Catálogo de publicaciones

Las células dendríticas (CDs) juegan una función crítica en el inicio de la respuesta inmune. Entender su rol en la Artritis reactiva (ARe) podría ayudar a delinear la patogénesis de esta artropatía. En estudios previos, hemos detectado una desregulación de la Interleuquina (IL)-12/23p40 en ARe inducida por la bacteria Yersinia enterocolitica (Ye) en ratones deficientes en TNFRp55 (TNFRp55-/-). En el presente estudio, ensayamos la contribución de CDs en la sobreproducción de dicha citoquina. Primero, confirmamos en sobrenadantes de esplenocitos de ratones TNFRp55-/- obtenidos el día del inicio de ARe (14 días post-infección) y estimulados con lipopolisacarido (LPS), niveles elevados de IL-12/23p40, IFN-γ e IL-17A. Luego, identificamos en esplenocitos totales un aumento en la frecuencia de CDs IL-12/23p40+ en ratones TNFRp55-/- infectados con Ye, evidenciando a las CDs como una fuente principal de IL-12/23p40. Posteriormente, aplicamos un modelo de expansión in vivo de CDs mediante inyección de células de melanoma B16 transfectadas con FLT3L (de sus siglas del inglés fms-like tirosine kinasa 3 ligand). Demostramos que CDs TNFRp55-/- purificadas y aisladas de bazo secretaron una mayor cantidad de IL-12/23p40, y en ensayos de co-cultivo, favorecieron la diferenciación de linfocitos T CD4+ wild-type (WT) hacia los fenotipos Th1 y Th17. Un análisis realizado sobre las vías de quinasas MAPKs (de su sigla en inglés Mitogen-Activated Protein Kinases) , utilizando inhibidores específicos de las vías JNK y p38 MAPK, demostró que estas vías están involucradas en la sobreproducción de IL-12/23p40 en CDs TNFRp55-/- purificadas, como así también en la línea celular de dendríticas JAWS II. Esta desregulación fue nuevamente atribuida a la deficiencia de TNFRp55 utilizando un inhibidor especifico de la vía (CAY10500), el cual comprometió el control de IL12/23p40 mediada por TNF (factor de necrosis tumoral) en CDs WT estimuladas con LPS. Simultáneamente, este inhibidor redujo la producción de IL-10, sugiriendo su rol regulador en la producción de IL-12/23p40 mediado por la señalización por TNFRp55. Estos resultados proveen datos experimentales sobre la existencia de un circuito anti-inflamatorio mediado por TNFRp55 en CDs. Por lo tanto, Estas células pueden considerarse un nuevo blanco en el tratamiento de ARe.

Introducción. Una gran parte de la población presenta terceros molares retenidos y no se somete al proceso de extracción quirúrgica. Objetivo. Comprobar que cantidad de sacos pericoronarios de terceros molares inferiores retenidos asintomáticos tienen potencialidad patológica Materiales y métodos. Se realizó un estudio prospectivo en 80 pacientes de la Facultad de Odontología de Córdoba-Argentina. Se realizaron cirugías y toma de material que consistió en sacos pericoronarios que fueron estudiados histopatológicamente. Todos los datos fueron analizados estadísticamente con cuadros y gráficos. Resultados. De las 80 muestras, 19 fueron sacos pericoronarios normales, 29 con células quiescentes. En estos se tomo una conducta de control. Pericoronaritis se dio en 17 casos, quiste dentígero en 4 casos, displasia epitelial en 2 casos, hiperplasia en 6 casos, y ameloblastoma en 3 casos. En estos se realizó la extirpación quirúrgica. Discusión y conclusión. Existen criterios bien definidos para el retiro de terceros molares afectados. En cambio, las indicaciones y las contraindicaciones para la cirugía de los molares asintomáticos no están bien establecidas porque no existen estudios a largo plazo que validen la ventaja para el paciente del retiro temprano del diente. La línea de conducta se basa en que el clínico tome la decisión más racional usando los métodos tradicionales de evaluación para efectuar el resultado óptimo, manteniendo los intereses del paciente individual sobre otros.

