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Se ha realizado un estudio comparado de la sangre de 25 especies de Paseriformes, especialmente de los que habitan en la Argentina, habiéndose tratado también el Passer domesticus (Linnaeus) y el Serinus canarius Linnaeus, por ser muy comunes y abundantes. Se hace primero un estudio general de todos los elementos sanguíneos y luego se trata cada especie por separado. Al final lleva un capítulo de conclusiones, por las que vemos que en estas aves existen los mismos elementos que en la sangre de todos los vertebrados, en general, es decir, eritrocitos, eritroblastos en gran cantidad, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos, monocitos y plaquetas. En los eosinófilos se distinguen granulaciones alargadas y redondeadas y, asimismo, se observaron los pequeños y los grandes linfocitos.

Fil:Espinosa, María Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Kordich, Lucía Clelia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El presente trabajo tuvo por objeto el estudio de heparán sulfatos de grado de sulfatación comparables a Heparina y la modificación química de heparán sulfatos de mucosa intestinal bovina. El conocimiento de las diferencias estructurales entre heparán sulfato y heparina sirvieron de guia para las transformaciones realizadas sobre heparán sulfato con el fin de obtener productos de mayor actividad anticoagulante. En él se presentan: a) una descripción de la estructura y distribución de los glicosaminoglicuronanos presentes en vertebrados superiores, con especial referencia a heparán sulfato y heparina; b) una descripción de los estudios estructurales sobre heparán sulfatos, con especial referencia a los métodos degradativos de la cadena glicosídica que brindan información sobre secuencia de residuos con diferente grado y posiciones de sulfatación; c) una descripción de los estudios biosintéticos y de actividad biológica de heparán sulfato, con especial referencia a similitudes y diferencias con heparina, el otro glucosaminoglicuronano N-sulfatado presente en la naturaleza; d) una descripción de las modificaciones químicas de glucosaminoglicuronanos y oligosacáridos relacionados, con especial referencia al impacto del cambio de estructura en la actividad biológica; e) una descripción detallada y discusión de los resultados obtenidos: 1. Glicosaminoqlicuronanos de tejidos de rata Se aislaron dos polisacáridos altamente sulfatados (L1, PM 16.000 y L2, PM 11.700) de tejidos de hígado de rata, que fueron purificados por cromatografía en DEAE-celulosa. Se aislaron heparán sulfatos de tejidos de corazón y pulmón para comparación, que fueron fraccionados por cromatografía en geles de acuerdo a su peso molecular (C1, PM 35.500; C2, PM 15.500; C3, PM 8.300; C4, PM 4.700; C5, PM 2.800; Pl, PM 33.900; P2, PM 14.500; P3, PM 5.400). Se procedió a la extracción del heparán sulfato de hígado de rata en su forma nativa, es decir como proteoglicano, con clorhidrato de guanidinio. Después de purificar el extracto por cromatografía se aisló un único proteoglicano, a partir del cual se liberaron L1 y L2 por tratamiento alcalino. Se determinaron las actividades anticoagulantes in Vitro usando ensayos de coagulación (anti factor IIa, anti factor Xa, APTT), que resultaron acotadas a un rango estrecho (5 a 44 UI/mg) a pesar de la amplia variabilidad de Peso Molecular y grado de sulfatación. Las actividades anti Xa observadas para L1, P1 y C4 no fueron neutralizadas por adición de sulfato de protamina. La caracterización de L1 y L2 (relación sulfato/disacárido 2,05 y 2,48 respectivamente) como heparán sulfatos altamente sulfatados y no como heparinas de baja actividad anticoagulante fue realizada en base a los siguientes estudios: i) análisis