, también presentamos un análisis de las variaciones de radiación ultravioleta sobre la ciudad de Ushuaia para el período 1991-1998. En particular, la banda de 340 mostró una influencia netamente local en las primeras capas de la atmósfera de los sistemas de tiempo de escala submensual. En contraste, la banda de 305 que se asocia a la variabilidad sinóptica. Los patrones espaciales de correlación y regresión mostraron para la banda de 305 con respecto a los correspondientes a la banda de 340, una mayor extensión horizontal y mayores valores absolutos, con niveles de significancia máximos en la alta tropósfera y en la estratósfera media y baja, que se atribuye a la dependencia de dicha banda del contenido de ozono. En tal sentido, estos análisis confirmaron que la generación de perturbaciones de ozono por actividad de ondas sinópticas descripto previamente, producen cambios significativos en la UV sobre Ushuaia y su vecindad.

Se estudió por medio de electroforesis de Isoenzimas y RAPD la variabilidad, diferenciación y estructura genética en poblaciones naturales de 0. argentinensis, 0. bonariensis y 0. hatcheri. Se analizó asimismo si la diferenciación genética entre poblaciones, detectada por Isoenzimas y RAPD, podria estar asociada con las distancias geográficas entre las mismas. La técnica de Isoenzimas permitió el análisis de 22 loci (19 para cada especie), de los cuales 8 fueron variables. Si bien las frecuencias alélicas de las poblaciones de cada especie para estos 8 loci mostraron algunas diferencias, la población de 0. bonariensis del Río de la Plata se destacó netamente entre las poblaciones de su especie por la presencia de un alelo fijado y diagnóstico (LDH-1*3). La comparación de frecuencias alélicas entre las distintas especies reveló importantes diferencias, siendo la especie más diferenciada 0. hatcheri. Esta especie se diferenció de 0. bonariensis y O. argentinensis por la presencia de 3 loci GOT exclusivos (diagnósticos) (GOT-2*, GOT-3*, GOT-5*). Además la expresión tisular diferencial permitió distinguir las 3 especies por los patrones de expresión de 3 loci (MEP-1*, MEP-2* y MEP3*). La técnica de RAPD permitió el análisis de 220 bandas. De éstas, sólo 4 resultaron monomórficas. La mayoría de las bandas amplificadas fueron compartidas por las especies y poblaciones variando sólo en sus frecuencias. Del análisis de estas frecuencias se deduce que existen 2 importantes grupos: uno conformado por las poblaciones de O. hatcheri y el otro compuesto por las poblaciones de 0. bonariensis y 0. argentinensis. Al igual que en el análisis isoenzimático la población de 0. bonariensis del Rio de la Plata fue las más diferenciada dentro de las de su especie. Los valores de variabilidad genética promedio por especie, calculados por Isoenzimas, fueron menores para 0. bonariensis (P= 6.31%, H=0.034) que para 0. argentinensis (P= 10.5%, H= 0.045) y 0. hatcheri (P= 10.5%, H=0.047). Esta disminución en los índices de variabilidad fueron asociados al tipo de distribución y a la alta presión pesquera que sufre 0. bonariensis. La población de 0. bonariensis de la laguna Salada Grande, fue la excepción a lo antedicho, registrando valores altos de variabilidad (P= 10.5%, H= 0.06). Siembras periódicas con alevinos obtenidos por inseminación artificial a partir de gametas parentales de dicha laguna mitigarían la disminucón de la variabilidad La estructura genética intrapoblacional estimada por el estadístico FIS de Wright (FIS promedio = 0.004 NS p>0.05) indicó que las frecuencias genotípicas en todas las poblaciones se ajustarían a lo esperado por la ley de Hardy-Weinberg; por ende el apareamiento sería aleatorio. El comportamiento promiscuo en el apareamiento, durante el cual muchos machos pueden fertilizar los huevos de una única hembra (descripto para otras especies de pejerreyes) ha sido sugerido para las especies en estudio, dado que este favorecería la panmixia. La diferenciación genética entre poblaciones de la misma y diferentes especies fue estimada por el índice de fijación FST para ambas metodologías, mientras que los índices de Distancia e Identidad de Nei solo fueron obtenidos para Isoenzimas. Los niveles de diferenciación genética entre poblaciones obtenidos a partir de los datos de Isoenzimas y RAPD fueron similares (FST promedio para todas las poblaciones igual a 0.807 y 0.78 respectivamente) e indicaron una diferenciación altamente significativa entre poblaciones de diferentes especies. Con ambas metodologías, el flujo génico estimado (Nm= 0.06 y 0.07) fue menor que 1 individuo por generación cuando se consideraron todas las poblaciones. La diferenciación entre poblaciones dentro de cada especie mostró valores de FST significativos a altamente significativos tanto para isoenzimas (FST= 0.022-0.130) como para