Catálogo de publicaciones

Las personas estamos expuestas a plaguicidas y micotoxinas cuando consumimos alimentos producidos por animales que estuvieron expuestos a estos contaminantes durante su alimentación. Además de los riesgos para la salud humana que estos peligros representan, son también un problema para la salud de los animales, afectan su capacidad de producción y causan pérdidas económicas importantes. El objetivo general de esta tesis fue estudiar metodologías analíticas para determinar micotoxinas y plaguicidas en leche y piensos para ganado basadas en técnicas avanzadas de cromatografía-espectrometría de masa y su aplicación en estudios de campo en la Provincia de Santa Fe. Para el análisis de leche, se optimizaron y validaron metodologías analíticas para determinar 105 compuestos diferentes (plaguicidas y aflatoxinas) en muestras de campo, encontrándose, por un lado, mayor prevalencia de insecticidas organofosforados como clorpirifos y diazinon, y cantidades traza de plaguicidas organoclorados (heptacloro e isómeros de DDT), y por otro lado una prevalencia de aflatoxina M1 cercana al 50% en las muestras analizadas con concentraciones medias inferiores a los límites máximos establecidos. En el análisis de piensos se aplicaron métodos de amplio alcance para la determinación de 420 plaguicidas y 56 micotoxinas en una variada selección de muestras, encontrándose alta incidencia de insecticidas organofosforados (clorpirifos y pirimifos-metilo) y micotoxinas tanto de ocurrencia histórica como otras emergentes no estudiadas previamente. Los resultados obtenidos constituyen un aporte importante para un mayor conocimiento sobre la residualidad de plaguicidas y micotoxinas en la primera etapa de la cadena de producción, útil para perfeccionar las prácticas de manejo y control.

1- Objeto del trabajo. La determinación da vitamina B12 en caldos de fermentación se realiza corrientemente por e1 método microbiológico con Lactobacillus leichmanii, que es el que mejor reproduce la activudad biológica de dichas muestras, pero presenta una serie de dificultades de orden técnico y además es uno de los métodos biológicos más susceptibles a variaciones fortuitas. El objetivo del presente trabajo es estudiar un método químico de rápida y segura ejecución, que permita seguir la curva de producción del método microbiológico, reemplzándolo. Para ello, se hizo revisión bibliográfica exhaustiva de los métodos químicos, seleccionando un método absorciométrico desarrollado por Rudkin-Taylor y efectuando la comparación. 2- Parte experimental. 1) En primer lugar, se estudiaron espectrofotométricamente los cristales de vitamina B12 patrón, determinando la relación de absorbancias A361/A278 y A361/A550, obteniéndose valores que cumplían con los límites teóricos. Además, se determinó la pureza de los cristale, resultando un valor de 95,8% que cumple con el mínimo requerido, que es 95%. 2) Se calibró el espectrofotómetro Beckman con soluciones de vitamina B12 patrón y complejos dicianuro, con el objeto de determinar el valor - ΔE1cm^1% a 582 mμ que resultó igual a 58,8. El método absorciométrico de Rudkin-Taylor se basa en la diferencia a 582 mμ entre los espectros de vitamina B12 y su complejo dicianuro, siendo necesario la calibración del aparato con soluciones patrón para evitar tener errores superiores al 10%. 3) A continuación se hizo un estudio comparativo de los métodos microbiológicos y químicos sobre distintos caldos. Se determinaron 24 caldos de fermentación por ambos métodos, 14 al ser cosechados y 10 en diversas etapas del proceso fermentativo. Se hicieron en total 62 comparaciones, fluctuando los Δ% en el 93,5% de las mismas, entre +- 17%. El balance resultó muy satisfactorio sobre todo si tenemos en cuenta que la desviación standard del método microbiológico es de alrededor de 15%. En este estudio comparativo, es muy importante la circunstancia de que la equivalencia de valores resultantes de ambos métodos, no se obtenga solo al final sino también a lo largo de las diversas etapas de la fermentación, lo que permite utilizar el método químico sin restricciones para determinar la curva de producción de vitamina B12, en presencia de intermediario de su síntesis biológicos. 