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Título de Acceso Abierto
Estudios sobre el proceso de regulación reductiva de la Fructosa-1,6-Bisfostasa cloroplastídica de colza (Brassica napus)
Roberto J. Rodriguez Suarez Ricardo Alejandro Wolosiuk
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
En las plantas, la Fructosa-1,6-Bisfosfatasa de cloroplastos (CFBPase) cataliza la defosforilación irreversible de la fructosa-1,6-fosfato en el ciclo de Benson-Calvin. La CFBPase es una enzima clave en la regulación de la asimilación del C02 y su actividad específica es fuertemente regulada por luz, a traves de una cascada reductiva via Tiorredoxina. Los principales objetivos fueron: i) obtener una CFBPase recombinante útil como modelo de la contraparte cloroplastídica, ii) empleando mutagénesis sitio-dirigida, caracterizar el rol de las cist(e)inas en su estabilidad estructural, modulación y actividad catalítica, iii) analizar la multiplicidad de loci para la CFBPase en el alotetraploide B.napus y en sus parentales diploides B.campestris y B.oleracea. Construímos una cDNA library de expresión de hojas de colza y obtuvimos varios clones codificando la CFBPase. Luego expresamos y purificamos de E.coli la proteína recombinante, que mostró alta actividad enzimática. Su caracterización estructural y funcional estableció que es virtualmente idéntica a la contraparte cloroplastídica. Preparamos varias mutantes sitio-dirigidas por reemplazo de cisteínas diferencialmente afectadas en sus propiedades regulatorias, algunas de las cuales resultaron parcial o constitutivamente activadas. Determinamos que la Cys157 es crítica y que las Cysl74 y 179 también son participantes de la modulación reductiva. Proponemos un mecanismo que involucra tres residuos Cys, y donde se requiere la formación de diferentes disulfuros en las distintas subunidades del homotetrámero. La actividad catalítica no disminuyó por el reemplazo de ninguna de las siete Cys de la enzima. También encontramos que existen al menos dos loci por complemento haploide para la CFBPase en B.napus y en sus parentales B.oleracea y B.campestris. Ambos loci se expresan en hojas verdes y las enzimas recombinantes poseen actividades muy similares. En conjunto, estos análisis podrían tener un elevado impacto en los estudios orientados a manipular la velocidad de asimilación de C02 y la partición "fuente/sumidero” del fotosintato en una especie económicamente importante como la colza.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
BISFOSFATASA; CLOROPLASTO; REGULACION REDUCTIVA; CICLO DE CALVIN; BRASSICA; BISPHOSPHATASE; CHLOROPLAST; REDUCTIVE REGULATION; CALVIN CYCLE
Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 1998 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
1998
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