de componentes de L1 y L2: se cuantificaron urónicos (32,8 y 34,1%), hexosaminas (21,0 y 21,1%), sulfato total (19,2 y 23,3%), hexosaminas N-sulfatadas (9,8 y 13,2%) y la relación idurónico/glucurónico (27:73 y 38:62, respectivamente). ii) degradación con ácido nitroso de L1 y L2: el perfil de N-sustitución se analizó por degradación con ácido nitroso a pH 1,5 y los oligosacáridos resultantes se cromatografiaron en Biogel P2. Las glucosaminas N-sulfatadas y N-acetiladas en L1 y L2 están segregadas formando regiones ricas en N-sulfato y regiones con alto contenido en N-acetilos consecutivos. iii) estudios enzimáticos: L1 y L2 no sufren degradación por tratamiento con condroitinasa ABC y heparinasa. iv) comportamiento electroforético: se analizaron por electroforesis discontinua en placa de agarosa, en acetato de bario/1,3-diaminopropano, sistema que permite diferenciar condroitín sulfato y dermatán sulfato, heparán sulfato y heparina, no distinguibles en otros sistemas; L1 y L2 presentaron la misma movilidad que un heparán sulfato testigo, y distinta a la de una heparina. v) estudios de metilación: se extendió la aplicación del método de metilación que utiliza butillitio en la generación del alcóxido, a polisacáridos sulfatados. Se procedió al estudio por este método de heparina, heparán sulfato de mucosa bovina y L1. Las conclusiones más significativas son: — ausencia de glucosamina 3,6-di-O-sulfatada en L1; este residuo está presente en el oligosacárido del sitio de unión de heparina a antitrombina III y fue detectado sólo en heparina, — presencia de glucurónico 2-O-sulfatado en L1, componente inusual en glucosaminoglicuronanos y que no fue detectado en los estudios comparativos realizados con heparina y heparán sulfato de mucosa bovina. vi) Resonancia Magnética Nuclear de 13C: se realizó el análisis estructural de L1 por R.M.N. de 13C, registrándose en las mismas condiciones los espectros de heparina, heparina N- y O-desulfatada y heparán sulfato de mucosa bovina para un análisis comparativo de los mismos; en la región anomérica se observan señales correspondientes a los C-l de glucosamina N-sulfatada y N-acetilada, idurónico 2-O-sulfatado y glucurónico; se comprueba la presencia de glucurónico 2-O-sulfatado por la señal a 103,0 ppm; se establecieron las siguientes relaciones: N-Ac/N-Sulfato 56:44; 6-0H/6-O-sulfato 54:46. vii) actividades anticoagulantes: L1 y L2 presentaron baja actividad en el ensayo APTT (14 y 44 UI/mg, respectivamente); en ambos casos la actividad anti Xa resultó mayor que la actividad anti IIa; la actividad anti Xa de L1 no fue neutralizada totalmente por la adición de sulfato de protamina. 2. Modificaciones químicas de heparán sulfatos Se aisló heparán sulfato de mucosa bovina por precipitación fraccionada y por cromatografía de intercambio iónico a partir de una mezcla de subproductos de extracción de heparina; se caracterizó por electroforesis en placa de agarosa, espectro de R.M.N. de 13C, metilación con BuLi/MeI, perfil de degradación con ácido nitroso, análisis de componentesy actividad anticoagulante. Este heparán sulfato se utilizó como material de partida para las modificaciones químicas. Se realizaron seis modificaciones químicas diferentes que se analizaron por métodos químicos y/o espectroscópicos: i) O-sulfatación de heparán sulfato: se utilizaron tres condiciones diferentes: 1. sal de trietilamonio / N,N—dimetilformamida / trióxido de azufre-trietilamina; 2. sal de piridinio / dimetilsulfóxido / trióxido de azufre-trietilamina; 3. sal de piridinio / N,N-dimetilformamida-dimetilsulfóxido (5:1) / trióxido de azufre-trietilamina. En todos los casos se observó un nivel variable de N-desulfatación (por R.M.N. de 13C), que es menor en el método 3. La posición 6 de