4) Las variantes introducidas en el método espectrofotométrico, permiten salvar algunos inconvenientes que se presentaban al ser aplicado a la determinación de vitamina B12 en caldos de fermentación. a) En primer lugar, el estudio del tiempo de cianuración con 1% de CNK o CNN a permitió acortarle de 5 a 2 horas; se trató de eliminar esa etapa de cianuración pero un estudio comparativo sobre 9 caldos diferentes, demoestró que la recuperación de vitamina era entonces de 21,7% menor.(la cianuración convierte la B12 y variantes en su complejo dicianuro, que es la mejor forma de extraer la actividad del caldo por solventes, a pH de alrededor de 11,0.) b) El problema de emulsiones en las etapas extractivas, se trató de resolver con el uso de aniemulsionantes (Dupenol, Cuaternario) y también, haciendo un proceso de defecación (sulfato de aluminio, Sulfato de zinc o acetato de plomo) al caldo ya autolizado, pero ninguna de las dos variantes aportaron la solución buscada. En los ensayos de defecación, el sulfato de aluminio demostró ser útil en los niveles de 5 y 10% con una recuperación de vitamina de 95,5% con respecto al testigo, pero no presentó constancia en la eliminación del problema emulsiones. El acetato de zinc, por aparición de turbidez en las soluciones acuosas que deben leerse en espectrofotómetro y el acetato de plomo, por precipitación del cianuro y baja recuperación de B12, debieron ser desechados. Finalmente, una nueva técnica en la preparación de las muestras, permitió resolver favorablemente el problema, eliminando por centrifugación (1 hora a 2.000 r.p.m) las sustancias causantes de las emulsiones y autolizando las células, que contienen toda la vitamina en presencia de agua destilada. Además, esto permite obtener extractos acuosos finales de una pureza similar a los de vitamina B12 patrón y complejo dicianuro. c) El estudio de varios sistemas de solventes para agotar los caldos, permiten decir que si bien el alcohol bencílico es muy específico y sin duda el más aconsejable para extraer la vitamina, puede ser reemplazado por los sistemas: Butanol más 5% de una solución 90% de Fenol y butanol más 10% SO3Na2, obteniéndose en los dos casos resultados equivalentes en B12 y una curva de absorción espectrofotométrica de los extractos acuosos finales, perfectamente aceptabble. En ambos sistemas se agrega previamente a la extracción 20% de SO4Na2 (los ensayos cualitativos demostraron por el color de la fase solvente, que el selado es imprescindible para obtener buena recuperación de la vitamina presente en el caldo). 5) El estudio espectrofotométrico de mezclas de soluciones acuosas de CNK y B12 en diferentes concentraciones, permitió observar lo siguiente: a) Para valores de la relaciónƔ/ml CNK/Ɣ/ml B12 menores de 0, 46/1, se obtiene espectro de vitamina B12 con un máximo a 550 mμ y una meseta entre 520 y 530 mμ. b) Para valores entre 0,48/1 y 0,57/1, se obtienen espectros con un solo máximo a 540 mμ. c) Para valores entre 0,60/1 y 0,57/1, se obtienen espectros con dos máximos a 540 y 580 mμ, pero con la particularidad de que el segundo máximo es menor que el primero (a la inversa de lo que ocurre con el complejo dicianuro). d) Finalmente, para valores de la relación mayores a 1,75/1, se comienza a observar espectro característico de complejo dicianuro (dos máximos a 540 y 580 mμ, siendo el segundo máximo mayor que el primero). Es decir, que variando la relación Ɣ/ml CNK/Ɣ/ml B12 se pasa del espectro característico de B12 a una zona en que se obtiene espectros mezclados y finalmente, se llega al espectro del complejo dicianuro. Además, se demostró que es necesario un valor de la relación molar CNK/B12 del orden de 2.300/1, para transformar cuantitativamente B12 en complejo dicianuro. En el método espectrofotométrico se usa 1% de CNK para la etapa de cianuración, lo que representa para los niveles normales actuales de B12 en caldos un valor de la relación molar CNK/B12 del orden de 22.000/L o sea alrededor de 10 veces mayor que la necesaria para transformar cuantitativamente B12 en complejo dicianuro. En cambio, si se trabajo con 1% de CNNa, el valor de la relación molar CNNa/B12 para los niveles normales de B12 en caldos, es de 29.000/1 o sea, alrededor de 12,5 veces mayor que la necesaria para transformar cuantitativamente B12 en complejo dicianuro. El exceso de cianuro es necesario por ser la concentración de B12 en el caldo un incógnita. 