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La brucelosis canina es una enfermedad infecciosa zoonótica causada por Brucella canis, la cual se trata con una combinación de antibióticos tales como tetraciclina, doxiciclina, minociclina y estreptomicina. A pesar de ello las recidivas son comunes. Se planteó investigar la presencia de efecto inhibitorio sobre Brucella canis en extractos vegetales obtenidos de plantas nativas y naturalizadas de la Provincia de La Pampa. Se evaluó el efecto antimicrobiano de extractos metanólicos de 164 especies vegetales mediante el método de dilución en agar, obteniéndose seis que produjeron resultados positivos. A estas especies se las sometió a un proceso de extracción con solventes de polaridad creciente y se obtuvieron diferentes fracciones de las mismas. Estas fracciones se evaluaron para conocer su actividad antimicrobiana y posteriormente se realizó la CIM. La fracción metanólica de Prosopis flexuosa var. depressa mantuvo la inhibición del crecimiento de Brucella canis hasta una dilución de 1/40. Estudios fitoquímicos determinaron la presencia entre otros, flavonoides, taninos, sesquiterpenos y alcaloides. Estos compuestos fueron reportados por exhibir propiedades antimicrobianas. Estos resultados permiten pensar que la fracción metanólica de partes aéreas de Prosopis flexuosa var. depressa podría contener compuestos promisorios para emplear en el futuro en el tratamiento de la brucelosis canina.

El presente trabajo tuvo por objeto el estudio fitoquímico de los extractos de éter etílico y de éter de petróleo de la planta Acnistus breviflorus y la transformación funcional de los withanólidos (esteroides altamente oxigenados con anillo lactónico en cadena lateral) de ella aislados. En el mismo se describen: a) La funcionalidad química de diferentes tipos de withanólidos hallados en plantas, sus propiedades fisiológicas, su utilidad potencial en la quimiotaxonomía y sus probables relaciones biogenéticas. b) Los antecedentes sobre la síntesis de los anillos A y B y de la lactona en la cadena lateral de los withanólidos. c) El aislamiento e identificación de los withanólidos del Acnistus breviflorus. Se lograron identificar a los siguientes withanólidos: 1) jaborosalactona A (l-oxo-27-hidroxi-5β,6β-epoxiwitha-2,24-dienólido); 2) jaborosalactona E (l-oxo-6β,27-dihidroxi-5α-clorowitha-2,24-dienólido); 3) withaferina A (l-oxo-4β,27-dihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-2,24-dienólido); 4) 2,3-dihidro-3-metoxiwithaferina A (l-oxo-3β-metoxi-4β,27-dihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-24-enólido) (producto artificial formado por adición de Michael del solvente de extracción, metanol, a la withaferina A); 5) jaborosalactona D (acnistoferina) (l-oxo-5α,6β,27-trihidroxiwitha-2,24-dienólido). d) El estudio de los componentes principales del extracto de éter de petróleo del Acnistus breviflorus; fueron aislados e identificados: 1) los hidrocarburos; la planta posee hidrocarburos lineales de 25, 27, 29, 31 y 33 átomos de carbono, siendo el de 31 el componente mayoritario; 2) las grasas; están constituídas por ácidos grasos saturados de 12, 14, 16, 18, 24 y 26 átomos de carbono e insaturados de 18 con 1, 2 y 3 insaturaciones y de 16, 21, 22 y 25 con una insaturación. 3) el insaponificable, del que fueron identificados: campesterol, sitosterol, fucosterol (o su isómero isofucosterol), metilénlofenol y etilénlofenol; 4) los terpenos: licoperseno (dihidrofitoeno) y escualeno. 