Presentamos en esta tesis diferentes estudios fenomenológicos de ciertas extensiones del Modelo Estándar de la Fı́sica de Partı́culas. En particular, estudiamos el sector de Higgs considerando también la posibilidad de incluir bosones más pesados que el único bosón escalar contenido en el Modelo Estándar. Más especı́ficamente, analizamos interacciones de Higgs con violación de sabor leptónico y también la posibilidad de observar en el LHC decaimientos de bosones de Higgs pesados en canales invisibles. El primer estudio lo realizamos en el contexto del Modelo Estándar Supersimétrico Mı́nimo y está centrado en el análisis de los decaimientos de bosones de Higgs neutros en dos leptones de distinto sabor. Consideramos como fuente de violación de sabor leptónico posibles mezclas en el sector de sleptones de modo que dichos procesos se producen radiativamente a un loop. Trabajamos bajo la “Aproximación de Inserción de Masa”, es decir, no tratamos los grados de libertad internos en los loops en la base fı́sica sino en la base de interacción electrodébil. De esta manera obtuvimos expresiones analı́ticas para las tasas de decaimiento y vértices efectivos facilitando su contrastación experimental y su interpretación en términos del espacio de parámetros del modelo estudiado. Comparamos los resultados analı́ticos alcanzados con las predicciones numéricas existentes en la literatura y presentamos las estimaciones más optimistas para las anchuras parciales de decaimientos en las regiones del espacio de parámetros permitidas por los datos experimentales actuales. En el segundo estudio continuamos la misma lı́nea de análisis de decaimientos de Higgs con violación de sabor leptónico pero lo realizamos en el contexto del modelo de seesaw inverso. En este caso, la violación de sabor leptónico es generada por los acoplamientos tipo Yukawa de los neutrinos derechos pesados que se acoplan al bosón de Higgs estándar. Encontramos los vértices efectivos para introducir estas interacciones de “Nueva Fı́sica” en otro tipo de procesos como el decaimiento de un leptón a tres idénticos de distinto sabor que el inicial. Por último, en el tercer estudio, desarrollamos una estrategia de búsqueda dedicada a la producción de un par de bosones de Higgs pesados H − A del Modelo Estándar Supersimétrico Mı́nimo en el Gran Colisionador de Hadrones para una energı́a del centro de masa de √s = 14 TeV. Realizamos un análisis de los fondos para este proceso y propusimos cortes cinemáticos para maximizar la sensibilidad de la señal en el canal de decaimiento de cuatro quarks b con energı́a transversa perdida. Diseñamos una estrategia en dos regiones de señal y analizamos las posibles luminosidades de evidencia y descubrimiento en cada caso.

Presentamos en esta tesis diferentes estudios fenomenológicos de ciertas extensiones del Modelo Estándar de la Fı́sica de Partı́culas. En particular, estudiamos el sector de Higgs considerando también la posibilidad de incluir bosones más pesados que el único bosón escalar contenido en el Modelo Estándar. Más especı́ficamente, analizamos interacciones de Higgs con violación de sabor leptónico y también la posibilidad de observar en el LHC decaimientos de bosones de Higgs pesados en canales invisibles. El primer estudio lo realizamos en el contexto del Modelo Estándar Supersimétrico Mı́nimo y está centrado en el análisis de los decaimientos de bosones de Higgs neutros en dos leptones de distinto sabor. Consideramos como fuente de violación de sabor leptónico posibles mezclas en el sector de sleptones de modo que dichos procesos se producen radiativamente a un loop. Trabajamos bajo la “Aproximación de Inserción de Masa”, es decir, no tratamos los grados de libertad internos en los loops en la base fı́sica sino en la base de interacción electrodébil. De esta manera obtuvimos expresiones analı́ticas para las tasas de decaimiento y vértices efectivos facilitando su contrastación experimental y su interpretación en términos del espacio de parámetros del modelo estudiado. Comparamos los resultados analı́ticos alcanzados con las predicciones numéricas existentes en la literatura y presentamos las estimaciones más optimistas para las anchuras parciales de decaimientos en las regiones del espacio de parámetros permitidas por los datos experimentales actuales. En el segundo estudio continuamos la misma lı́nea de análisis de decaimientos de Higgs con violación de sabor leptónico pero lo realizamos en el contexto del modelo de seesaw inverso. En este caso, la violación de sabor leptónico es generada por los acoplamientos tipo Yukawa de los neutrinos derechos pesados que se acoplan al bosón de Higgs estándar. Encontramos los vértices efectivos para introducir estas interacciones de “Nueva Fı́sica” en otro tipo de procesos como el decaimiento de un leptón a tres idénticos de distinto sabor que el inicial. Por último, en el tercer estudio, desarrollamos una estrategia de búsqueda dedicada a la producción de un par de bosones de Higgs pesados H − A del Modelo Estándar Supersimétrico Mı́nimo en el Gran Colisionador de Hadrones para una energı́a del centro de masa de √s = 14 TeV. Realizamos un análisis de los fondos para este proceso y propusimos cortes cinemáticos para maximizar la sensibilidad de la señal en el canal de decaimiento de cuatro quarks b con energı́a transversa perdida. Diseñamos una estrategia en dos regiones de señal y analizamos las posibles luminosidades de evidencia y descubrimiento en cada caso.