6) Finalmente, se hizo un estudio estadístico comparativo de los métodos biológicos (leichuanii) y químico (espectrofotométro), sobre 18 caldos de fermentación en el momento de ser cosechados, haciendo cada determinación por cuadruplicado. El estudio estadístico da: Para el método microbiológico una línea promedio de 21,4 Ɣ/ml con una S% igual a 13,8 y para el método químico 21,7 Ɣ/ml con una S% de 1,88. Esto acuerda amplia ventaja al método espectrofotométrico pues a su menor coste, se suma la seguridad de poder obtener los resultados en el día con un solo operador. El método microbiológico, requiere por lo menos dos ensayos consecutivos con dos operadores y no brinda la seguridad de tener al tercer día los datos requeridos. 7) Con los datos obtenidos en los 18 caldos ensayados, se representaron gráficos de control (de promedios y de rangos), para métodos (biológicos y químicos). Estos gráficos nos permitieron observar lo siguiente: a) La concordancia de valores ya mencionados para la línea promedio general de ambos métodos: Biológicos: 21,4 Ɣ/ml químico: 21,7 Ɣ/ml b) La diferencia de las desviaciones tipo % de ambos métodos se refleja en el gráfico de rangos, donde se observa que la línea de rango promedio para el método químico es de un valor 4,5 veces menor que para el método biológico. 8)El método propuesto en las siguientes etapas: a) Preparación de la muestra. Centrifugar 1 hora a 2.000 r.p.m 100 ml. de caldo perfectamente homogeneisado, en vaso de centrífuga de 250 ml. Separar cuidadosamente por succión el sobrenadante y desecharlo. Añadir el residuo celular 100 ml. de agua destilada y 1 ml. de solución 5% de CNK. Autolizar durante 30´ en B.M. a 100°C. Enfriar. Llevar a 200 ml. con agua destilada y centrifugar 30´ a 2.000 r.p.m. Separar el sobrenadante por decantación y utilizarlo en la terminación. b) Etapa de cianuración: Transformación de B12 y variantes en complejo dicianuro. 50 ml. de caldo preparado según se indica en a) más 0,5 g. de CNK o CNNa, se lleva a pH 9,7 con solución 50% de HONa y se deja 2 hs. a temperatura ambiente y luz difusa. c) Etapa de extracción de la actividad vitamínica del caldo. Añadir con agitación 10 g. de SO4Na2 y llevar a pH 11,3 con solución 50% de HONa. Extraer 3 veces con 5 ml. de alcohol bencílico cada vez, en tubo de 25 x 200 mm. con tapón de goma. Se puede reemplazar con 3 extracciones de 5 ml. de Butanol previo agregado de 10% P/V de SO3Na2 o 5% V/V de solución 90% de Fenol. Centrifugar luego de cada extracción, 5´ a 2.000 r.p.m. Reunir los extractos en tubo de vidrio de 25 x 120 mm. con tapa esmerilada. d) Pasaje a fase acuosa de la actividad extraída del caldo. Añadir 7,5 ml. de cloroformo y extraer 3 veces con 3 ml de agua destilada cada vez. Centrifugar 5´ a 2.000 r.p.m luego de cada extracción. Reunir los extractos acuosos en matras de 25 ml. y llevar a volumen con agua destilada. e)Lectura en espectrofotómetro y cálculo. Tomar una alícuota de 10 ml. de extracto acuoso y agregar 2 ml. de solución 12,5% de PO4H2K para llevar a pH 6.0. A otra alícuota de 10 ml. añadir 2 ml. de solución 10% de CNNa para llevar a pH 11,0. Leer la absorbancia de las 2 soluciones a 582 mμ en cubetas de 1 cm., en espectrofotómetro Beckman previamente calibrado con soluciones patrón de vitamina B12 y complejo dicianuro, determinar ΔA. Calcular la concentración de B12 en el caldo original aplicando la siguiente fórmula: B12 en Ɣ/ml=ΔA x210 210= factor etc. proveniente de la simplificación de una serie de valores constantes de la fórmula de cálculo. 9) Las variaciones introducidas por nosotros en el método que constituyen novedad ventajosa son las siguientes: a) La etapa íntegra de preparación de la muestra, que permite eliminar posteriormente el problema de emulsiones en las extracciones y obtener extractos acuosos finales de una pureza similar a los de vitamina B12 y patrón y complejo dicianuro. b) La disminución de 5 a 2 hs. de la etapa de cianutación, que acorta en 3 hs. la duración de cada determinación. c)La posibilidad de reemplazar el alcohol bencílico por Butanol en las condiciones ya señaladas. d) El empleo del mismo tubo para extraer y centrifugar los caldos, permite simplificar las operaciones. e) El uso del material de vidrio ya mencionado: permite realizar simultáneamente 10 determinaciones con un solo operador. obteniendo los resultados en el día.