5) los esteroles libres: campesterol, sitosterol y estigmasterol. e) Las transformaciones funcionales efectuadas sobre algunos de los withanólidos aislados; se efectuaron las siguientes reacciones: 1) hidrogenación de withaferina A; 2) oxidación de 2,3,24,25-tetrahidro-27-desoxiwithaferina A; 3) metoxilación de withaferina A; 4) acetoxilación de 3-metoxi-2,3-dihidrowithaferina A; 5) oxidación de withaferina A; 6) formación del bisditiocetal de la 4-dehidrowithaferina A; 7) reducción del anterior con níquel Raney y ulterior hidrogenación; 8) esterificación de la 4-dehidrowithaferina A; 9) deshidratación del diacetato de la jaborosalactona D; 10) hidrólisis del producto de la reacción anterior; ll) oxidación de jaborosalactona D; 12) apertura del epóxido de la jaborosalactona A, a) con ácido sulfúrico diluído; b) con ácido acético y posterior acetilación; 13) apertura del epóxido de la 4-dehidrowithaferina A; 14) reducción de la withaferina A con borohidruro de sodio en ausencia y en presencia de la sal de un lantánido; 15) hidroxilación del diacetato de jaborosalaotona D. Los productos obtenidos fueron, respectivamente: 1) 2,3,24,25-tetrahidro-27-desoxiwithaferina A y 2,3,24,25-tetrahidrowithaferina A; 2) 1,4-dioxo-5β ,Gβ -epoxiwithanólido; 3) 2,3-dihidro-3-metoxiwithaferina A; 4) 2α-acetoxi-3β-metoxi-1-oxo-4β,27-dihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-24-enólido; 5) 4-dehidrowithaferina A; 6) 1,4-bis-etilenditiocetal-5β,6β-epoxi-27-etanotioltioéter-witha-2,24-dienólido; 7) 5α-witha-24-enólido; 8) 27-trifluoroacetoxi-4-dehidrowithaferina A; 9) 1-oxo-6,27-diacetoxiwitha-2,5,24-trienólido y 1-oxo-6,27-diacetoxiwitha-2,6,24-trienólido; 10) 1-oxo-6α y 6β,27-dihidroxiwitha-2,4,24-trienólido; 11) 1,6-dioxo-5α,27-dihidroxiwitha-2,24-dienólido; 12) a): jaborosalactona D (acnistoferina); b): producto 9; 13) 1,4-dioxo-5β,27-dihidroxi-6α-fluorwitha-2,24-dienólido; 14) 1β,4β,27-trihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-24-enólido; 1α,4β,27-trihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-2,24-dienólido y 1β,4β,27-trihidroxi-5β,6β-epoxiwitha-2,24-dienólido; 15) 1-oxo-2α,3α,5α-trihidroxi-6β,27-diacetoxiwitha-24-enólido. f) Las propiedades espectroscópicas (espectros de resonancia magnética protónica y masa) de los compuestos aislados de la planta y de los transformados funcionalmente.

Aproximadamente 40 especies del género Werneria se encuentran distribuidas en América del Sur, a lo largo de la cordillera de los Andes. Las Wernerias argentinas son 12 a saber: W. heteroloba, W. rosenii, W pseudodigitata, W. incisa, W. poposa, W. villosa, W. pigmaea, W. denticulata, W. aretioides, W. cochlearís, W. apiculata y W. spathulata. De las especies de este género presentes en la Argentina, la única estudiada fitoquímicamente, la Werneria poposa Philippi, es la que se informa en este trabajo. Werneria Poposa Philippi. Clasificación: CLASE: DICOTILEDONEAE SUBCLASE: SYRUPETALAE ORDEN: CAMPANULALES FAMILIA: COMPOSITAE SUBFAMILIA: ASTEROIDEAE TRIBU: SENECIONEAE SUBTRIBU: OTHONNINAE GENERO: WERNERIA ESPECIE: POPOSA La planta presenta caracteres generales y específicos que están relacionados con el ambiente en el que vive. El altiplano jujeño, con los cordones montañosos y los macizos aislados que se levantan por sobre su nivel, es un paisaje abierto que rara vez cubre totalmente el suelo. El género estudiado posee especies que se presentan como cojines. Se denomina cojín a una planta muy achaparrada con entrenudos muy cortos donde la porción epigia sobresale poco sobre el nivel del suelo, con profusa cantidad de raíces. En el caso particular de Werneria poposa Philippi se trata de una masa de raíces adventicias cuyo origen son las ramas del cojín. Los cojines forman generalmente comunidades definidas y en superficies limitadas, representan hasta un 70-80% de la vegetación del área y se presentan como manchas verde vivo, gris verdoso o casi blanco. Se destacan nítidamente sobre el fondo de las piedras o se confunden