RAPD (FST= 0.553-0.687) pero fue menor que la observada al incluir poblaciones de distintas especies (más evidente en Isoenzimas). Consecuentemente, la estimación indirecta del flujo génico a partir de la diferenciación isoenzimática fue mayor que un migrante por generación (Nm>1). Sin embargo, el Nm estimado a partir de los datos de RAPD (Nm= 0.114-0.202), si bien fue más alto que el obtenido considerando todas las poblaciones, no superó l migrante por generación. RAPD permitió una mayor diferenciación entre poblaciones de la misma especie que la observada mediante la técnica de lsozimas., como consecuencia del alto polmorfismo (bandas muy variables) encontrado por esta técnica. En Isoenzimas, la diferenciación también se estimó mediante los índices de Identidad y Distancia de Nei promedio entre especies. Los intervalos de distancias promedio para poblaciones coespecificas y de distintas especies se ajustaron a los valores encontrados por Shaklee y col. (1982) para peces. En cambio, el intervalo de distancia encontrado entre 0.bonariensis y 0. argentinensis (D=0.07 - 0.112) correspondería, según Thorpe (1979), al de poblaciones coespecificas. De acuerdo al intervalo de distancia genética de Nei (D) obtenido por Thorpe (1979) para especies congenéricas, tal vez sería necesario una revisión sistemática de estas poblaciones para dilucidar este problema. Sin embargo, si se tiene en cuenta el intervalo de distancias genéticas de Nei encontrado por Shaklee y col. (1982), para poblaciones de distintas especies, los valores de las asociaciones entre especies se ajustan a lo esperado por la taxonomía. La varianza genética total fue mayor para RAPD (49.58) que para isoenzimas (3.99). Esto se debió al mayor número de bandas analizadas para RAPD (220 ) que para isozimas (22 loci). A partir del análisis de la distribución de la variabilidad genética se determinó que la variación entre especies (variación especifica) fue la proporción mayor tanto para isoenzimas como para RAPD (73.9% y 44% respectivamente). De la comparación del porcentaje de variación especifica obtenido por ambos métodos se desprende que Isoenzimas detecta mejor este tipo de variación, pudiendo separar especies con mayor precisión. El porcentaje de variación entre poblaciones de la misma especie (variación poblacional) fue mayor para RAPD (34%) que para isoenzimas (6.8%), indicando que la variación poblacional fue mejor detectada por la primer técnica. El porcentaje de varianza dentro de las poblaciones (variación individual) fue similar para ambos métodos (19.3% y 22% para Isoenzimas y RAPD respectivamente). Asumiendo la hipótesis del reloj molecular, se estimó que 0. hatcheri divergió de su antecesor durante el Plioceno tardío; en cambio la divergencia obtenida entre 0.argentinesis y 0. bonariensis indicaría que ésta fue reciente, alrededor de 490.000 años (Pleistoceno medio). Dado el origen de la laguna Salada Grande donde se muestreo una de las poblaciones de O. bonariensis y la fuerte asociación entre esta población y 0. argentinensis obtenida mediante las técnicas de Isoenzimas como de RAPD, se postula un posible evento ancestral de hibridización introgresiva de 0. bonariensis proveniente de lagunas litorales con 0. argentinensis. La falta de correlación entre las distancias geográficas de las poblaciones de cada especie y la diferenciación genética obtenida tanto por RAPD como por Isoenzimas sugirió que la divergencia de las poblaciones de cada especie podría ser explicada por dos mecanismos evolutivos: la Selección o por Eventos fundadores recientes, no habiendose aún alcanzado el equilibrio entre deriva y migración. En cambio al incluir todas las poblaciones de las distintas especies la correlación positiva, tanto para Isozimas como RAPD, sugiere que pudo existir diferenciación de las mismas por Deriva Genética, aunque no se descarta a la Selección como probable fuerza operante. Al incluir todas las poblaciones de las diferentes especies se plantean distancias geográficas importantes, con ambientes muy disímiles donde las presiones selectivas podrían ser muy diferentes determinando una importante diferenciación génica que se correlacionaría con la distancia geográfica. El fenograma obtenido por Isoenzimas dejó visualizar 3 clusters correspondientes a las 3 especies estudiadas, permitiéndo este método una buena agrupación de las poblaciones de cada especie. El fenograma obtenido a partir de RAPD corroboró 2 de los cluster (O. hatcheri versus O. bonariensis y O. argentinensis) pero no tuvo buena resolución al momento de separar las poblaciones de 0. bonariensis y 0. argentinensis. La técnica de Isoenzimas permitió una mejor agrupación de las poblaciones de cada especie, indicando ser mejores marcadores que los RAPD al momento de comparar diferentes especies.