La Cariosistemática permite comparar taxa relacionados, en particular especies. Una variable de análisis con valor diagnóstico es el tipo de sistema de determinación sexual. En este Trabajo de Tesis se analizaron monos aulladores del género Alouatta con sistemas de determinación sexual múltiple resultado de translocaciones Y-autosoma. Se los comparó con otros 3 Ceboidea (Cebus, Saimiri y Aotus) y con dos Hominoidea (Pan troglodytes y Homo sapiens) ante la diversidad de patrones de determinación sexual, en particular en machos. Se realizó la primera caracterización del cariotipo de Alouatta pigra que mostró 2N=58, X_1X_1X_2X_2 / X_1X_2Y_1Y_2. Se estudió conservación genómica por FISH con las sintenias 3/15 y 3/21 evidenciando que estas asociaciones no estarían conservadas en las especies mesoamericanas A. pigra y A. palliata. Este estudio junto al de homeologías cromosómicas, mostró que los autosomas involucrados en las translocaciones que darían origen a los multivalentes sexuales en las especies sudamericanas y mesoamericanas serían distintos. En el marco conceptual de “Evidencia Total”, el análisis combinado de variables moleculares y cromosómicas resolvió las relaciones de parentesco entre las especies de aulladores de ambos orígenes americanos, demostrando su utilidad en el esclarecimiento de controversias que relacionan la Taxonomía y la Evolución de los primates ceboideos.

La determinación sexual es el proceso que guía las gónadas indiferenciadas a desarrollarse en testículos u ovarios. El yacaré overo, Caiman latirostris, posee determinación sexual por temperatura (DST) y es sensible a contaminantes clasificados como perturbadores endocrinos (PEs). Atrazina (ATZ), un herbicida considerado PE, altera los tejidos reproductivos masculinos durante el desarrollo. Los estrógenos son esenciales para el desarrollo ovárico y pueden inducir la diferenciación ovárica incluso a temperaturas de masculinización (Determinación sexual inducida por estrógenos - DSE2). Nuestra hipótesis consistió en que: “La exposición prenatal a estradiol y a un contaminante ambiental como es la ATZ, modifican la expresión de moléculas claves en la determinación sexual y la diferenciación gonadal del yacaré overo”. Comparamos los aspectos sexualmente dimórficos de la DST, analizando machos-DST y hembras-DST. Hallamos diferencias en la histoarquitectura gonadal embrionaria, en la expresión proteica de moléculas implicadas en la vía estrogénica, en la proliferación celular, en el posible daño del ADN en las células germinales y en la expresión de genes claves en la determinación sexual y diferenciación gonadal. Por otro lado, estudiamos comparativamente las hembras, aquellas obtenidas por DST y por DSE2. Demostramos, que si bien en ambas condiciones se producen ovarios, esas gónadas no son iguales. Finalmente, la exposición a una dosis ambientalmente relevante de ATZ, modificó las características histo-morfológicas de las gónadas embrionarias masculinas y produjo cambios en moléculas claves del desarrollo testicular. Esto podría tener efectos perjudiciales en la maduración sexual y/o en el éxito reproductivo del yacaré overo macho.

