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Fil:Gelman, Diego Matías. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Liberaciones subóptimas o excesivas de dopamina son rasgos característicos de varias patologías muy frecuentes que incluyen a la enfermedad de Parkinson, esquizofrenia, desorden de déficit atencional e hiperactividad (ADHD) y autoadministración compulsiva de drogas de abuso. En este trabajo se estudió el rol del D2R mediante la generación de ratones mutantes condicionales. En primer lugar, generamos ratones deficientes de D2R en las neuronas dopaminérgicas (autorreceptores). Estos ratones tienen la síntesis y liberación de dopamina aumentada, son hiperactivos e hipersensibles a los efectos psicomotores de la cocaína, y tienen mayor motivación para trabajar por la comida. En segundo lugar, estudiamos los efectos de la pérdida de D2Rs en animales adultos que se habían desarrollado normalmente en comparación con ratones deficientes en D2Rs constitutivos que desarrollan programas compensatorios tempranos. La abrupta remoción de los D2R en la adultez provocó una marcada disminución de la locomoción, problemas severos en el aprendizaje y la coordinación de rutinas motoras. En algunos casos, se observó rigidez y temblor en los animales en reposo con características de parkinsonismo. Los resultados obtenidos, demostraron la importancia de la estricta regulación mediada por los D2R (pre y postsinápticos) en el control de la actividad locomotora, la sensibilidad a drogas de abuso y el estado motivacional de los animales.

Las quimerinas son una familia de GAPs (GTPase Activating Proteins) especificas para la familia de proteínas de Rac, reguladas por el segundo mensajero diacilglicerol (DAG) y los esteres de forbol. En mamíferos los genes CHN1 (o α) y CHN2 (o β) codifican para las cuatro isoformas conocidas, α1 y β1 presentan un dominio C1 y un dominio de GAP, mientras que α2 y β2 poseen un dominio adicional SH2. En el primer capitulo de este trabajo se muestra que el gen beta codifica para al menos 3 nuevas isoformas. La resolución de la estructura cristalográfica de β2-chimaerin. Se demuestra que es necesaria la unión del ligando al dominio C1 y la interacción con fosfolípidos de membrana para la activación del GAP. En el tercer capitulo se muestra que el dominio SH2 de β2-chimaerin es capaz de unir proteínas fosforiladas en tirosina y se identifican tres de estas proteínas. En el capitulo cuarto se reporta el clonado y caracterización de z-chimaerin, el producto del único gen de quimerinas presente en el pez cebra. Esta proteína posee características similares a las de mamíferos y se expresa de forma materna y zigotica a lo largo del desarrollo embrionario. En el ultimo capitulo se estudia la función de z-chimaerin en el desarrollo embrionario. Se determino que su actividad de GAP es necesaria en la capa sincitial del saco vitelino para regular el movimiento de epíboli.

Se ha estudiado la teoría general, técnica y aplicaciones dei método polarográfico. Se ha puesto a punto para análisis en serie, un polarógrafo modelo Heyrovsky - Shikata, de Leybold's Nachfolgen A.G.. Se adoptó con este fin, el sistema de ánodo externo y el dispositivo inscriptor a lápiz, acoplando además un condensador de 2000 microfaradios en paralelo entre el galvanómetro y la célula de electrolisis. Se determinó que la eliminación de las ondas del oxígeno puede efectuarse pasando una corriente de nitrógeno de 2-3 burbujas por segundo, durante 3 minutos. Se ha estudiado un método indirecto para la determinación polarográfica de pequeñas cantidades de sodio, basado en la precipitación del acetato de uranilo, magnesio y sodio en medio alcohólico y ulterior medida de la corriente de difusión del ión uranilo en carbonato de amonio a media saturación como electrolito soporte. Con tal motivo se estudiaron previamente las ondas polarográficas del ión uranilo, determinándose que en carbonato de amonio a media saturación, las corrientes de difusión son proporcionales a la concentración de dicho ión. Luego se verificó que cantidades de sodio de 10 a 150 gammas presentes en l ml de solución y precipitadas como acetato triple, según la técnica propuesta, dan una vez disuelto el precipitado en carbonato de amonio, ondas polarográficas correspondientes al ión uranilo, cuyas corrientes de difusión son proporcionales a dichas cantidades. La escala más apropiada es de 50 a 250 gammas de cloruro de sodio (osas de 20 a 100 gammas de sodio). Puede prolongarse hacia mayores cantidades (500 gammas de cloruro de sodio) pero hay que trabajar con menos sensibilidad del galvanómetro, o mejor, aumentar el volúmen de electrolito soporte. Puede trabajarse con menores cantidades que 20 gammas de sodio, con un aumento creciente del error que de un valor menor que 10%, llega a un 15-20% para cantidades de 8-10 gammas de sodio. Debe tenerse presente que debe trabajarse siempre comparando los resultados con escalas obtenidas a la misma temperatura. Cantidades hasta 2,5 mg de cloruro de calcio no interfieren, ni tampoco cantidades hasta 1 mg de cloruro de potasio. Si ambos cationes se encuentran conjuntamente en la solución, los límites máximos dependen de la cantidad de sodio presente. Si es mayor que 40 gammas (100 gammas de cloruro de sodio) son tolerables las cantidades mencionadas. Si es menor de 40 gammas debe tenerse en cuenta el gráfico de la figura 21. El método se estudió con vistas a la determinación de sodio en extractos de suelo. Se muestra especialmente apto para el trabajo en serie (y debido a la pequeña cantidad de sodio que puede determinar permitiría trabajar sobre pequeñas cantidades de muestra, evitando la preparación de volúmenes grandes de extractos. Por otra parte, con respecto al método común de determinación de sodio en suelos, el gasto del reactivo de Kahane es solo la cuarta parte por cada determinación.

