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Obtención y caracterización de plantas de papa transgénicas para genes de interés agropecuario
Mariana Del Vas Horacio Esteban Hopp
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
La papa es el cuarto cultivo en orden de importancia mundial luego del trigo, el maíz y el arroz. El cultivo resulta seriamente afectado por virus, insectos y malezas que aumentan los costos de producción, reducen el rendimiento y la calidad y obligan al uso de agroquímicos. La técnica de transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens permite la transferencia de genes de interés agronómico al fondo genético de los cultivares apreciados por el productor sin modificación del mismo. Se utilizó esta técnica para la obtención de plantas resistentes al virus del enrollamiento de la hoja (PLRV), al ataque por larvas de la polilla del tomate y al herbicida total fosfmotricina. l) Resistencia a PLRV por expresión del gen de la cápside. Para realizar el clonado del gen de cápside viral, asi como también parte de los extremos 5' y 3' no codificantes aledaños a este gen, se amplificó el fragmento de interés por la técnica de PCR usando RNA total de planta infectada como templado. Esto evita la purificación viral, que es particularmente dificil en el caso de PLRV que replica solamente en células de floema y acompañantes. Se secuenció el fragmento en estudio, encontrándose entre 89 y 53 % de homologías (a nivel de nucleótidos) con las secuencias de cápsides de aislamientos recientemente publicados. Se construyó un vector binario recombinante, de manera que el gen de cápside de PLRV quedara bajo la regulación de un promotor y un terminador adecuados para la expresión de este gen en plantas. Utilizando la técnica de transformación de hoja mediada por Agrobacterium previamente puesta a punto para un cultivar de uso local (Huinkul-MAG), se obtuvieron 84 plantas transgénicas. Se confirmó que algunas expresaban el mRNA de el gen de cápside por Northern blot. Asimismo, se hizo un ensayo de multiplicación viral (cuantificada por ELISA) en plantas transgénicas y control (sin transformar) infectadas mediante áfidos que previamente se habían alimentado en plantas de papa con infección secundaria de PLRV. 2) Resistencia a insectos por expresión de la toxina de Bacillus thuringiensis (BT). La plantas transgénicas Alfa l y Alfa 2 fueron el resultado de la transformación del cultivar Alfa de papa con un vector que lleva el gen que codifica para la toxina de BT bajo el control de un promotor inducible por daño. Se confirmó que el gen de interés estaba integrado en el genoma por Southern blot, y que se expresaba por Northern blot. Para determinar si las plantas Alfa l y Alfa 2 presentaban actividad insecticida frente a un lepidóptero minador, se hicieron ensayos de actividad biológica estudiando la sensibilidad de larvas de polillas de tomate (Scrobipalpuloides absoluta Meyrik) frente a la toxina que estas plantas, teóricamente expresan. A las dos semanas de la eclosión de las larvas, se observaron galerías y larvas vivas tanto en las hojas de las plantas transgénicas como en los controles sin transformar. Si embargo el daño observado (tamaño y número de galerías) en las plantas transgénicas fue considerablemente menor que el registrado en las plantas control. Asimismo el desarrollo de las larvas criadas sobre plantas transgénicas fue menor que el observado en las plantas control ya que no alcanzaron el estadío de pupa, y por lo tanto tampoco el de adulto, lo que sí ocurrió normalente en las plantas control. 3) Resistenicia a fosfinotricina (PPT, principio activo del herbicida total Basta® ) por expresión de una enzima detoxificante. Se obtuvo una planta transgénica (llamada AE2) que expresa el gen bar que codifica para una enzima capaz de inactivar a la fosfinotricina por acetilación. AE2 presentó resistencia a fosfinotricina tanto in vitro como in vivo.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
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Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 1993 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
1993
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