La determinación sexual es el proceso que guía las gónadas indiferenciadas a desarrollarse en testículos u ovarios. El yacaré overo, Caiman latirostris, posee determinación sexual por temperatura (DST) y es sensible a contaminantes clasificados como perturbadores endocrinos (PEs). Atrazina (ATZ), un herbicida considerado PE, altera los tejidos reproductivos masculinos durante el desarrollo. Los estrógenos son esenciales para el desarrollo ovárico y pueden inducir la diferenciación ovárica incluso a temperaturas de masculinización (Determinación sexual inducida por estrógenos - DSE2). Nuestra hipótesis consistió en que: “La exposición prenatal a estradiol y a un contaminante ambiental como es la ATZ, modifican la expresión de moléculas claves en la determinación sexual y la diferenciación gonadal del yacaré overo”. Comparamos los aspectos sexualmente dimórficos de la DST, analizando machos-DST y hembras-DST. Hallamos diferencias en la histoarquitectura gonadal embrionaria, en la expresión proteica de moléculas implicadas en la vía estrogénica, en la proliferación celular, en el posible daño del ADN en las células germinales y en la expresión de genes claves en la determinación sexual y diferenciación gonadal. Por otro lado, estudiamos comparativamente las hembras, aquellas obtenidas por DST y por DSE2. Demostramos, que si bien en ambas condiciones se producen ovarios, esas gónadas no son iguales. Finalmente, la exposición a una dosis ambientalmente relevante de ATZ, modificó las características histo-morfológicas de las gónadas embrionarias masculinas y produjo cambios en moléculas claves del desarrollo testicular. Esto podría tener efectos perjudiciales en la maduración sexual y/o en el éxito reproductivo del yacaré overo macho.

Las aminas biogénicas se pueden encontrar en una gran variedad de alimentos, especialmente en los que son ricos en proteínas. Son producidas por descarboxilación de los aminoácidos mediada por microorganismos presentes en los alimentos. Su presencia en los alimentos es de gran interés debido a su posible toxicidad en los seres humanos. Así, la determinación de aminas biogénicas y la fracción de aminoácidos libres puede proporcional información interesante relacionada con parámetros de frescura o deterioro de los alimentos. En este estudio, se ha desarrollado una metodología por RP-HPLC para la determinación simultánea de 26 compuestos. El método consiste en una derivatización pre-columna de los analitos con o-ftaldialdehído (OPA) en presencia de 2-meraptoetanol (2-MCE) y la posterior separación de los compuestos en una columna C18 detectados por fluorescencia. Los aminoácidos estudiados fueron: ácido aspártico, ácido glutámico, asparragina, serina, histidina, glicina, treonina, arginina, alanina, ácido y-aminobutírico, tirosina, metionina, valina, fenilalanina, isoleucina, leucina y lisina. Entretanto, las aminas fueron: histamina, etanolamina, metilamina, etilamina, tiramina, triptamina, putrescina y cadaverina. Algunas variables del proceso cromatográfico fueron optimizadas con la finalidad de obtener una buena separación de los compuestos. Las mejores condiciones, para obtener una buena selectividad entre los picos, se obtuvieron a 35º C, con un caudal de 1ml/min y utilizando un gradiente de dos solventes que contenía metanol, tampón fosfato y tetrahidrofurano. Como estándar interno se seleccionó 1,7-Diaminoheptano. La metodología desarrollada se aplicó para el análisis de vinos Monastrell con denominación de origen de Alicante. De los resultados obtenidos se puede concluir que las muestras de vino analizadas presentaron niveles de histamina por debajo de 20 mg/l, por encima del cual pueden ocurrir algunos efectos fisiológicos no deseados. Además, los niveles de triptamina en vinos jóvenes y crianza fueron menores al límite de detección. En ninguna de las muestras se encontraron cantidades cuantificables de cadaverina o metilamina; mostrando que no hay síntomas de deterioro de las propiedades sensoriales de los vinos e indicando que las uvas utilizadas para la elaboración de los vinos se encontraban en buen estado de conservación.

