Catálogo de publicaciones

En esta tesis se sintetizan por medio de un metaanálisis las principales causas que explican la distribución de la ocurrencia de floraciones de cianobacterias potencialmente tóxicas en la Argentina, un gran territorio con climas que van desde el tropical húmedo al templado frío. Se analizó en detalle la literatura académica publicada y la información disponible en informes técnicos desde 1945 hasta 2015; además se incorporaron datos de estudios no publicados. Las floraciones, definidas como eventos que superan las 5.000 células/ml, se registraron en lagunas, ríos, arroyos, embalses, estuarios y reservorios de agua. Se relacionaron la intensidad de la floración (abundancia máxima registrada para un sitio definido), las especies y las estrategias ecológicas (con dispersión homogéneas, formadoras de cúmulos y fijadoras de nitrógeno) responsables de cada evento con las características geográficas y climatológicas correspondientes a las localidades de los sitios de estudio, y con el tipo y el origen de los cuerpos de agua. Se registraron y georreferenciaron 122 sitios correspondientes a cuerpos de agua afectados por floraciones de cianobacterias planctónicas. La Puna y la región de la Patagonia Andina estuvieron libres de floraciones, con la excepción de una laguna en esta última área. Las lagunas y embalses de todas las eco-regiones fueron los sistemas acuáticos más propensos a experimentar floraciones (46% y 24%, respectivamente). No existen informes de floraciones en lagos; los ríos fueron principalmente afectados en los tramos con embalses (24 %) y los tramos ubicados debajo de las represas (15 %). El 74,5 % de las floraciones reportadas en Argentina excedieron el nivel 2 de alerta de la OMS para agua potable y aguas para baño (100.000 células / ml). Basados en el enfoque taxonómico polifacético de Komárek se identificaron 39 morfoespecies planctónicas potencialmente tóxicas responsables de las floraciones. Microcystis aeruginosa, Dolichospermum spiroides, Dolichospermum circinale, Raphidiopsis mediterranea y Cylindrospermopsis raciborskii se encontraron participando frecuentemente en las floraciones de especies mixtas o de una sola especie dominante. La distribución de especies difirió de acuerdo con la eco-región y el tipo de sistema acuático; las ecoestrategias están más fuertemente asociadas a estos factores. Por otra parte, las características limnológicas de los sistemas también parecieron estar relacionadas con la ecoestrategia de las especies formadoras de floraciones dominantes.

Se investigó el metabolismo de fosfato en deficiencia de a-tocoferol. Los estudios fueron integrados por: I - Experiencias de distribución de 32P en el espacio de fosfato de conejo. II - Experiencias de intercambio de 32P en la sangre de conejo. III- Propiedades de las ATPasas de eritrocito de conejo. IV - Propiedades de alosterismo que presentan las ATPasas de eritrocito de ratas alimentadas con distintas dietas. I) En deficiencia de a-tocoferol se encontró las siguientes alteraciones en la distribución del 32P en el espacio de fosfato: a) La velocidad do dilución del 32P en el plasma es más alta. b) Los tiempos medios de las fases de dilución del 32P son menores. c) Las constantes de dilución del 32P de las dos fases estan incrementadas. d) Los espacios relativos que integran el sistema en el cual se realiza el proceso de dilución del 32P son iguales. e) El espacio de fosfato está incrementado. f) La retención de 32P por el espacio extraplasmático se lleva a cabo más rápidamente, este aumento se interpreta como un incremento en la incorporación del 32P a Po. II) En deficiencia de a-tocoferol se hallaron las siguientes alteraciones en el intercambio de 32P en la sangre: a) La concentración del Pi esta incrementada en el eritrocito. b) La entrada de 32P está aumentada en el eritrocito; a esta conclusión se arribó por medio de la utilización de la actividad específica media del plasma y la consideración del aumento de la concentración del Pi en el eritrocito. c) Entre 30 y 240 minutos la actividad específica de Pi se mantiene anormalmente constante. d) Entre 30 y 240 minutos la actividad específica de Po aumenta a 100 %, en este caso, además