entre la sal y la tierra húmeda de los bordes de las salinas. Se vinculó siempre a las plantas en cojín con las floras de las regiones áridas y se consideró a dicha forma biológica como un ejemplo típico de las mismas. En la Puna jujeña las cojines se hallan distribuidos entre las regiones fitogeográficas puneña y altoandina. Su presencia depende de la altitud ya que no se encuentra ninguna de estas especies por debajo de 3400 m s.n.m. y el límite superior coincide con la línea de las nieves, lo que equivale en la zona a 5000-5100 m s.n.m. Todas las especies se hallan sometidas a una serie de condiciones extremas que comprenden heladas nocturnas, vientos fuertes, intensa radiación durante gran parte del año y escasas precipitaciones limitadas al verano. El medio donde crecen es muy árido y el suelo excesivamente pobre en materia orgánica. Desde hace muchos años , los géneros Senecio, Wernería y Chersodoma, han sido empleados en la farmacopea herbolaria de la medicina folklórica del noroeste argentino como "drogas antirreumáticas", y como remedios para Ia hipertensión, el mal de altura y desórdenes de tipo digestivo (contra los cólicos). Para su presentación, el trabajo fue divididoen los siguientes capítulos: 1) - Introducción. 2) - Descripción general de la labor realizada. 3) - Diterpenoides. 4) - Sesquiterpenoides. 5) - Hidroxiacetofenonas preniladas. 6) - Flavonoides. 7) - Cumarinas. 8) - Parte Experimental. En cada uno de los capítulos mencionados, exceptuando el 2 y el 8, se presentan: la parte descriptiva de la tarea realizada, los resultados obtenidos y la correspondiente bibliografía. Se utilizó material vegetal proveniente de las provincias de Salta y Jujuy, recolectados durante el período de floración. Experimentalmente se aplicó el siguiente procedimiento general: Las partes aéreas de planta seca (secada a temperatura ambiente, en estufa de aire) se molieron y extrajeron en Soxhlet utilizando tres solventes para la planta salteña, éter de petróleo, cloruro de metileno y metanol respectivamente y dos solventes, cloruro de metileno y metanol para la planta jujeña. Para Ia realización del rastreo fitoquímico de la misma se utilizaron métodos cromatográficos, combinando diferentes técnicas (cromatografía en columna seca, cromatografía en columna, cromatografía en capa preparativa , cromatografía gaseosa y cromatografía líquida de alta resolución). Fueron estudiados, el extracto de éter de petróleo de la planta salteña y ambos de la planta salteña. También se realizó un extracto por arrastre con vapor de material vegetal tal cual, que se fraccionó y estudió análogamente. Los compuestos aislados fueron: hidrocarburos, ceras, aldehido kaurénico, (-)-α-cadinol y las acetofenonas preniladas 4-hidroxi-3-(isopenten-2-il) acetofenona y 4-hidroxi-3-(3'-hidroxi-isopentil) acetofenona, el flavonoide isorhamnetina y las cumarinas esculetina, isoescopoletina y dihidroisoescopoletina. Ninguno de estos compuestos había sido informado previamente para este género. Para su identificación se utilizaron técnicas de espectroscopía IR, UV, 1HRMN, 13C-RMN y EM. Por su parte, las mezclas de compuestos, como así también los productos volátiles que acompañaban a los compuestos aislados de las fracciones del extracto no polar de planta jujeña, fueron analizados por CG-EM. La búsqueda de identidad para cada una de las señales en los cromatogramas fue efectuada comparando los respectivos espectros de masa contra datos de espectros almacenados en memoria (NBS Library, LAB BASE, VG Analytical) utilizando las técnicas de búsquedas provistas por el software del instrumento. De esta manera se detectó la presencia de 35 componentes que sólo fueron caracterizados tentativamente por sus espectros de masa.