glucosamina resultó la más reactiva, seguida por la posición 2 de los ácidos urónicos. ii) N-desacetilación/N-sulfatación: la desacetilación se llevó a cabo por hidrazinólisis y se N-sulfató con trióxido de azufre-trietilamina en carbonato de sodio. Esta secuencia permitió aumentar la relación N-sulfato/N-acetilo de 0,6:1 a 2:1 y la actividad anticoagulante de 8,3 a 25,6 UI/mg. iii) O-carboximetilación de HS: Las condiciones de carboximetilación (ácido monocloroacético en hidróxido de sodio) no resultaron efectivas sobre el polímero tal cual. La reducción previa de los grupos carboxilo permitió la introducción de 1,15 grupos carboximetilo por disacárido. El producto se analizó por metanólisis —acetilación seguida de cromatografía gas líquido — espectrometria de masas, caracterizándose 6-O-carboximetilhexosa y 6-O-carboximetilhexosamina. iv) oxidación con periodato de sodio / reducción / sulfatación: la oxidación de un 20 %de los ácidos urónicos de HS, la reducción de los grupos aldehido a alcohol y la sulfatación posterior dio un producto altamente sulfatado que presentó una mayor actividad anticoagulante. Es importante señalar que este producto de cadena abierta es reconocido como sustrato por heparinasa, enzima especifica para ácido L-idurónico 2-O-sulfatado. v) preparación de un derivado fluorescente: por aminación reductiva con 2-aminopiridina / cianoborohidruro de sodio sobre los grupos aldehido generados en la oxidación con periodato de heparán sulfato, se obtuvo un derivado fluorescente. El producto contiene 0,5 grupos fluorescentes por urónico oxidado. La eliminación alcalina del producto fue seguida por fluorescencia de los fragmentos obtenidos. vi) reacción con ácido acetilsalicilico: a través del cloruro del ácido se preparó un derivado de heparina de bajo peso molecular que contiene unidades de acetilsalicilico acilando los nitrógenos de las unidades de glucosamina, según se desprende del análisis del espectro de carbono 13 y del perfil de degradación con ácido nitroso. El producto presentó una actividad de 102,0 UI/mg (APTT). Este producto constituye el primer conjugado heparina-acetilsalicilico que se prepara. f) una descripción de las técnicas experimentales utilizadas.

Tesis - Doctor en Ciencias de la Salud - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaría de Graduados en Ciencias de la Salud, 2013

En la ciudad de Córdoba la hepatozoonosis se encuentra presente en la población canina desde hace unos años. Con el fin de profundizar en el conocimiento sobre la enfermedad en la zona, se evaluaron los hallazgos hematológicos y bioquímicos de muestras de sangre canina remitidas por veterinarios clínicos al Laboratorio MEV. Durante el período 2016-2018, 31 perros fueron diagnosticados con Hepatozoon sp. mediante la observación de gamontes en los frotis sanguíneos coloreados. Los hallazgos principales fueron: anemia (54,84 %), leucocitosis (54,84 %), desvío a la izquierda (48,39 %), aumento de la fosfatasa alcalina (54,84 %) e hipoalbuminemia (45,16 %). La mayoría de los casos se presentaron con parasitemia moderada (54,84 %) y elevada (29,03 %). La co-infección con piroplasmas intraeritrocitarios (probablemente Babesia sp.) estuvo presente en 1 caso y con mórulas de Ehrlichia canis en 2 casos. Se presume que la especie de Hepatozoon implicada en la región es Hepatozoon canis ya que es la única confirmada en el país y responde a la sintomatología clínica y resultados de laboratorio esperados respecto de la bibliografía consultada. Los hallazgos hematológicos y bioquímicos que la caracterizan permiten orientar al diagnóstico de la enfermedad. Es importante incrementar la divulgación de la presencia de esta enfermedad en la zona de estudio ya que generalmente es sub-diagnosticada.