de la interpretación basada en el intercambio de fosfato, se postuló la alteración de determinadas enzimas en la glicólisis o el aumento de la velocidad de glicólisis por el incremento del Pi. III) En estas experiencias se intentó relacionar alteraciones del metabolismo de fosfato en el glóbulo rojo con las ATPasas. En deficiencia de a-tocoferol se describieron las siguientes propiedades: a) Las ATPasa basal y ATPasa total tienen más alta actividad. b) La activación por Na+ y K+ de la ATPasa basal esta disminuída. c) No existen alteraciones en las enzimas solubles del eritrocito estudiadas, esto pone énfasis en que los daños en deficiencias están localizados en las membranas. d) No se encontró influencia del tocoferol sobre las actividades de las ATPasas y no hay peroxidación "in vitro" en el ghost o glóbulo rojo. e) El Km de la ATPasa basal es más bajo, esto concuerda con el incremento de la actividad de esta enzima. f) El pH óptimo de la ATPasa basal es mas bajo. g) La inhibición de la ATPasa basal por p-cloro-mercuribenzoato es igual, esto revela que los grupos SH involucrados en esta inhibición no se encuentran alterados. IV) Por último se relacionó las alteraciones de las ATPasas en deficiencia, con cambios de las propiedades alostéricas de las ATPasas de glóbulos rojos de ratas. A estos efectos se presentaron algunos resultados que muestran diferencias en el comportamiento alostérico de las ATPasas de eritrocito de ratas alimentadas con dieta básica suplementada con a-tocoferol y dieta comercial. Se sugirieron relaciones o paralelismos en las alteraciones entre las ATPasas de eritrocito en deficiencia y las ATPasas de eritrocito de rata, frente a la inhibición por F-.

La caracterización de las nucleósido-difosfo-glucosa pirofosforilasas (NDP-Glc PPasas) y glicolsiltransferasas es relevante para entender el metabolismo (y regulación) de los hidratos de carbono en el organismo respectivo y las derivaciones funcionales de los mismos. El presente trabajo de tesis está basado en la caracterización de NDP-azúcar PPasas y glucosiltransferasas (específicamente la glucógeno sintasa, GSasa) de bacterias Gram-positivas y de protozoos, así como en la realización de un análisis comparativo de las propiedades de las enzimas según su origen y con aquellas proteínas equivalentes encontradas en otros organismos. Estos estudios de relaciones de estructura proteica a función y regulación buscan alcanzar una mejor comprensión a nivel enzimático sobre los mecanismos cinéticos de las NDP-azúcar PPasas y GSasa, así como también a nivel metabólico sobre la forma en que la Glc-1-fosfato puede ser partida en diferentes metabolismos y este proceso regulado en distintas células. La estrategia general utilizada para llevar a cabo el trabajo fue realizar el clonado molecular de los genes codificantes para las enzimas respectivas, a fin de poder construir sistemas para la expresión de los proteínas recombinantes, que permitan la purificación en alto grado de las mismas con relativa facilidad. Las enzimas purificadas se caracterizarán en sus propiedades cinéticas, regulatorias y estructurales.

Se ha sugerido que algunos xenobioticos utilizados en los procesos de quimioterapia podrian ejercer su efecto tóxico a través de un aumento en la producción de especies de oxigeno activo. Los resultados obtenidos a traves de las observaciones realizadas sobre celulas de carcinoma de mama humano (MCP-7) muestran que el efecto de las antraciclinas (adriamicina) en concentraciones de 19^-7 M durante 9 días ejercen claramente efectos citotoxicos sobre las celulas tumorales, generando una situacion caracterizada por un aumento del 41% en el consumo de oxigeno, un aumento del 71% en los niveles intracelulares de peroxido de hidrógeno en el estado estacionario y un aumento del 91% en los niveles de produccion de sustancias reactivas con ácido tiobarbiturico (malondialdehido). Estas alteraciones metabolicas tuvieron como consecuencia un aumento del 91% en la quimioluminiscencia y una serie de modificaciones bioestructurales en las celulas sometidas al estres oxidativo generado por la adriamicina. Algunas de las alteraciones morfológicas observadas, además de una inhibición de la proliferación