Se estudió por medio de la electroforesis de isoenzímas y RAPDs la variabilidad, diferenciación y estructura genética en poblaciones naturales de P. alba, P. nigra, P. ruscifolia, P. flexuosa y P. vinalillo y poblaciones de híbridos interespecificos (P. alba x P. nigra y P. alba x P. flexuosa). Se estudió además la posible correlación entre variables ambientales con loci isoenzimáticos y de RAPDs y si la diferenciación genética entre poblaciones podría estar asociada con las distancias geográficas entre las mismas. Las técnicas de isoenzímas permitieron el análisis de 21 loci de los cuales 16 fueron polimórficos. No se encontraron loci diagnósticos de especies. Estas sólo se diferenciaron por sus fiecuencias alélicas. La técnica de RAPDs identificó 28 locí de los cuales 5 permitieron reconocer inequívocamente las especies. Los valores de variabilidad genética promedio observados para isoenzímas (P = 37.5 — 66.7%; H = 0.14- 0.332) y para RAPDs (P = 32.1- 46.4 % ; H = 0.123- 0.246) fueron similares entre sí y con respecto a los estimados en estudios previos con ambas metodologías en especies de Algarobia. Se observó un exceso de homocigotas (F IS >0) en todos los loci polimórficos estudiados. Esto podría deberse a la existencia de cruzamientos endogámicos dentro de las poblaciones como consecuencia de la limitada dispersión de las semillas y el polen y a la autogamia parcial estimada en estudios previos (hasta un 28 %). Los niveles de diferenciación genética obtenidos entre poblaciones a partir de los datos de isoenzímas y RAPDs fueron similares (F ST-0.36 y 0.4 respectivamente) e indicaron una diferenciación altamente significativa entre poblaciones de diferentes especies. En ambos casos el flujo génico estimado (Nm = 0.8 y 0.3) fue menor que l individuo por generación, mientras que el flujo génico entre poblaciones de igual especie fue mayor que uno. Tanto para datos de isoenzímas y RAPDs la mayor diversidad ocurre dentro de las poblaciones (54-69%), es intermedia entre especies (23-42%) y baja entre poblaciones (416%). Se observaron correlaciones significativas entre frecuencias alélicas isoenzimáticas y algunas variables geográfico-climáticas mientras que no se observaron correlaciones significativas entre las variables geográfico-climáticas y las bandas RAPDs. También se observaron diferencias en los resultados cuando se evaluó la correlación entre las matrices de distancias genéticas y geográficas a partir de los datos de isoenzímas (correlación significativa) y RAPDs (correlación no significativa). La asociación de las variables de algunos loci isoenzimáticos con variables geográficas y/o climáticas sugiere un efecto selectivo de los mismos. El intervalo de distancias genéticas entre poblaciones coespecíficas obtenidas a partir de los datos de isoenzímas (0.04 y 0.12) fue similar al obtenido a partir de los datos de RAPDs (0.02 a 0.10). Tanto las isoenzímas como los RAPDs muestran una alta afinidad entre las especies estudiadas de Algarobia, ya que estas comparten la mayoría de los loci con similares frecuencias alélicas. La diferenciación entre especies medida por las distancias de Nei fueron en promedio con ambas metodologías relativamente bajas (0.10-0.27). Estos valores son esperados para sub o semiespecies según Ayala (1974). Los fenogramas obtenidos con ambas metodologías fueron similares entre sí y mostraron a poblaciones coespecíficas agrupadas. Las poblaciones hibridas analizadas no fueron en ningún caso intermedias entre sus progenitores putativos.