En el este trabajo se presenta un caso clínico de hepatozoonosis en un canino, diagnosticado por frotis de sangre periférica. Es uno de muchos casos clínicos con sintomatología similar, que se presentan en una clínica veterinaria en La Calera (Córdoba), de los cuales sólo en algunos se obtiene el diagnóstico de hepatozoonosis, pero la gran mayoría responden a la terapia específica para la enfermedad. La hepatozoonosis es una enfermedad poco diagnosticada en Córdoba; y en Argentina la única especie reportada hasta el momento es Hepatozoon canis. La finalidad del presente trabajo es dar importancia a la existencia de enfermedades transmitidas por garrapatas en la provincia Córdoba, en particular la hepatozoonosis, como así también mejorar el diagnóstico de dicha enfermedad y el control de las garrapatas.

Tesis (Grado Doctor en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Facultad de Agronomía. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Universidad Nacional de Córdoba . 2015 - 176 h. con Apéndices + CD. ils.; tabls. grafs. Contiene Referencia Bibliográfica y Publicaciones Derivadas de la Tesis. Abstract en español e inglés.

La manipulación de la apomixis, reproducción asexual por medio de semillas, puede tener un gran impacto en la agricultura. La apomixis es el modo principal de reproducción en Paspalum notatum, una gramínea forrajera nativa de América Central y del Sur. Los citotipos diploides son sexuales mientras los tetraploides son apomícticos. Los objetivos de este trabajo fueron estudiar el control genético de la apomixis e identificar marcadores moleculares ligados al carácter. Se generaron progenies F1, F2s y retrocruzas a partir de un cruzamiento original entre una planta tetraploide 100 % sexual con una apomíctica obligada. Las progenies fueron clasificadas en sexuales o apomícticas mediante la observación directa de sacos embrionarios en 60 óvulos por cada planta. Las plantas que poseían únicamente sacos meióticos fueron consideradas sexuales, mientras que se clasificó como apomíctica a aquella que tenia sacos apospóricos. En todos los cruzamientos sexuales X apomícticos la segregación fenotípica fue cercana a 3:1 (sexuales:apomícticas). La autopolinización de plantas F1 sexuales y los cruzamientos entre ellas, siempre dieron origen a descendientes sexuales. Estos resultados no se ajustan a un modelo Mendeliano clásico para una herencia de tipo tetrasómica y con control monogénico. Es probable que algún mecanismo de distorsión gamética o genotípica provoque la muerte de algunas gametas o genotipos que condicionan para apomixis. El análisis de segregantes en grupos (Bulked Segregant Analysis) fue usado para identificar marcadores de RAPD, AFLP y RFLP asociados con la apomixis. Diez plantas fueron incluidas en cada uno de los grupos (S y A). Se probaron cuatrocientos iniciadores de RAPD y se utilizaron 10 combinación de pares de oligonucleótidos de AFLP. Se ensayaron 77 sondas de RFLP de maíz y arroz. Dos marcadores RAPD,2 de AFLP y 2 RFLP mostraron diferencias entre los grupos. Todos fueron específicos del padre y del grupo apomíctico. El análisis de segregación en una población de 175 individuos F1 para RAPD, 100 para AFLP y 132 para RFLP, mostró un ligamiento completo entre el locus Apo y los seis marcadores moleculares descubiertos. El locus de la apomixis fue encontrado relacionado con el extremo distal del brazo largo del cromosoma 12 de arroz. Los marcadores moleculares confirmaron que el carácter posee un control monogéneico y es dominante sobre la sexualidad, pero la segregación también mostró distorsión de las proporciones Mendelianas esperadas.