celular, fueron: a) una marcada tumefacción de las células y sus organelas, lo cual se tradujo en un aumento del 50% del volumen celular; b) una mayor captación de colorantes y c) una marcada condensación de la cromatina. La presencia de adriamicina no tuvo ningún efecto sobre los niveles de las enzimas antioxidantes mientras que la ausencia de suero indujo una disminución en los niveles de la enzima qlutation peroxidasa dependiente de selenio (2±0.3 mU/mg de proteina), los cuales se normalizaron (3.8±0.4 mU/mg de proteína) por la adición de 10% de suero fetal bovino al medio de cultivo. El selenio por otro lado mostró un efecto inhibitorio sobre la proliferación celular en concentraciones de 10-50 nM sobre las células de carcinoma de mama. Los resultados obtenidos contribuyen con la hipótesis de que las especies de oxigeno activo generados durante el ciclo redox de la adriamicina son los responsables de gran parte de los efectos citotóxicos debidos a esta droga. Las células de melanoma maligno cultivadas en monocapa presentan en la fase estacionaria del cultivo niveles de melanina (11.3±0.6 ug/10^6 células) mayores, comparados con los niveles presentes en la fase exponencial del cultivo (4.2±0.3 ug/10^6 células). De las observaciones realizadas sobre las células de melanoma humano con alto contenido de melanina podemos concluir que los niveles de peroxido de hidrógeno en el estado estacionario determinados por equilibrio difusional fueron menores (2.1±0.2 uM) en comparación con los obtenidos en el estado exponencial (3.3±0.2 uM) se encontró una relación similar en los valores de quimioluminiscencia espontanea obtenidos durante la rase estacionaria (78±24 cps/10^6 células) y la fase exponencial (169±27 cps/10^6 células). La citotoxicidad del peróxido de hidrógeno generado extracelularmente por el sistema glucosa-glucosa oxidasa, determinado despues de 60 min de exposicion, determinó valores de ICse encontrados para las cultivos en fase estacionaria y exponencial de 0.9 y 2.4 mU/ml de glucosa oxidasa respectivamente. Estos resultados diferenciales entre las dos fases de cultivo se interpretan como consecuencia de la mayor actividad de catalasa en los cultivos en fase estacionaria. Se realizaron una serie de observaciones in vitro sobre el efecto de preparaciones de melanina sintetica y tumoral obtenida apartir de tumores melanoticos, sobre diferentes sistemas de lipoperoxidacion. Las observaciones realizadas permiten concluir que la melanina puede actuar como eficaz atrapador de radicales alquilo (R-) y peróxilo (ROO-)con inhibición de 90% y 80% en los procesos de lipoperoxidación espontaneos para la melanina sintética y tumoral respectivamente. En los sistemas de lipoperoxidación iniciados con hidroperóxido de ter-butilo las preparaciones de melanina sintética produjeron una disminucion de la producción de sustancias reactivas con ácido tiobarbitúrico del 43%, mientras que las preparaciones de melanina tumoral no mostraron ningun tipo de efecto. Cuando se inició la lipoperoxidación con 2,2,azo,bis-amidinopropano, el cual genera radicales por efecto de la temperatura, las preparaciones de melanina sintética y tumoral produjeron una inhibición del proceso de lipoperoxidación de 73% y 84% respectivamente. Estos efectos sobre diferentes sistemas pueden explicarse dada la capacidad de la melanina de reaccionar con radicales del tipo RO- y ROO-, dando reacciones de adición-terminación y a la capacidad de quelar iones metálicos (Fe²+, Fe³+, Cu²+) catalizadores del proceso de lipoperoxidación, metales impidiendo así la propagación de la cadena de reacción. La determinación de los niveles de las enzimas antioxidantes en la corteza adrenal de rata y en las celulas provenientes de cultivos primarios de células de zona glomerulosa de corteza adrenal de rata, permiten sugerir que las condiciones de cultivo en presencia de 1 uM de ácido ascórbico no afectan los niveles de las enzimas superóxido dismutasa y catalasa, pero sí afectan los niveles de la enzima glutation peroxidasa y que el cultivo en ausencia de suero, así como la adición de selenio son capaces de modular los niveles de esta enzima, sin tener ningún efecto sobre la superóxido dismutasa y la catalasa.