Fil:Haitz, Carlos Rodolfo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La carne de jabalí es apreciada por sus características organolépticas y nutricionales. El principal consumidor es Europa (Italia, Alemania y Francia), seguido por Japón. En Argentina, esta especie se adaptó en gran parte del territorio y a diferentes situaciones ecológicas. Asimismo, la crianza en cautiverio, aprovechamiento, elaboración, distribución, precios y características nutricionales no son de amplio conocimiento. El propósito de este trabajo es realizar un diagnóstico del sistema de agronegocios del jabalí en Argentina a fin de identificar los puntos fuertes y débiles y a partir de allí, proponer acciones para dar soluciones a las problemáticas actuales. Se utiliza como metodología el abordaje de la epistemología fenomenológica y el método EPESA, lo cual permite contar con abordaje amplio y sistémico del agronegocio bajo análisis. También, se utiliza el marco teórico de la nueva economía institucional, siguiendo el abordaje de Joskow y sus tres vías de aproximación. Si bien es una producción que posee ventajas comparativas (clima, suelo, extensión, alimento)que permitirían el desarrollo productivo y comercial del sistema, se observa que la informalidad limita la implementación de planteos productivos con mayores niveles de tecnología, registros y datos genéticos, lo que imposibilita la exportación. Por otra parte, existe un problema de reglamentaciones con respecto a la faena, dado que debe ser aprobada por FAUNA y por SENASA, teniendo distintos requerimientos y tiempos de carga y transporte. Esto genera incompatibilidades para la comercialización formal, incentivando a transacciones ilegales, baja transparencia, oportunismo ex ante y ex post de las transacciones y altos costos de transacción. Dado este ambiente de negocios descripto, las empresas bajo estudio en general trabajan con nichos de mercado y no tienen un panorama de ampliación productiva y comercial. Por tanto, la mejora del ambiente institucional es la primera acción a seguir a fin de vencer las limitaciones mencionadas.

La creciente ola de prosperidad y urbanización en Asia, África y América Latina fomenta el aumento en la demanda de productos lácteos. Una investigación realizada por Tetra PakDairyIndex en el 2011, proyecta un aumento de cerca de 25 por ciento en el consumo global de leche entre 2010 y 2020. América Latina reúne condiciones insuperables para aumentar sus producciones de leche y ser proveedor de la demanda del propio continente En Ecuador, se ha incrementado la producción de leche y productos lácteos, aunque sólo exporta el 1 por ciento de su producción, mientras que la población ecuatoriana todavía mantiene un bajo nivel de consumo de lácteos. Este hecho mantiene latentes las oportunidades para el desarrollo de la industria láctea y la ganadería nacional. El presente trabajo tiene por objetivo realizar un estudio del Sistema de Agronegocios lechero de la Región Sierra de Ecuador, el cuál permita conocer su desarrollo y limitaciones, y a partir de las mismas proponer alternativas de mejora competitiva. Se utiliza el método EPESA el cual establece los lineamientos para el estudio de sistemas de agronegocios desde una óptica sistémica y utilizando como marco teórico de la nueva economía institucional. Se realizó un análisis de fuentes de información secundaria así como también se realizaron entrevistas con informantes calificados dada la escasez de información a nivel nacional. El SAG lechero de la Región Sierra cuenta con dos subsistemas: el subsistema formal y el informal, surgen a partir del bajo enforcement institucional y una demanda local que prefiere lácteos no pasteurizados y "directo del campo". Es por ello que se observan mayores niveles de tecnificación, productividad, inocuidad, sanidad y calidad en el subsistema formal, lo que lleva a competencia desleal entre ambos subsistemas. Otro aspecto se refiere a las transacciones, las cuales en general todas las transacciones del sistema (y en ambos subsistemas)son de altos niveles de incertidumbre y costos de transacción, a pesar que en el subsistema formal se observan contratos. Del análisis competitivo se observa en comparación con el SAG lechero del Uruguay, el SAG lechero cuenta desventajas competitivas en factores tecnológicos avanzados (status sanitario, genética, disponibilidad y uso de maquinaria), también en la demanda (dado el bajo consumo per cápita y una demanda de baja exigencia en calidad, y bajas exportaciones), la baja presencia en el sistema de organismos de investigación y organizaciones gremiales, y la ausencia de cooperativas sumado a una alta atomización de los productores. Este estudio ha sido clave para proponer una alternativa de mejora competitiva del sistema, el cual se resume en la creación de un organismo público-privado (CONALECH)que coordine y dictamine las estrategias que el sistema debe seguir.