Fil:Lopez, Silvia Edith. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Romero, Andrea Irene. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Este trabajo presenta un estudio sobre algunos aspectos de la fluidodinámica de sistemas multifásicos utilizando técnicas que no perturban el movimiento de los fluidos y/o el sólido presentes. El objetivo es caracterizar y/o monitorear la fluidodinámica en sistemas de interés industrial, particularmente, columnas de burbujeo bifásicas y lechos fluidizados trifásicos. Para el estudio de los sistemas multifásicos involucrados en este trabajo se midieron y analizaron series temporales provenientes de experimentos de densitometría, de tomografía de emisión de partículas únicas, generalmente llamada ”Radioactive Particle Tracking” (RPT), y de fluctuaciones de presión. Se utilizaron técnicas estadísticas básicas y un test estadístico que permite tener en cuenta las características caóticas de los sistemas para determinar transiciones de régimen de flujo y/o monitorear un cambio brusco en la fluidodinámica del sistema. El análisis de las diversas series temporales registradas permitió proponer procedimientos de identificación de transiciones del régimen de flujo subyacente, habiéndose obtenido concordancia entre las predicciones que surgen del análisis de series temporales de distintas variables características. Asimismo, el análisis de series temporales durante una perturbación indica que es posible diagnosticar el inicio de la misma con un procedimiento similar al empleado para identificar transiciones de flujo. Por otra parte, además de haber implementado por primera vez la técnica de RPT en Argentina, se estudiaron exhaustivamente distintos aspectos de la misma y se exploró la posibilidad de utilizarla para obtener información en sistemas donde estén ocurriendo cambios en la fluidodinámica debido a una perturbación. Se cuantificaron por primera vez los errores en las determinaciones de posiciones y velocidades ”instantáneas” y se encontró que, para una columna de burbujeo con el sistema agua – aire, es posible utilizar una calibración realizada con la columna llena de líquido y sin circulación de gas para reconstruir las posiciones del trazador cuando la columna opera tanto en régimen homogéneo como heterogéneo.

A nivel del genoma, la transición de las plantas a la tierra fue acompañada por un incremento del número de genes que codifican para factores de transcripción (FTs), los cuales son necesarios para regular la expresión génica durante el desarrollo y las respuestas a los estímulos ambientales. Aquí, estudiamos la familia de FTs de HOMEODOMAIN LEUCINE ZIPPER (HDZ). Esta familia desempeña varias funciones que podrían haber sido fundamentales para la evolución de las plantas.En primer lugar, realizamos un análisis filogenético y bioinformático de los genes HDZ utilizando conjuntos de datos transcriptómicos y genómicos en especies de algas y plantas terrestres. Encontramos evidencia de genes HDZ en algas clorofitas y charofitas. Pudimos establecer el origen de cada una de las clases de HDZ y la incorporación progresiva de dominios y motivos auxiliares. Una vez en tierra, la familia HDZ experimentó múltiples eventos de duplicación durante la expansión de las angiospermas y eventos de pérdida en monocotiledóneas de Alismatales. Además, realizamos estudios funcionales del único FT de tipo C1HDZ en la planta hepática modelo Marchantia polymorpha. Para ello, generamos plantas mutantes de pérdida de función en Marchantia y reporteros transcripcionales. En síntesis, demostramos que estas plantas cumplirían un rol en la defensa contra herbívoros mediante la regulación de la diferenciación de células de cuerpos oleosos mientras que no sería importante para las respuestas al estrés abiótico como se demostró previamente en angiospermas. Esto tiene implicancias en la historia evolutiva de esta subfamilia y el rol biológico de los cuerpos oleosos en hepáticas.