Se estudió en este trabajo, la resistencia a las colicinas E2, K, 8, I, V y B. Para ello, se aislaron mutantes resistentes, aparecidas espontáneamente en cultivos de cepas Hfr y F^- de E. coli K12. De cada una de esas mutantes se estudió la resistencia a colicinas no empleadas en la selección y a los fagos T5, T6 y BF-23, que tienen resistencia cruzada con algunas de ellas. Por cruzamientos entre cepas resistentes y sensibles se ubicaron varias de esas mutaciones en el cromosoma de E. coli K12. Se obtuvieron los siguientes resultados: 1°) Son muy frecuentes las mutantes, de un solo paso, resistentes a más de una colicina. 2°) Existen varios fenotipos distintos de resistencia a una colicina; se diferencian entre si, por las otras colicinas o fagos a los que también resisten. 3°) En las cepas aqui estudiadas, a cada uno de esos fenotipos corresponde un genotipo distinto, pues las mutaciones correspondientes mapeanen loci ubicados en diferentes puntos del cromosoma. 4°) Algunas de las mutantes, entre las cuales hay mutaciones de punto y deficiencias, presentan alteraciones en su crecimiento, y varias se comportan anormalmente en reconbinación; aparentemente porque su integración está dificultada. 5°) Se ha confirmado la existencia de resistencia cruzada entre el fago BF-23 y las colicinas del grupo E; pero se ha observado que la presentan las mutantes que mapean entre los marcadores Metionina y Arginina, en tanto que otras cepas también resistentes a las colicinas E, que mapeanen otra región, retienen su sensibilidad al fago. 6°) No se han aislado mutantes simultáneamente resistentes a la colicina K y al fago T6, que según la literatura tienen resistencia cruzada; pero si se ha observado esa relación entre dicho fago y 1a colicina 8. Como en el caso anterior, esa caracteristica sólo aparece en mutantes de un determinado locus (el ubicado entre Lactosa y Galactosa), pues resistentes a 1a colicina que mapeanen otra zona, no la presentan. 7°) Los tipos de resistencia que se han observado, indican que los receptores sobre los cuales se adsorben las colicinas estudiadas en este trabajo, son especificos para cada una de ellas, y que no hay receptores comunes entre ellas y los fagos con los que pueden tener resistencia cruzada.