En este trabajo se estudió la reacción de hidrólisis de la lactosa, empleando preparaciones comerciales de enzimas adecuadas para el tratamiento de leche fluida y suero neutro de quesería, inmovilizadas en geles de hidrocoloides. En los ensayos experimentales se caracterizaron distintas preparaciones de enzimas comerciales en base a: pH y temperaturas óptimas de operación, efecto de distintas sustancias sobre la actividad y estabilidad de la enzima en estado libre para seleccionar la de mejor comportamiento en las condiciones de reacción establecidas. A la preparación seleccionada se la caracterizó cinéticamente adoptando un modelo de reacción del tipo de Michaelis-Menten con inhibición competitiva por producto. Se obtuvieron y caracterizaron distintos biocatalizadores en base a: actividad, estabilidad, resistencia mecánica, temperatura y pH óptimos, características cinéticas, resistencias a la difusión de sustrato y productos y rendimientos para seleccionar el de mejor comportamiento en las condiciones de reacción establecidas. El mejor catalizador obtenido fue ensayado en un reactor tubular de lecho fijo, estudiando su comportamiento bajo distintas condiciones de caudal y concentraciones de lactosa. A partir del balance de materia en el reactor, se elaboró un modelo matemático que considera condiciones de flujo pistón isotérmico con dispersión axial en estado estacionario. El modelo incluye la estimación en las condiciones de reacción, de la resistencia a la transferencia de materia desde el seno del líquido hacia la superficie del soporte y luego al sitio activo en el interior del soporte, donde se produce la reacción. Finalmente, el modelo completo fue corroborado por los datos experimentales.

En este trabajo de Tesis se determinó la estructura del sistema de polisacáridos del alga roja calcárea Corallina officinalis. Se desarrollaron además dos técnicas de análisis de azúcares: el método de etilación para el estudio de azúcares naturalmente metilados, y la determinación de azúcares enantioméricos derivatizados como sus 1-amino- 1-desoxialditoles diastereoméricos, mediante una reacción de aminación reductiva con (S)-1-amino-2-propanol y (S)-α-metilbencilamina como aminas quirales. En la Primera Sección de esta Tesis se resumen los estudios realizados hasta el momento sobre polisacáridos de algas rojas, describiéndose las características estructurales de las familias del ágar, de los carragenanos, y de distintos polisacáridos cuyas estructuras se desvían respecto de dichas familias. La Segunda Sección contiene los resultados obtenidos y la discusión de los mismos. Puede dividirse en nueve partes: 1) Se efectuó la extracción, aislamiento y purificación de los polisacáridos provenientes de algas recolectadas en las Provincias de Chubut y Buenos Aires. Previamente fue necesario destruir la cubierta de carbonato de calcio por tratamiento cuidadoso con ácido clorhídrico diluido cuidando que el pH no disminuya de 6. Los productos obtenidos se caracterizaron cuantificando el contenido de hidratos de carbono, sulfato, proteínas, etc., determinando los pesos moleculares promedio y los poderes rotatorios, e identificando y cuantificando los azúcares componentes. Para ello fue necesario considerar ciertos aspectos de la metodología empleada para adecuarla a las características particulares de estos productos. Los análisis indicaron que los polisacáridos pertenecen a la familia del ágar debido a la presencia de galactosas de las series Dy L en proporciones aproximadamente equivalentes. Como caracteristicas distintivas mostraron una alta cantidad de xilosa (la mayor encontrada en los polisacárídos de algas rojas), y una elevada proporción de galactosas mono-O-metiladas en las cuatro posiciones posibles. El grado de sulfatación de estos productos es moderado en comparación con otros galactanos de algas rojas y los pesos moleculares son relativamente bajos. 