Trypanosoma cruzi es el parásito causante de la Enfermedad de Chagas, la cual continúa siendo una problemática de salud pública desatendida que merece una atención prioritaria no solo en nuestro país, sino a nivel mundial. A lo largo de su ciclo de vida, este patógeno utiliza una elaborada red enzimática para superar las barreras oxidativas y establecer la infección en el contexto del vector y del hospedador mamífero. La enzima tripanotión sintetasa (TryS), es clave ya que cataliza la biosíntesis de tripanotión (T[SH]2), el principal tiol utilizado por el sistema antioxidante de los tripanosomátidos. En este trabajo, mediante un abordaje de sobre-expresión e inhibición farmacológica, analizamos el rol de la enzima TryS en la biología de T. cruzi, evaluando su efecto sobre la proliferación, la tolerancia al estrés oxidativo y la resistencia a drogas anti-parasitarias. De acuerdo a nuestros resultados, los epimastigotes sobre-expresantes (TryShi) mostraron un menor tiempo de duplicación y mayor capacidad de metaciclogénesis. Además, tanto epimastigotes como tripomastigotes TryShi presentaron una mayor tolerancia a H2O2 y a las drogas tripanocidas utilizadas en la actualidad: benznidazol y nifurtimox. El tratamiento con inhibidores específicos de TryS, anuló estas ventajas de una manera dosis-dependiente. Por otro lado, el análisis de la interacción de los parásitos TryShi con macrófagos murinos in vitro, sugiere que la sobre-expresión de TryS tendría un efecto pro-inflamatorio y pro-apoptótico, que podría favorecer su escape temprano de la célula infectada. A través de este enfoque, se puso de manifiesto no sólo el carácter esencial de TryS para T. cruzi en condiciones normales y de estrés oxidativo, sino también que su expresión le confiere una ventaja en la resistencia frente a los fármacos utilizados para el tratamiento de la enfermedad. Postulamos que el uso de un inhibidor de esta enzima, solo o combinado con los tratamientos disponibles, podría ser una nueva estrategia terapéutica para combatir la Enfermedad de Chagas.

Las proteínas de la familia Aurora quinasa son un grupo de enzimas con gran relevancia en el proceso de división celular. Estas enzimas fueron descriptas en una gran variedad de organismos y han mostrado estar altamente conservadas en la evolución. El número de miembros de esta familia varía entre organismos y van desde uno en levaduras hasta tres en mamíferos. Entre los procesos donde están involucradas se destacan la maduración y división del centrosoma, condensación de la cromatina, ensamblado del huso mitótico, corrección de errores en la unión de los microtúbulos al cinetocoro e iniciación de la citocinesis. En este trabajo estudiamos tres Aurora quinasa (TcAUK1, -2 y -3) en Trypanosoma cruzi, determinando su organización génica y perfil de expresión a lo largo del ciclo de vida del parásito. También, se han iniciado los estudios funcionales de estas enzimas mediante experimentos de localización subcelular y sobreexpresión. De esta manera, se pudo determinar que las Aurora quinasa de T. cruzi están reguladas no tan solo a través de los niveles de proteína, sino también a través de su localización subcelular, y que la sobreexpresión de cada una de ellas conduce a alteraciones del ciclo celular y la curva de crecimiento. Palabras clave: Trypanosoma cruzi, Enfermedad de Chagas, Aurora quinasa, ciclo celular, citoquinesis.