Se estudió el comportamiento del factor Col^+B en E. Coli k12 utilizando las HfrH, Hfr2 y Hfr4 ,1a F^+ y 1a PA309 efectuaron cruzamientos Col^+ x Col^-, Co1^- x Col^+ (en proporción 1:20 y 20:1), y se comprobo que Col^+B se transfería a frecuencias similares tanto en las Hfr (donantes) de distinta polaridad como en las F^+; que Col- no se transfería a las F^-Col^+; que ColB no presentaba ligamiento con ningún marcardor cromosómico en los recombinantes recuperados de los cruzamientos Col^+ x Col^- y que no había muerte de cigotas atribuible al pasaje de Col^- al citoplasma Col^+de la F^-. Por lo tanto se consideró también que Col^+B era un plásmido. Los cruzamientos Co1^+ x Col^- y los cruzamientos Col^+ x Col^+ presentan una maza de esterilidad en lo relativo a la transferencia de marcadores cromosómico, no asi en relación con los plásmidos. Las F^+ pierden totalmente su capacidad de transferir cromosoma, no asi la Hfr, que aunque su fertilidad esta muy disminuida mantiene su polaridad original. Las Hfrs de muy baja frecuencia de transferencia de marcadores cromosómicos pueden ser enriquecidas en su condicion de Hfr, pero rapidamente vuelve a su frecuencia de transferencia original. Los cruzamientos Col^- x Col^+ transfieren cromosoma como los Col^- x Col^-. Se plantean dos hipótesis para explicar esta situación.

La zanahoria es una planta bienal de estación fría que requiere de un período de vernalización para florecer. Sin embargo, algunos cultivares adaptados a zonas más cálidas requieren de menor vernalización y son clasificados como anuales o de floración temprana. El objetivo de esta tesis fue determinar la base genética e identificar los genes y/o regiones cromosómicas involucradas en los requerimientos de vernalización en la zanahoria. Para ello fueron evaluadas a campo familias segregantes F1, F2, F3, RC1 y RC2 obtenidas a partir de un cruzamiento entre una planta anual y una bienal. En base a los patrones de segregación observados se concluyó que la anualidad, o bajos requerimientos de vernalización, estaría determinada por un gen simple dominante. Al evaluar introducciones de zanahoria anuales y bienales de diversos orígenes geográficos y sus cruzamientos, se volvió a observar la total dominancia de la anualidad y se encontró variabilidad en el ciclo entre materiales anuales y entre materiales bienales. Utilizando un método molecular que se basa en similitud completa (BLAST), no se encontró en el genoma de la zanahoria secuencias homólogas al gen FLC, el cual juega un rol central en la respuesta a la vernalización en Arabidopsis y otras especies como las Brassicas. Mediante la técnica de mapeo se encontró una región cromosómica ligada a la respuesta a la vernalización en zanahoria. La misma se localizó en un grupo de ligamiento con 78 marcadores moleculares a una distancia de 0,69 cM y de 0,79 cM de los marcadores más cercanos. Este mapa servirá como base para el desarrollo de marcadores moleculares ligados al carácter y en un futuro para el mapeo físico y secuenciación de la región de interés utilizando una librería génica de BACs de zanahoria.

La zanahoria es una planta bienal de estación fría que requiere de un período de vernalización para florecer. Sin embargo, algunos cultivares adaptados a zonas más cálidas requieren de menor vernalización y son clasificados como anuales o de floración temprana. El objetivo de esta tesis fue determinar la base genética e identificar los genes y/o regiones cromosómicas involucradas en los requerimientos de vernalización en la zanahoria. Para ello fueron evaluadas a campo familias segregantes F1, F2, F3, RC1 y RC2 obtenidas a partir de un cruzamiento entre una planta anual y una bienal. En base a los patrones de segregación observados se concluyó que la anualidad, o bajos requerimientos de vernalización, estaría determinada por un gen simple dominante. Al evaluar introducciones de zanahoria anuales y bienales de diversos orígenes geográficos y sus cruzamientos, se volvió a observar la total dominancia de la anualidad y se encontró variabilidad en el ciclo entre materiales anuales y entre materiales bienales. Utilizando un método molecular que se basa en similitud completa (BLAST), no se encontró en el genoma de la zanahoria secuencias homólogas al gen FLC, el cual juega un rol central en la respuesta a la vernalización en Arabidopsis y otras especies como las Brassicas. Mediante la técnica de mapeo se encontró una región cromosómica ligada a la respuesta a la vernalización en zanahoria. La misma se localizó en un grupo de ligamiento con 78 marcadores moleculares a una distancia de 0,69 cM y de 0,79 cM de los marcadores más cercanos. Este mapa servirá como base para el desarrollo de marcadores moleculares ligados al carácter y en un futuro para el mapeo físico y secuenciación de la región de interés utilizando una librería génica de BACs de zanahoria.

Fil:Clayton, Rogelio Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Weber, Elsa Irene. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.