Apartir de los resultados obtenidos en nuestro laboratorio sobre la modulación de la motilidad de los epimastigotes de Trypanosoma cruzi a través de los distintos efectores de la ruta metabólica del óxido nítrico, se planteó la necesidad de estudiar en forma más amplia el metabolismo del sustrato de la óxido nítrico sintasa, la L-arginina. Inicialmente se describió el transporte de este aminoácido en epimastigotes de T. cruzi en fase logaritmica de crecimiento. Se determinaron los parámetros cinéticos y sus características bioquímicas, siendo algunas de las más relevantes, las que se detallan a continuación: - El transportador presenta una alta afinidad por el sustrato (Km = 4.16 μM) en comparación con otros sistemas similares. - Es sumamente específico ya que no se inhibe competitivamente en presencia de aminoácidos naturales como así tampoco por análogos estructurales de la arginina. Sólo se observó una disminución significativa en la incorporación de L-arginina en presencia de homoarginina, canavanina y D-arginina. - Es saturable por sustrato, independiente de Na+,pero dependiente de ATP. - Es afectado en forma específica por el tiempo de "ayuno"de L-arginina. Cuando se estudió el destino de la arginina incorporada a las células en 30 minutos, se observó que el 4.3% se incorpora a proteínas, el 68.6% queda formando parte del conjunto de aminoácidos libres y un 27.1% se identificó como fosfoarginina. La presencia de fosfoarginina como fosfágeno involucrado en la regeneración del ATP,hidrolizado principalmente en el flagelo del parásito, explica probablemente la necesidad de un transportador específico de las caracteristicas descriptas. La relevancia de esta actividad biológica como posible blanco terapéutico tripanosomicida está dada por ser éste un sistema diferencial entre el parásito y el hospedador humano, quien carece de esta enzima pues utiliza la creatina como fosfágeno. Estas evidencias nos llevaron a centrar el interés del trabajo en el sistema transportador de arginina y la enzima arginina kinasa. En la segunda parte del trabajo se caracterizó bioquímicamente la enzima arginina kinasa. Se midió la actividad enzimática tanto in vivo como In vitro, se determinó su localización subcelular y sus parámetros cinéticos (Km para arginina, 0.33 mM y para ATP 0.31 mM). Se purificó parcialmente la actividad arginina kinasa en dos pasos cromatográficos, uno de intercambio iónico y el segundo de filtración molecular. También se estudiaron sus requerimientos de ATP y cationes bivalentes. Se ensayaron in vitro inhibidores potenciales de la enzima, siendo los más relevantes,el análogo natural canavanina, la homoarginina y la histidina. Se analizó también la presencia de la arginina kinasa en otros organismos, encontrándose dicha actividaden otras cepas y especies del género Trypanosoma y también en los denominados “trypanosomátidos inferiores" como Herpetomonas y Leptomonas. Finalmente se clonó el gen que codifica para la arginina kinasa de T. cruzi utilizando técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR)y rastreo en bibliotecas genómicas. El gen de 1074 pb codifica para una proteína de 357 aminoácidos y un peso molecular de 40 kDa (GenBank # AF070451),el cual probablemente se encuentre como copia única dentro del genoma. El análisis de la secuencia obtenida demuestra un alto grado de conservación evolutiva. El gen completo de la enzima se expresó en un sistema heterólogo (Escherichia coll) demostrándose actividad arginina kinasa de la proteína recombinante.