2)Los polisacárídos se fraccionaron por cromatografia de intercambio iónico sobre DEAE-Sephadex A-SO eluyendo con soluciones de cloruro de sodio de concentración creciente, y se obuvieron once fracciones que fueron caracterizadas del mismo modo que los productos nativos. Se observó que el orden de elución está determinado por la cantidad de sulfato, como cabía esperar. El análisis de los poderes rotatorios confirmó que existe alrededor del 50% de galactosas de las series D y L, y que esta familia de polisacárídos estaría formada por el esqueleto típico de los galactanos de algas rojas: galactosas unidas α-(l→3) y β-(l→4), perteneciendo las unidades a a la serie L. 3) Las fracciones obtenidas fueron estudiadas por metilación, utilizándose una modificación del método de Hakomori que permite la solubilización de los polisacárídos sulfatados en dimetilsulfóxido. Los resultados confirmaron que los coralinanos están constituidos por la estructura básica de galactosas unidas por C-3 y C-4. En las fracciones principales, la unidad A (D-Gal unida por C-3) está casi en su totalidad sustituida en C-6, mientras que los oxhídrilos de las posiciones 2 y 4 están libres. La unidad B (L-Gal unida por C-4) se encuentra sin sustituir en un porcentaje levemente mayor al 50%, y está sustituida en igual proporción en los C-2 y C-3. Los sustituyentes en las tres posiciones mencionadas son: sulfato, xilosa y 4-O-metilgalactosa. 4) Se efectuó un estudio por etilación de los polisacáridos para determinar la ubicación de los grupos metoxilo sustituyentes. Se determinó que la 2-O-metil- y 3-O- metilgalactosa están presentes en su mayor parte en la unidad B, por lo que en compuestos de la familia del agar deben pertenecer a la serie L, mientras que la 6-O- metilgalactosa sólo se encuentra en la unidad A debiendo tener entonces configuración D. Por su parte, la 4-O-metilgalactosa aparece sólo como cadena lateral. Es de notar que las galactosas monometiladas se encuentran no sustituidas. Este hecho muestra un importante grado de regularidad en la estructura aparentemente diversa de estos polisacáridos. 5)Los polisacáridos fueron desulfatados y los productos obtenidos estudiados por metilación. Dados los problemas que se presentan en las desulfataciones ácidas (degradaciones), se probaron distintos métodos de desulfatación solvolítica pero el grado de desulfatación obtenido no permite determinar en fonna precisa las proporciones dc sulfato en cada posición. Por lo tanto, se decidió llevar a cabo la reacción con HCI / metanol y, si bien se produjo cierta degradación de los polímeros, los resultados permitieron establecer claramente que el sulfato está ubicado en el C-6 de las unidades A y en las posiciones 2 y 3 de las unidades B. Luego de la desulfatación, la presencia de sulfato en estas dos últimas posiciones disminuye hasta casi desaparecer, mientras que el C-6 de la unidad A permanece sustituido en una proporción importante indicando que la xilosa se encuentra unida mayoritariamente en esa posición. Sin embargo, los datos para las fracciones menores no permiten afirmar la ausencia de xilosa en el C-3 de la unidad B (ligada por C-4), ya que la metilación de los productos desulfatados muestra la existencia de cierta cantidad de galactosas disustituidas en las posiciones 3 y 4. 