La determinación de bromo en material biológico fué un problema bastante estudiado, cuando Pincussen y Roman, con Zondek y Bier propusieron la teoría de que el bromo sanguíneo está combinado con un compuesto orgánico que actúa de manera análoga a la tiroxina. Si bien como se comprobó después, esto no es cierto, no disminuye el interés por la determinación de bromo en material biológico, pues aún quedan por aclarar muchos problemas acerca de la función de este halógeno en los seres vivientes. Es bastante importante por eso mejorar los métodos de determinación existentes, o buscar otros que permitan determinar mínimas cantidades de bromo y que sean de una precisión adecuada a las investigaciones biológicas que se quieran emprender. Una revisión de la bibliografía en ese tema conduce a la conclusión de que ninguno de los métodos existentes, salvo el colorimétrico, es adecuado para la determinación ultramicroquimica de bromo y que en la mayoría de los casos la destrucción de materia orgánica resulta engorrosa por el volumen de muestra que es necesario tomar. Teniendo en cuenta que en el hombre la cantidad de bromo en sangre es aproximadamente de 1 mg por cien milimetros, y si para acelerar la destrucción de materia orgánica se fija una cantidad de 0,1 a 0,2 ml de suero, será necesario un método que pueda augurar la determinación de uno a dos microgramos de bromo con un error no mayor de un 5%. El autor tenía experiencia en la determinación potenciométrica de cloruros en escala ultramicro, y los óptimos resultados obtenidos hicieron pensar en la posibilidad de usar esas técnicas para los otros halógenos (bromo y aún iodo). Pero aún destruída la materia orgánica, no se puede titular potenciométricamente el bromuro en presencia de los cloruros; fué necesario recurrir a una separación. Se eligió el método de separación de Kahane y Kahane, y se lo adaptó a la escala ultramicro. Los resultados obtenidos son satisfactorios. La técnica de trabajo es la siguiente: Se destruye la materia orgánica por calcinación en medio alcalino. Se mide 0,1 a 0,3 ml de suero y con solución saturada de carbonato de sodio y se lo lleva a sequedad. Se calcina entonces a 550°C durante treinta minutos y se repite la operación agregando nitrato de potasio para ayudar a la oxidación del carbón que no se quema totalmente en la primera operación. Se tratan estas cenizas con agua y se pasan a un aparato de separación diseñado por el autor, pero semejante en principio al de Kahane y Kahane. Con ácido nítrico concentrado en presencia de ácido nitroso como catalizador, se oxidan los halogenuros a halógeno en frío en un burbujeador, y una corriente de aire los arrastra a través de otros burbujeadores donde sucesivamente quedan fijados, el cloro en ácido nítrico diluído y el bromo en sulfito de sodio 10%. Con una técnica original se trasvasa a una capsulita el bromo así separado y después de eliminar el sulfito de sodio remanente se titula potenciométricamente con nitrato de plata 0,01 N según la técnica de P.L.Kirk. Los resultados son satisfactorios; para cantidades de bromo comprendidas entre uno y tres microgramos la desviación de la determinación aislada respecto de la media aritmética oscila entre 0,5 y 3%. Ventajas del método respecto de los descriptos en la bibliografía consultada: 1) Se puede hacer cada determinación con 0,1 a 0,3 ml de suero y resulta mucho más fácil la destrucción de materia orgánica. 2) Se hace la determinación directa del bromo sanguíneo sin recurrir a reacciones que, pueden sensibilizarla pero también aumentar los errores y complicar mucho las operaciones (caso de oxidación de bromuro a bromato con hipoclorito). 3) Los otros halógenos no interfieren. 4) Se pueden hacer de ocho a diez determinaciones en ocho horas de trabajo, o más si se dispone de dos aparatos de separación. (Sin contar el tiempo de desecación). Se puede ganar mucho tiempo coordinando las operaciones de separación, estufa y titulación que demoran 30-40 minutos cada una, para que mientras se titula, haya una muestra en el aparato de separación y una cápsula en la estufa. 5) Reactivos de uso corriente. 6) El material microquímico y eléctrico es de fácil construcción y de precio relativamente bajo. Conclusiones: Se propone un método potenciométrico en ultramicroescala para separación y determinación de bromo en material biológico; iodo no molesta. Se puede separar el bromo del cloro en una relación en peso de 1/3300 para cantidades de bromo de uno a cinco microgramos. Para suero sanguíneo humano se requiere 0,1 a 0,3 ml para cada determinación. Para una cantidad de bromo de aproximadamente 1 mg por cien mililitros de suero la desviación tipo para cinco determinaciones es de más o menos 0,004 mg %.