En el presente estudio se ha analizado la variación aloenzimática de siete sistemas isoenzimáticos en diferentes poblaciones de especies pertenecientes a las dos secciones del género Larrea: L. nítida (2n=2x=26)de Argentina (sec. Larrea), L. divaricata (2n=2x=26)y L. cuneifolia (2n=4x=52) de Argentina y L. tridentata (2n=2x=26 y 2n=4x=52) de Estados Unidos de Norteamérica (sec. Bifolium). Por medio de la técnica de electroforesis horizontal en geles de almidón y poliacrilamida, se analizó un total de 11633 individuos para estudiar los siguientes sistemas isoenzimáticos: glutamato oxaloacetato transaninasa, alcohol dehidrogenasa, aminopeptidasa, esterasa, 6-fosfogluconato dehidrogenasa, glutamato dehidrogenasa y superóxido dismutasa. Para cada uno de ellos se determinó el númerode alelos de cada locus y se calcularon las Frecuencias alélicas (Tablas 58 y 59), para determinar si las frecuencias genotipicas observadas para los diferentes loci se ajustaban a las esperadas para el equilibrio de Hardy-Weinberg (Tablas 2 a 7, 9 a ll, 15, 16, 18 a 20, 25 a 27, 30, 31, 35, 36, 39, 4D, 42, 43, 46, 48, 49, Sl y 56). Además, se determinaron otros cuatro parámetros diferentes para compararla variabilidad genética intra y/o interpoblacional: porcentaje de loci polimórficos (P), frecuencia media esperada de heterocigotas por locus (H) (Nei, 1975), número medio de alelos por locus y número efectivo de alelos por locus (Crow y Kimura, 1970) (Tablas 60 y 61). Para todos los pares de poblaciones se calcularon además los indices de identidad genética media (Ï) y distancia genética (D) (Nei, 1972) (Tabla 62) y en base a la matriz de identidad genética, utilizando el método de análisis de agrupamiento de media no ponderadas (UPGMA) se construyó el dendrograma correspondiente (Fig. 33). Los datos obtenidos mostraron un alto grado de similitud molecular entre las especies de la sección Bifolium, casi tan elevado cono los que han sido propuestos para semi o incluso subespecies, lo cual indicaria una gran afinidad entre ellas y en consecuencia un escaso grado de divergencia. La especie L. nitida (sec. Larrea), en cambio, apareció aislada en el fenograma del resto de las especies de la sección Bifolium. Estos datos son coherentes con las diferencias morfológicas existentes entre especies de secciones diferentes y con la gran diferenciación genética que presentó E. nítida con respecto a las demás especies analizadas, dado que el 70% de los loci analizados en este estudio fueron completamente diferentes y aún aquéllos que presentaron en comúnno siempre mostraron la misma composición alélica. La comparación de la variación genética en las tres entidades diploides estudiadas para todos los loci considerados, en base a los datos de P, H, número medio de alelos por locus y ne indicaria que la variación genética decre ce en el siguiente orden: L. divaricata, L. tridentata y L. nítida. Por otra parte, en base a los datos de 5 y Ñpuede inferirse que las especies tetraploides presentarían mayor variación genetica, además de mayor multiplicidad enzimática. La elevada afinidad enzimática presentada por el par L. divaricata-L. tridentata (diploide), juntamente con los resultados obtenidos por otros autores en estudios morfológicos, citológicos, cromatográficos y de proteínas de reserva, sumado a la ausencia de una barrera reproductiva completa entre ambas entidades, apoyarían la hipótesis de que ellas serían desde el punto de vista biológico semiespecies alopátricas. La elevada similitud molecular observada entre los citotipos diploide y tetraploide de E. tridentata, lo cual concordaría con la alta unifonmidad morfológica y bioquímica encontrada entre ambos citotipos, tenderían a confirmar la hipótesis de autopoliploidia interracial. Significativamente, no se han presentado evidencias de heterocigotas fijos o perfiles aditivos, lo cual indicaría ausencia de divergencia en los diploides a partir de los cuales surgieron los tetraploides. Los altos índices de identidad genética presentados por L. divaricata y L. cuneifolia no coincidirían con la evidente diferenciación morfológica exigtente entre ambos taxones de diferente nivel de ploidía. Sobre la base de hipótesis previas sobre el origen de L. cuneifolia (Hunziker gt El., 1972; 1973) acerca de que L. divaricata podríu haber sido uno de los progenitores diploides de L. cuneifolia y ante la presencia de perfiles electroforéticos presuntamente aditivos y heterocigotas fijos para uno de los sistemas isoenzimáticos esta diados, el alto indice de similitud molecular presentado por estas dos especies podría deberse a que ambas constituyan un putativo par "progenitor-derivado". Los valores de similitud y diferenciación genética obtenidos en el presente estudio apoyarían la hipótesis de que no todos los sucesos de especiación implican la misma cantidad de cambios genéticos. En Larrea, la especiación habria ocurrido con poca o ninguna divergencia de los loci isoenzimáticos en especies de la misma sección. Sin embargo, al comparar especies de secciones diferentes se encontraron niveles mayores e importantes de diferenciación genética en dichos loci. La gran diversidad alélica y elevada heterocigosis presentada por L. tridentata de Norteamérica, comparable a la de su posible antecesora sudamericana L. divaricata, debería ser atribuida tal vez en buenaparte a la participación de un número considerable de fundadores, si la migración ocurrió en tiempos relativamente recientes.