Las purinas y derivados como la alantoína son componentes abundantes del suelo, constituyendo una fuente de carbono y nitrógeno muy importante del hábitat natural de Streptomyces. En este trabajo de tesis se caracterizó la vía metabólica de degradación de alantoína como así también la regulación de la misma en S. coelicolor, mediante técnicas proteómicas, metabolómicas, bioquímicas, de biología molecular y de ingeniería genética. A partir de experimentos de proteómica se identificaron la mayor parte de las proteínas involucradas en la degradación de alantoína en esta bacteria. Posteriormente, se caracterizaron cuatro enzimas de esta vía, alantoinasa y alantoicasa, las cuales son esenciales para el crecimiento de la bacteria en medio con alantoína, e hidroxipiruvato isomerasa y tartronato semialdehído reductasa mediante técnicas bioquímicas y de ingeniería genética. Por otra parte, se identificó el regulador transcripcional negativo AllR del metabolismo de la alantoína en S. coelicolor. Ensayos in vitro permitieron identificar los sitios de unión de este regulador a tres promotores de la vía. Estos sitios se encuentran altamente conservados en otras especies de Streptomyces lo que denota una preservación en la regulación de esta ruta metabólica en este importante género bacteriano. Estos estudios permitieron proponer un modelo de regulación mediado por alantoato. A su vez, este trabajo permitió realizar una conexión importante entre el metabolismo primario de alantoína y el metabolismo secundario de producción de antibióticos en S. coelicolor. Por un lado, se evidenció que la degradación de alantoína provoca una marcada disminución de la producción de antibióticos. Mediante técnicas de metabolómica y análisis de compuestos nitrogenados en los cultivos se pudo determinar que el producto final de esta vía es amonio. El aislamiento de una mutante en el complejo ureasa, que no genera acumulación de amonio extracelular pero es capaz de producir niveles normales de antibióticos en medio con alantoína, permitió conectar el exceso de amonio con la inhibición de la producción de antibióticos durante el metabolismo de alantoína. Por otro lado, se estableció que el normal funcionamiento del regulador AllR es necesario para la producción de antibióticos en S. coelicolor, ya que la inactivación del gen allR afecta notablemente la síntesis de los mismos. La inactivación de genes que aumentan su expresión en ausencia del regulador AllR permitió identificar al gen hyi, que codifica para la enzima hidroxipiruvato isomerasa, como responsable de este efecto. La mutante AllR-Hyi- revierte la producción de metabolitos secundarios a los niveles de la cepa parental. Para agregar a esto, una mutación en el gen hyi en la cepa parental provoca un aumento de la síntesis de antibióticos y abre una puerta para estudios futuros como estrategia para aumentar la producción de compuestos bioactivos en esta especie bacteriana. Este trabajo expresa la importancia del estudio de las vías metabólicas primarias, no solo para aumentar el conocimiento general de este importante género bacteriano sino también debido a la interacción de estas vías con el metabolismo secundario y la posibilidad de una futura manipulación para beneficio del ser humano.

Los lípidos en el núcleo, al igual que en el resto de la célula, son moléculas muy versátiles que poseen un activo metabolismo e importantes funciones biológicas que abarcan roles estructurales, energéticos, y en la regulación celular, en procesos de señalización actuando como segundos mensajeros. Los lípidos nucleares se encuentran en dos localizaciones muy contrastantes, la envoltura nuclear, más fluida que el interior nuclear y compuesta de glicerofosfolípidos (GPL), esfingolípidos (SL) y colesterol (C); y dentro del núcleo, en las Gotas Lipídicas Nucleares (nLD), donde se encuentran concentrados todos los triacilglicéridos (TAG) y éster de colesterol (CE) nucleares, organizados en un core hidrofóbico rodeado de una monocapa de lípidos polares (LP), C y proteínas asociadas. El objetivo de este trabajo fue dilucidar el metabolismo y las funciones biológicas de los lípidos nucleares. Determinar la proteómica y la topología de los dominios lipídicos nucleares. Se utilizó como modelo experimental el cultivo primario de hepatocitos de rata y las células HepG2, y se evaluó a las nLD en forma comparativa con las Gotas Lipídicas Citosólicas (cLD) en una misma célula. Se aislaron nLD y cLD por sedimentación en gradiente de sacarosa. Se cuantificaron parámetros morfológicos de nLD y cLD a partir de imágenes de microscopía de fluorescencia mediante el software Image-Pro plus. Se utilizó como estímulo externo del metabolismo lipídico y de las LD, al ácido oleico (AO) en distintos protocolos experimentales. La composición lipídica se determinó mediante análisis bioquímicos tradicionales. Se diseñó una importante herramienta metodológica para abordar el estudio de proteómica de las nLD mediante la técnica de GeLC-MS. La muestra de nLD debió ser previamente concetrada y fue necesario eliminar los interferentes presentes, ya que las nLD constituyen una muestra compleja con baja cantidad de proteínas, y están formadas por lípidos neutros, que son moléculas