Tesis (Magister en Ciencia y Tecnología de los alimentos) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2017

Se comenzó con la PARTE TEORICA en la cual se detallaron los métodos en uso para la determinación del Al, indicando los mayores inconvenientes, especialmente de las tediosas filtraciones como hidróxidos y de los métodos modernos que emplean el cátodo de Hg. Se vió entonces la necesidad de utilizar otro móétodo que fuera a la vez que exacto, más rápido y cómodo que los usuales, encontrándose que el Benzoato de Amonio daba en ciertas condiciones un precipitado de Benzoato de Aluminio cuantitativo y fácil de filtrar. Se enumeran los primeros trabajos de Kolthoff que aplicaban dicha precipitación para la separación de Fe, Al y Cr de otros iones del 3er. grupo y de iones alcalino-terreos, precipitando completamente a bajo pH y fácilmente filtrables. Posteriormente se detallaron los métodos de Wilson; de Milner y Woodhead; y de Osborn y Jewsbury que aplicaron también el Benzoato de Amonio para separar el Al. Posteriormente, se siguió con la PARTE PRACTICA CUALITATIVA detallándose primero la preparación de las soluciones standards de los iones como también el método y los resultados obtenidos en la determinación del título del standard de Al, haciendo notar que se eligió como método de control la determinación como oxinato que viene a ser la segunda parte del trabajo en estudio, colocándonos de esa forma en idénticas condiciones, por lo que posibles errores que se sucedieron, iban a tener como único factor la mayor o menor exactitud de la precipitación del Al como benzoato. A continuación se analizó la especificidad del Benzoato de Amonio como agente precipitante y su comportamiento frente a determinados iones (especialmente los presentes en bronces y latones), dividiéndolos en tres grupos de acuerdo a si la precipitación era nula, parcial o total. Se sacó como conclusión que son contados los metales que junto al Al dan precipitados como Benzoatos y únicamente interfieren (en bronces y latones) el Sn, que se elimina previamente; el Fe férrico y Cu cúprico que se anulan reduciéndolos. Inmediatamente, vino la PARTE PRACTICA CUANTITATIVA comenzando primero a considerar la precipitación del Benzoato de Aluminio sin la presencia de ningún otro ion y ensayando las condiciones óptimas sugeridas por Smales en sus trabajos, especialmente en lo referente al pH, realizando la precipitación en presencia de azul de bromo fenol como indicador. A continuación se precipitó el Benzoato de Aluminio, pero esta vez en presencia de algunos iones para estudiar sus efectos, viéndose que el Zn, Mn y Ni no molestaban, no ocurriendo lo mismo con el Fe férrico que daba malos resultados. El Cu por ser el catión que se encuentra en mayor cantidad en Bronces y Latones requirió un estudio más detallado, viéndose que reducido al estado cuproso, con Clorhidrato de Hidroxilamina, no ofrecía dificultades, ajustando las condiciones. Finalmente, se realizó la APLICACION EN BRONCES Y LATONES, enunciando los trabajos anteriores realizados por Bayley, quien obtenía buenos resultados pero para cantidades de Al que no superaran el 1%. El defecto era que necesitaba una mayor acción buffer y una mayor cantidad de agente precipitante. En síntesis, el METODO VOLUMETRICO FINAL, subsana esos inconvenientes y puede decirse que Milner y Townend fusionaron las ideas de Bayley (uso del Clorhidrato de Hidroxilamina como agente reductor) con las de Smales (ajuste del pH usando un buffer adecuado para la precipitación del Al como benzoato redisolviendo éste con Tartrato de Amonio para luego precipitar nuevamente el Aluminio con la 8-Hidroxiquinolina terminando con la titulación volumétrica del oxinato por medio de la solución del bromato-bromuro. Se detalló la forma de preparar los reactivos y el método seguido finalmente paso a paso, comenzando por la cantidad de muestra a tomar (que depende del contenido de aluminio); luego la eliminación del Sn si está presente por medio de NO3H; la posterior alcanilización de la solución