6)Se efectuó el estudio de los polisacáridos por derivatización como sus 1-aminoalditoles diastereométricos, obtenidos por aminación reductiva con (S)-1-amino-2-propanol para asignar la configuración de los monosacáridos componentes. La 2-O-metil- y 3-O-metilgalactosa pertenecen en su mayor parte a la serie L lo que coincide con lo predicho por etilación, mientras que la 6-O-metilgalactosa pertenece en su totalidad a la serie D. En los polisacáridos de algas rojas, la 4-O-metilgalactosa siempre fue encontrada como cadena lateral y con configuración L. Sin embargo, los resultados de aminación reductíva determinan que dicho azúcar, al menos mayoritariamente, pertenece a la serie D en los polisacáridos de Corallina officinalis. 7)El conjunto de datos obtenidos permitió establecer que los polisacáridos de Corallina officinalis están constituidos por la estructura altemante →3)-β-D-Galp( l→4)-α-L-Galp-(1→. Esta estructura está enmascarada por sustitución en la posición 6 de la unidad A por sulfato y ramificaciones de β-D-xilosa, junto con cantidades menores de metoxilo y cadenas laterales de 4-O-metil-D-galactosa. En la unidad B los sustituyentes son rnetoxilo y sulfato en los C-2 y C-3. Sin embargo, los coralinanos forman una familia de compuestos con caracteristicas variantes que puede dividirse en cuatro grupos: los Grupos Principal, Variante 1A, Variante 1B y Variante 11. La estructura promedio del Grupo Principal se presenta en la Figura, y los sustituyentes se describen en la Tabla de la página siguiente. Es característico de estos compuestos la ausencia de 3,6-anhidrogalactosa y de galactosa 6-sulfato enlazada por C-4, la importante proporción de ramificaciones de xilosa, y la variedad y cantidad de galactosas metiladas. El Grupo Variante 1A es semejante al Principal, pero contiene una menor proporción de xilosa y un aumento de sulfato y metoxilo; esta tendencia se acentúa en el Grupo Variante 1B donde la proporción de xilosa es mínima, es alto el porcentaje de sulfato en la posición 6 de la unidad A, y también aumenta la cantidad de 2-O-metil-L-galactosa. La estructura del Grupo Variante 11 es más compleja. La diferencia principal respecto de los demás compuestos es un aumento de las unidades de galactosa sin sustituir, y por consiguiente una menor proporción de sulfato y xilosa, pero es característica de estos productos la alta proporción de 4-O-metil-D-galactosa presente como cadena lateral. 8)Se estudió la separación e identificación de los O-acetil-O-etil-galactononitrilos y galactitoles, así como de ciertos derivados mono-O-metilados etilados, para su utilización en el análisis de polisacáridos metilados naturalmente. Se informaron los tiempos de retención y los picos principales en los espectros de masa para los distintos azúcares. Por analogía con el comportamiento de los derivados metilados, se propusieron los caminos de fragmentación de los aldononitrilos parcialmente etilados y se ilustró el empleo de dichos mecanismos para determinar la posición de los grupos metoxilo. 9)Se desarrolló un nuevo método para asignar la configuración de azúcares enantioméricos, por reacción con (S)-1—amino-2-propanol para obtener los correspondientes 1-amino-1-desoxialditoles diastereoméricos. Se presentaron los tiempos de retención de los derivados de distintos monosacáridos pertenecientes a las series D y L. La técnica es muy sencilla y permite asignar en forma precisa la configuración de diversos azúcares obteniéndose un sólo pico cromatográfico para cada uno, y simplificándose en gran medida los cromatogramas en comparación con otras técnicas de derivatización, lo cual es especialmente valioso en heteropolisacáridos. Esta técnica puede emplearse simultáneamente para el análisis de azúcares componentes, a modo de complemento de los métodos de derivatización como alditoles o aldononirrilos acetilados. En la Tercera Sección se presenta una descripción de los materiales y métodos experimentales utilizados.