Triatoma infestans es un insecto de alta importancia sanitaria en Latinoamérica debido a su rol como vector de la enfermedad de Chagas. Este insecto es controlado mediante el rociado de las viviendas con insecticidas. A partir de las década de 1980, las medidas de control se focalizaron en el uso de la deltametrina, un insecticida de alta efectividad triatomicida y baja toxicidad en humanos. Sin embargo, a fines de la década de 1990 se detectaron fallas de control que fueron correlacionadas con una disminución de la efectividad del compuesto en las poblaciones de insectos. El desarrollo de resistencia a deltametrina fue detectado en diferentes localidades de Argentina y Bolivia, y durante los primeros años de la década 2000 ha sido causal de la disminución de la efectividad de los rociados con deltametrina. En este trabajo de tesis se determinó el alcance de la zona resistente en las provincias de Salta, Santiago del Estero y Chaco. Se evaluaron distintas localidades en cada provincia y se demostró que existen poblaciones de vinchucas con alto y mediano grado de resistencia, como así también prevalecen las áreas con T. infestans susceptibles a la deltametrina. Con el fin de determinar la posible reversión de la resistencia a deltametrina, resultó de interés determinar el modo de herencia de la resistencia a deltametrina en T. infestans. Se condujeron cruzamientos recíprocos de insectos susceptibles y resistentes, y se evaluó el grado de resistencia en la descendencia. Se demostró que la resistencia a este insecticida se hereda de manera autosómica y semidominante, y que se trata de un carácter determinado por al menos un gen mayoritario. Además, se evaluó la respuesta a la deltametrina en generaciones sucesivas de T. infestans resistentes, y se determinó la estabilidad de esta característica en poblaciones de campo y laboratorio. Mediante el uso de bioensayos se determinó la toxicidad de la deltametrina en los distintos estadios de desarrollo de T. infestans. Este ensayo demostró que la cantidad de insecticida necesario para eliminar al cincuenta por ciento de los insectos de una población susceptible aumenta con el estadio, y que la ninfa V es el estadio más tolerante al tratamiento químico. Por otra parte, se verificó que la resistencia a la deltametrina se expresa en todos los estadios de desarrollo. Además, se verificó que la ninfa V representa el estadio más resistente al insecticida en estudio, en comparación con la cepa susceptible. La confección de una tabla de vida permitió determinar las variaciones en el ciclo de vida del vector, en relación a la expresión de la resistencia. La evaluación de la duración de los estadios permitió demostrar que existen diferencias significativas entre la duración de los estadios II, III y V de las cepas susceptible y resistente. La mayor contribución a las diferencias estuvo dada por la duración de la ninfa V, la que presentó una duración significativamente mayor en la cepa resistente. Estos resultados sugirieron que la ninfa V ocupa un lugar clave en la estructura de las poblaciones resistentes a insecticidas mediante un mecanismo doble de resistencia: un alto grado de resistencia toxicológica, y un posible comportamiento de letargo de desarrollo asociado al refugio de la aplicación de insecticida. Además, la estructura poblacional fue evaluada mediante la confección de una matriz poblacional de estadios para las cepas susceptible, resistente, y sus cruzas recíprocas. La proyección de esta matriz demostró una menor tasa reproductiva en las cepas resistentes, en relación a la susceptible. El análisis prospectivo y retrospectivo de los parámetros poblacionales demostró que la causa fundamental de las diferencias en la tasa de crecimiento está asociada a una importante disminución de la fecundidad de las hembras resistentes. Además, se detectó una fuerte contribución de la duración de la ninfa V en este estadio, posiblemente debido a su asociación directa con la muda al estadio reproductivo. Los resultados de este trabajo de tesis indican que la resistencia a la deltametrina está presente en las provincias de Salta y Chaco. Además, se demuestra que es posible el cruzamiento entre insectos de zonas distantes geográficamente, y que el cruzamiento entre insectos susceptibles y resistentes genera una disminución amplia del grado de resistencia. Sin embargo, se observa que existen diferencias reproductivas entre las poblaciones susceptibles y las resistentes a deltametrina. Estas diferencias podrían estar asociadas a la resistencia a deltametrina y manifestarse no sólo con una menor fecundidad, sino como un cambio en la estructura poblacional y las tasas de muda al estadio adulto.