con HONH4 (1+ 1) y luego a débil acidez con ClH (1+4); el agregado posterior de la solución buffer, del Clorhidrato de Hidroxilamina y del agente precipitante, solución al 10% de Benzoato de Amonio; sigue la digestión, lavado y redisolución del precipitado (esto último con ClH caliente) y la precipitación del Aluminio como oxinato por medio de la 8-hidroxiquinolina para redisolverlo, luego de filtrar, con CIH; agregado posterior de solución BrO3K-BrK, hasta que haya Br2 en exceso, y determinar éste por titulación del I2 liberado, al agregar IK con solución de S2O3Na2 previamente standarizada. La cantidad de solución de Bromato-Bromuro gastada está en relación con la de Aluminio presente. Finalmente se dieron los resultados obtenidos aplicando dicho método en las diversas aleaciones sintéticas preparadas, observándose que los errores entran dentro del orden corriente para esta clase de análisis, máximo si se tiene en cuenta la comodidad y rapidez (dura unas dos hores) con que se efectúa. Posteriormente, se expresan las CONCLUSIONES generales obtenidas de la aplicación del Benzoato de Amonio como agente precipitante del Aluminio y las apreciables ventajas de su aplicación en análisis de Bronces y Latones. Por último, termina el trabajo con la PARTE BIBLIOGRAFICA donde se mencionan y enumeran los diversos libros y revistas consultadas.

Los trabajos realizados sobre la determinación de dureza en aguas, utilizando como reactivos la sal disódica del ácido etilendiaminotetracético, y el empleo de Eriochrome Black T como indicador del punto final de la valoración conjunta de Ca y Mg, y murexide para la valoración separada del Ca , han servido como punto de partida para la aplicación de este mismo método en la determinación de Ca y Mg en materiales refractarios. El empleo de microbureta y ligeras modificaciones en la técnica permitieron obtener errores más pequeños que los habituales para estas concentraciones de Ca y Mg, que son muy inferiores a las que se encuentran en aguas. La exactitud obtenida en soluciones puras es de un mg/l (expresado como carbonato de calcio) para el valor del Ca y de 2 mg/l para el valor calculado del Mg. Para obtener el valor del Ca y del Mg separadamente se ensayó eliminar el Ca como oxalato y titular Mg remanente en el filtrado en presencia de Eriochrome Black T. Los errores obtenidos son mucho mayores debido a la incompleta separación del Ca. Esto unido a la mayor complejitud de la técnica, hace que sea preferido el método que valora Ca utilizando murexide como indicador. El límite de aplicabilidad para la determinación conjunta de Ca y Mg y la de Ca separadamente es de 0,06 mg en 50 ml de muestra (1,2 mg/l expresado como carbonato de Ca.). Hemos estudiado y ensayado el efecto de distintas concentraciones de diversos iones de existencia común y posible en materiales refractarios, estableciendo para cada casos el valor máximo que puede alcanzarse. Se ha llegado a establecer que para poder aplicar el método sin inconvenientes, la solución en que se realizan las titulaciones, no debe contener más de: 2 mg/l de Cu, 10 mg/l de Fe+++, 15 mg/l de Al, 6 mg/l de Mn++, y 100 mg/l de Si03(2-). Al aplicar el método a muestras de refractarios, se debieron solucionar algunos inconvenientes provocados por la presencia de cloruro de amonio existente en la solución por provenir de procesos anteriores y que da al pH valor inadecuado, que no permite la correcta actuación de los indicadores. El método propuesto tiene una precisión de 0,1 g de OCa/100 g de material y 0,14 g de OMg/lOO g de material refractario. Aplicado el método a una serie de muestras, los resultados obtenidos se compararon con los proporcionados por métodos comunmente utilizados . Las recuperaciones realizadas sobre muestras de refractarios permiten asegurar que es posible obtener valores de una gran precisión. Esto unido a su rapidez y simplicidad hace que el método propuesto pueda ser considerado superior a todos los utilizados para la determinación de Ca y Mg en materiales refractarios en análisis de rutina.