La SUMOilación es una modificación post-traduccional de proteínas exclusiva de eucariotas, intensamente estudiada en la actualidad. Esta modificación consiste en la unión covalente de una proteína con homología estructural a ubiquitina, llamada SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier), a un residuo de lisina de la proteína blanco, alterando su superficie de interacción y afectando así su localización, estabilidad, actividad y/o interacción con otras proteínas. Normalmente sólo un bajo porcentaje de una proteína se encuentra SUMOilada en un momento dado y el efecto que esta modificación ejerce en ella no puede ser predicho a priori. La SUMOilación es una modificación dinámica y reversible, asociada a muchos procesos celulares como replicación y reparación del ADN, remodelación de la cromatina, segregación cromosómica, metabolismo del ARN, transporte núcleo-citoplasma, etc. De hecho, la SUMOilación ha demostrado ser esencial en muchos organismos, incluyendo nuestro modelo de estudio, Trypanosoma brucei. T. brucei es un parásito extracelular de la familia Trypanosomatidae responsable de la tripanosomiasis africana o enfermedad del sueño en humanos y del Nagana en ganado. Estas enfermedades son endémicas del continente africano, lugar de residencia de su insecto vector: la mosca del género Glossina (tse-tse). El ciclo de vida de este kinetoplástido alterna entre formas replicativas y no replicativas ya sea dentro del hospedador mamífero como del insecto vector, pero sólo dos de ellas, la forma procíclica (intestino de la mosca) y sanguínea alargada (sangre/líquidos tisulares del mamífero) son cultivables de manera axénica en el laboratorio. T. brucei presenta un mecanismo sofisticado de variación antigénica que le permite evadir la respuesta inmune humoral montada por el hospedador contra su principal glicoproteína de superficie (VSG). Recientemente, este proceso ha sido asociado de manera directa con la SUMOilación de proteínas aún no caracterizadas. Considerando la relevancia de esta modificación post-traduccional en este trabajo de Tesis nos propusimos identificar de manera global proteínas SUMOiladas en el parásito. Para llevar esto a cabo, desarrollamos líneas transgénicas de parásitos procíclicos y sanguíneos en las que los dos alelos que codifican para TbSUMO fueron reemplazados por variantes etiquetadas para permitir la purificación de proteínas SUMOiladas en base a diferentes principios de afinidad y posterior identificación por espectrometría de masas. Estas líneas celulares nos permitieron validar la funcionalidad de las etiquetas empleadas pero las proteínas SUMOiladas no pudieron ser enriquecidas significativamente por sobre los contaminantes de la purificación. Las líneas transgénicas desarrolladas a continuación expresaron exclusivamente una versión de TbSUMO etiquetada en su extremo N-terminal y deficiente en residuos de lisina, reduciendo la co-purificación de proteínas contaminantes tras digestión con la endoproteasa Lys-C. Esta estrategia permitió la identificación de un número reducido de proteínas SUMOiladas. Sin embargo resultó de utilidad para demostrar que las cadenas de poliSUMO no serían esenciales para la viabilidad del parásito. Para optimizar los resultados obtenidos implementamos finalmente una estrategia recientemente descripta en la que expresamos una variante de TbSUMO que posee etiquetas para la detección y purificación de conjugados en su extremo N-terminal y una mutación cercana a su extremo C-terminal T106K. Esta modificación genera un sitio de clivado para la enzima Lys-C permitiendo que un fragmento de TbSUMO de solo 114 Da (motivo diglicina) permanezca unido al péptido modificado tras la digestión con la enzima. Tras un paso de enriquecimiento con anticuerpos anti diglicina, estos péptidos pequeños en forma de T pueden ser identificados por espectrometría de masas. De esta manera es posible realizar la identificación de las proteínas SUMOiladas y sus sitios de SUMOilación en un mismo experimento de proteómica. Siguiendo esta metodología pudimos identificar en parásitos procíclicos 52 sitios de SUMOilación en 44 proteínas de manera confiable, muchas de ellas asociadas a procesos de replicación y reparación del ADN, procesamiento y degradación del ARN, etc. Estos resultados en conjunto permiten evidenciar el rol de este modificador en la regulación de muchos `procesos fisiológicos relevantes para T. brucei. Para el estudio posterior de las proteínas SUMOiladas de interés desarrollamos también un sistema de SUMOilación específico para T. brucei en un sistema heterólogo bacteriano. Dado que la maquinaria de SUMOilación se encuentra ausente en procariotas, co-expresamos en E. coli las enzimas TbE1a, TbE1b, TbE2 y TbSUMO con etiquetas apropiadas en dos vectores compatibles de la serie Duet (pCDFDuet-1-TbSUMO-TbE2 y pACYCDuet-1-TbE1a-TbE1b). La proteína a SUMOilar fue co-expresada en el sistema completo con una etiqueta en su extremo C-terminal, para evaluar su patrón de modificación por Western blot en extractos bacterianos solubles. Esta estrategia nos permitió describir la formación de cadenas de poliSUMO in vitro y evaluar la SUMOilación de un sustrato modelo, como PCNA de Saccharomyces cerevisiae. Para validar la modificación de esta proteína blanco realizamos ensayos de deconjugación in vitro empleando la proteasa recombinante TbSENP. Esta proteasa específica de T. brucei permite revertir el patrón de SUMOilación del sustrato observado por Western blot. Este sistema sencillo y versátil constituye una herramienta fundamental para la validación de potenciales sustratos de SUMOilación, generación de mutantes, estudios funcionales y determinación de sitios de SUMOilación.