hidrofóbicas que dificultan su análisis. Algunas de las proteínas identificadas en el subproteoma de las nLD ya habían sido descriptas en asociación a las cLD, y otras fueron descriptas por primera vez en el núcleo celular. Dentro de las proteínas descriptas, algunas poseen funciones estructurales, enzimáticas, otras constituyen factores de transcripción y marcadores de cáncer. Se identificaron dos proteínas asociadas al metabolismo lipídico, Ces1d (Carboxilesterasa 1d) y ECHP (peroxisomal bifunctional enzyme), involucradas en los procesos de lipólisis y de β-oxidación lipídica, respectivamente, que no habían sido descriptas hasta el momento en el núcleo celular. Teniendo en cuenta que Ces1d aun no ha sido cristalizada, se realizó un estudio in silico, y se predijo su estructura 3-D utilizando como molde su ortólogo humano CES1. El 95% de los residuos de Ces1d fueron modelados con más de un 90% de confianza. Mediante el alineamiento de secuencias, fue posible predecir además, la posición de potenciales sitios de interés asociados a la función, localización y estructura de Ces1d. En este trabajo se demostró que las nLD constituyen un dominio nuclear dinámico cuyas características morfológicas y composición responden en forma reversible a estímulos externos, como el ácido oleico. Estos resultados implican que las nLD estarían participando activamente en procesos que se desarrollan dentro del núcleo. En particular, se demostró que las células frente al estímulo externo de AO responden activando las rutas anabólicas que determinan un aumento en el número y tamaño de las LD en las poblaciones de cLD y nLD, a través de mecanismos de incorporación de lípidos neutros sintetizados de novo y de fusión de gotas existentes de menor tamaño. El fenotipo anabólico desencadenado por el AO se revierte al eliminar el estímulo del medio y se activan entonces, los procesos catabólicos de la célula que involucran un mecanismo de fisión de gotas grandes en gotas de menor tamaño. Estos procesos catabólicos incluirían la lipólisis y posterior oxidación de los lípidos neutros (LN) de las LD que disminuirían de tamaño por reducción de sus componentes y se iniciarían con la translocación de la Ces1d desde el citosol y la matriz nuclear hacia las cLD y nLD, respectivamente. La Ces1d presente en las nLD y las cLD, posee un activo rol en este proceso, hidrolizando TAG y CE. Los ácidos grasos (FA) liberados de la hidrólisis de los lípidos de las nLD por acción de la Ces1d, se unirían a la L-FABP (liver fatty acid binding protein) en la matriz nuclear, y translocarían a sitios de β-oxidación nuclear y/o citosólicos, y finalmente serían oxidados. Así mismo, los FA liberados en la matriz nuclear podrían unirse como ligandos, a factores de transcripción nucleares y participar en la regulación de estos mismos procesos. Las nLD no serían estructuras inmóviles nucleares sino que podrían desplazarse utilizando actina y miosina, actuando así como un sistema de delivery y de recepción de lípidos y de proteínas dentro del núcleo. A partir de los resultados de este trabajo, las nLD deben ser consideradas como un importante dominio nuclear a tener en cuenta, ya que seguramente están participando en muchos de los eventos que se desarrollan en el núcleo, además de los directamente relacionados con la homeostasis lipídica, tanto en condiciones normales como patológicas.

El objetivo de esta investigación fue estudiar el efecto de 2 posibles programas de ejercicio durante 2 meses, y luego observar cuáles fueron los cambios que indujeron sobre la composición corporal y la fuerza. La técnica de medición corporal empleada en diferentes momentos de la investigación es la establecida por la ISAK. Las medidas que fueron recogidas son las siguientes: -8 pliegues corporales: bicipital, tríceps, subescapular, cresta iliaca, supra espinal, abdominal, muslo anterior, pantorrilla Medial. -circunferencias: cintura mínima, abdominal, y cadera máxima. Además, se realizó luego de un mes de entrenamiento y al finalizar el segundo mes un test de RM Predictivo en sentadilla 90° (8RM Máximas, para luego determinar de manera indirecta su máxima RM). Los resultados mostraron mejoras al cabo de 2 meses para ambos grupos, tanto en la composición corporal, como aumento del RM predictivo también en los dos grupos.

El objetivo de esta investigación fue estudiar el efecto de 2 posibles programas de ejercicio durante 2 meses, y luego observar cuáles fueron los cambios que indujeron sobre la composición corporal y la fuerza. La técnica de medición corporal empleada en diferentes momentos de la investigación es la establecida por la ISAK. Las medidas que fueron recogidas son las siguientes: -8 pliegues corporales: bicipital, tríceps, subescapular, cresta iliaca, supra espinal, abdominal, muslo anterior, pantorrilla Medial. -circunferencias: cintura mínima, abdominal, y cadera máxima. Además, se realizó luego de un mes de entrenamiento y al finalizar el segundo mes un test de RM Predictivo en sentadilla 90° (8RM Máximas, para luego determinar de manera indirecta su máxima RM). Los resultados mostraron mejoras al cabo de 2 meses para ambos grupos, tanto en la composición corporal, como aumento del RM predictivo también en los dos grupos.