El virus del Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causa la principal enfermedad del maíz en la Argentina. Este virus es capaz de replicar de manera persistente y no citopática en delfácidos (chicharritas) y en el floema de varias especies de gramíneas donde provoca síntomas severos y económicamente importantes. Nuestro trabajo anterior demostró que el MRCV es una especie viral independiente de las conocidas hasta el momento cuyo genoma está formado por 10 segmentos de RNA de doble cadena que codifican para 13 proteínas (PMRCVs) e identificó aquellas proteínas estructurales. Sin embargo, aún se desconoce la función de la mayoría de las proteínas virales (en particular de aquellas no estructurales) y los mecanismos moleculares que determinan el establecimiento y desarrollo de la infección. El objetivo general de esta Tesis fue estudiar, definir y caracterizar la función de distintas proteínas codificadas por el MRCV a nivel molecular en hospedantes vegetales. En particular se propuso identificar las proteínas virales implicadas en el movimiento intercelular del virus dentro de la planta, en la producción de los síntomas del MRCV en plantas (determinantes de patogenicidad) y la(s) posible(s) proteina(s) con actividad supresora del silenciamiento de RNA. Este trabajo de Tesis representa el primer avance en la caracterización a nivel molecular de la función de 10 las 13 PMRCVs (P4, P5-1, P5-2, P6, P7-1, P7-2, P8, P9-1, P9-2 y P10) en sistemas vegetales. Para identificar proteínas del MRCV responsables del movimiento viral en plantas, se ensayó la capacidad de las distintas proteínas en estudio de complementar el movimiento de un Potato virus X (PVX) mutante, defectivo en esta función en Nicotiana benthamiana (Nb). Mediante este sistema, no fue posible identificar proteínas de movimiento entre las codificadas por el MRCV. A continuación se analizaron las características de la infección de plantas de Nb con recombinantes de PVX portando distintas secuencias codificantes para las PMRCVs. Se encontró que la expresión temprana de la proteína no estructural P7-2 produce un drástico aumento en la severidad sintomática que no es acompañado por un aumento en la acumulación viral, mientras que la expresión de P7-1 a partir del mismo vector retrasa la infección viral y reduce la severidad sintomática. Por otra parte, la presencia de los secuencias codificantes para las proteínas P9-1 (mayoritaria del viroplasma) y P10 (mayoritaria de cápside externa) en el mismo vector viral impidió el establecimiento de la infección, sugieriendo que estas proteínas podrían desencadenar una respuesta de resistencia a la infección viral en Nb. Con el objetivo de identificar proteínas del MRCV con actividad supresora del silenciamiento del RNA se utilizó un sistema modelo que se basa en la inducción del silenciamiento en plantas transgénicas que expresan GFP mediante la agroinfiltración con una cepa capaz de expresar un inductor de silenciamiento (GFP o dsGFP). Ninguna de las proteínas del MRCV evaluadas logró interferir con el silenciamiento tanto local como sistémico en este sistema. Sin embargo, mediante el uso de este sistema modelo se logró demostrar que la expresión de las proteínas no estructurales P7-1 y P7-2 codificadas por el segmento 7 del MRCV da lugar a reducciones en la acumulación del mRNA de transgenes expresados de manera transitoria o estable en un proceso que probablemente sea de origen postranscripcional. Esta actividad no había sido descripta hasta el momento para otras proteínas virales y es muy novedosa e interesante, en particular cuando se considera que la proteína P7-2 no está presente en el virus Nilaparvata lugens reovirus (NLRV) que pertenece al mismo género que el MRCV pero que es incapaz de infectar plantas. En conjunto los resultados sugieren que las proteínas P7-1 y P7-2 podrían estar implicadas en la regulación de la expresión tanto de genes virales como del hospedante durante el desarrollo de la infección del MRCV. Finalmente, al estudiar la expresión transitoria de las PMRCVs en Nb se encontró que sus niveles de expresión son bajos y que la utilización de dicotiledóneas como sistemas modelo para el estudio funcional de estas proteínas podría no ser conveniente en ciertos casos. Al analizar comparativamente el uso de codones de las PMRCVs en Nb, maíz y Nilaparvata lugens (delfácido en el que replica el NLRV), no se encontraron diferecias en el uso de codones que pudieran explicar los bajos niveles de expresión en Nb. La información y herramientas biológicas aquí generadas constituyen un gran progreso en el estudio de la actividad de las proteínas coficadas por el MRCV lo cual contribuirá al diseño de futuras estrategias efectivas de control de esta enfermedad en plantas.