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Título de Acceso Abierto
Obtención y caracterización de antígenos protectores de Trypanosoma Cruzi contra la enfermedad de Chagas
Jacqueline Elena Búa Elsa Leonor Segura
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
La fracción flagelar de epimastigotes de la cepa Tulahuén de Trypanosoma cruzi es una subfracción celular heterogénea, conteniendo flagelos y membranas del parásito. En modelos experimentales murinos, la inmunización con fracción flagelar liofilizada y Bordetella pertussis como adyuvante, protege de la infección por T. cruzi en términos de mortalidad y de esterilidad parasitémica ya que un 60% de los ratones desafiados no presentan parasitemia detectable. En este trabajo se presenta la caracterización de componentes antigénicos del estadio epimastigote obtenidos por purificación a partir de un anticuerpo monoclonal anti-fracción flagelar. Dicho anticuerpo monoclonal, FCH-F8-4 (AcMo 4), mostró una interesante actividad biológica contra el Trypanosoma cruzi, ya que evidenció la capacidad de lisar tripomastigotes sanguíneos por medio del complemento y de neutralización in vitro de la infectividad de tripomastigotes. El AcMo 4 reconoce seis proteínas por "inmunoblotting" en epimastigotes y dos proteínas en tripomastigotes. A partir del homogenato total de epimastigotes se purificaron los componentes antigónicos reconocidos por el AcMo 4. Las proteínas aisladas correspondieron al patrón previamente observado para el extracto de epimastigotes original. Cuando se ensayó la capacidad inmunoprotectiva in vivo de estos antígenos purificados, con Bordetella pertussis como adyuvante, se observó que estas proteínas del T. cruzi mantienen las propiedades inmunoprotectoras de la fracción flagelar en cuanto a sobrevida de los animales desafiados y el bajo porcentaje de ratones que presentan parasitemia. Utilizando el AcMo 4 se seleccionaron clones en una biblioteca de ADN copia de epimastigotes de T. cruzi, construída en el vector de expresión λgt 11. Con uno de los clones de ADN recombinante obtenidos λ(FCH-FB-4)1, con un inserto de 150 pares de bases, se ensayó su hibridización al ARNm de epimastigotes. Los estudios realizados mediante la hibridización del clon λ(FCH-F8-4)1 con el ADN del parásito sugirió que esta información genética estaría repetida en el genoma haploide de T. cruzi en un número bajo de copias. El análisis de este clon respecto de su hibridización con diferentes clones y cepas del parásito reveló que este gen se halla ampliamente presente en T. cruzi, siendo el patrón de esta hibridización conservado para los aislados y clones estudiados. A partir de la secuencia de bases del ADN del clon λ(FCH-F8-4)1 y deducida la secuencia de aminoácidos, se sintetizó en fase sólida un péptido de 19 aa:SP4(PAFLGCSSRFSGSFSGVEP). Este péptido inhibió la reactividad de sueros de ratones inmunizados con fracción flagelar, en ensagos de ELISA, utilizando epimastigotes como antígeno. Los ratones inmunizados con el péptido SP4 libre o acoplado a KLH como proteína transportadora, adyuvado siempre con Bordetella pertussis, mostraron una respuesta inmune humoral y celular contra el T. cruzi, demostrada por anticuerpos y reacciones cutáneas de hipersensibilidad retardada específicos. Estos resultados indicaron que la conformación del epitope presente en el péptido sintético representa aquella que se encuentra en el parásito y que a pesar de su pequeño tamaño, el péptido fue capaz de evocar una respuesta inmune, aún inoculado en su forma libre. Un estudio por computacion a partir de la secuencia primaria de aminoácidos, siguiendo un algoritmo previamente descripto, arrojó que el péptido SP4 tiene una estructura anfipática de alfa-hélice que podría representar sitios de reconocimiento para los linfocitos T colaboradores. Otros clones de ADN recombinante, obtenidos de la misma genoteca de ADN copia de la cepa Tulahuén, fueron obtenidos con el AcMo 4 g con sueros de conejo anti-péptido sintético SP4. Dichos clones fueron analizados en cuanto a la secuencia de bases de su ADN, observándose diferencias en algunas bases y aminoácidos que codifican. Se describen aquí dos secuencias de ADN con homología parcial reconocidas por el AcNo 4 y un suero policlonal anti-péptido sintético; pudiendo estas secuencias representar dos copias diferentes dentro del gen que codifica para este antígeno. Los analisis efectuados por hibridización de los diferentes clones de ADN recombinante con el ADN genómico del parásito, sugiere que habría un único gen que codifica para la síntesis de los péptidos que reconoce el AcMo 4 en el genoma del Trypanosoma cruzi.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
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Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 1991 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
1991
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