Trypanosoma cruzi es el agente causal del “Mal de Chagas”, enfermedad endémica en América Latina. Este parásito unicelular, al igual que otros parásitos tripanosomátidos, presenta un complejo ciclo de vida a través de diferentes hospedadores (insecto vector - hospedador vertebrado). A lo largo de su ciclo el parásito pasa por distintos estadios celulares, sufriendo profundos cambios morfológicos, fisiológicos y bioquímicos que le permiten adaptarse a los distintos ambientes. Uno de los estadios, el epimastigote, no es infectivo para el hospedador vertebrado y presenta una capacidad proliferativa que permite su cultivo en el laboratorio sin mayores dificultades. Trypanosoma cruzi presenta numerosas características metabólicas que lo diferencian de otros organismos incluso del mismo orden. Describir estas diferencias permitiría conocer más detalladamente al parásito aportando datos de utilidad taxonómica y evolutiva y contribuiría al posible desarrollo de tratamientos quimioterapéuticos más específicos y eficientes que los disponibles hasta el presente. Un punto clave en el metabolismo de los tripanosomátidos está asociado a las poliaminas. Estos policationes alifáticos (putrescina, esperrnidina y espermina) están presentes en la mayoría de los organismos, tanto procariotas como eucariotas, cumpliendo funciones celulares esenciales tales como asistir la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas, estabilizar macromoléculas y estructuras celulares y participar en la proliferación y diferenciación celular. La biosíntesis de poliaminas comienza por la conversión de ornitina en putrescina por acción de la ornitina decarboxilasa (ODC). Esta enzima es fundamental en la regulación de la síntesis de poliaminas y su actividad esta rigurosamente controlada a distintos niveles. Además, se ha descripto un inhibidor específico e irreversible, difluorometilornitina (DFMO), que ha facilitado el estudio de dicha enzima. Una vía alternativa de síntesis de putrescina actúa a través de la arginina decarboxilasa (ADC) cuyo sustrato es el aminoácido arginina. Esta enzima fue inicialmente descripta en plantas y bacterias y recientemente ha sido encontrada en ciertos tejidos de mamíferos. En parásitos protozoarios existen controversias con respecto a la existencia de las enzimas que catalizan el primer paso de la síntesis de poliaminas, especialmente la ADC. La discutida carencia de dichas actividades es suplida por un transporte activo constitutivo de poliaminas desde el medio extracelular. A lo largo de este trabajo confirmamos que los epimastigotes de distintas cepas de T. cruzi son auxótrofas para poliaminas. Esta auxotrofia esta ocasionada por la falta de la actividad enzimática de ODC y de ADC que, a su vez, se da por la ausencia de los genes correspondientes. Además, se transfectaron epimastigotes de T. cruzi con un vector de expresión recombinado con el gen de ODC de Crithidia fasciculata (clonado en este laboratorio). De este modo, caracterizamos al cultivo transfectado con el gen heterólogo de ODC a nivel fisiológico (capacidad proliferativa), bioquímico (síntesis y concentración intracelular de poliaminas y caracterización de la actividad enzimática heteróloga) y molecular (ubicación del gen heterólogo, determinación del número de copias, etc.). El cultivo transfectado se volvió autótrofo para poliaminas y sensible al inhibidor de la ODC, el DFMO. Sin embargo, luego de un cierto tiempo de cultivo en presencia del inhibidor se seleccionó una subpoblación resistente a DFMO. Este cultivo también fue caracterizado comparándolo con los cultivos sensibles. Finalmente, el parásito transfectado con el gen heterólogo de ODC contribuyó con los estudios sobre el metabolismo de las poliaminas en T. cruzí y podría ser útil en futuras investigaciones acerca de la relación poliaminas - diferenciación a tripomastigote (metaciclogénesis) y poliaminas - infectividad en células de mamíferos.