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Estudios sistemáticos y filogenéticos en Glandularia (Verbenaceae)

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Autores/as: Paola Fernanda Peralta ; Fernando Omar Zuloaga

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 2010 SEDICI: Repositorio Institucional de la UNLP (SNRD) acceso abierto

Cobertura temática: Ciencias naturales  

Se presenta el estudio sistemático y filogenético del género Glandularia J. F. Gmel. (Verbenaceae). Es un género exclusivamente americano de distribución disyunta: desde Estados Unidos de América hasta México en el hemisferio norte, mientras que en el hemisferio sur, se encuentra en el sur de Ecuador, Perú, Bolivia, Chile, Argentina, Paraguay, sur de Brasil y Uruguay. Para el estudio filogenético se estudiaron, además especies de los géneros relacionados: Junellia y Verbena. El análisis cladístico se basó en caracteres morfológicos, el cual permitió concluir que el género Glandularia no es un grupo monofilético y por lo tanto se sugiere la necesidad de realizar modificaciones taxonómicas y nomenclaturales para reflejar la historia evolutiva en la sistemática del grupo. De este modo se circunscribe Glandularia sensu stricto al subgénero Glandularia y se excluye a las especies que conforman el subgénero Paraglandularia. Consecuentemente las especies del subgénero Paraglandularia pasan al género Junellia, probablemente al subgénero Thryothamnus. Glandularia sensu stricto está mas estrechamente relacionada con Verbena que con el género Junellia y los caracteres que la definen Glandularia sensu stricto son el número básico de cromosomas y la inflorescencia frondosa. Se realizaron mapas de distribución para todos los taxones estudiados. Fitogeográficamente en América del Norte abarca la Región Atlántica Norteamericana y la Región Madrean, mientras que en América del Sur comprende los Dominios Amazónico, Chaqueño y Andino-patagónico y en menor grado en el Dominio Subantártico. Se describieron los caracteres morfológicos vegetativos y reproductivos que caracterizan al género, como hábito, tallo, hojas, inflorescencias, bráctea, flor, androceo, gineceo y fruto. Además se brinda, para algunas especies, el número cromosómico. Se delimitaron las especies y se esclarecieron los problemas nomenclaturales y de tipificación. Se describió una especie y una nueva variedad. Se realizaron 27 nuevas combinaciones, 18 lectotipificaciones, 4 neotipificaciones y 34 nombres fueron considerados como nuevos sinónimos. Se describieron cada una de los taxones en estudio, además se presentan ilustraciones y fotografías. Se confeccionó una clave basada en las relaciones del análisis filogenético utilizando, en principio, las sinapomorfías que definen los grupos, pero además, en la medida de lo posible, otros caracteres vegetativos, ya que los mismos demostraron ser relevantes a nivel taxonómico.

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Estudios sobre el efecto de hipoxia en enfermedades neovasculares y neurodegenerativas retinales: mecanismos de autofagia y su reacción con la muerte neuronal

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Autores/as: Paula Virginia Subirada Caldarone ; María Cecilia Sánchez ; María Ana Contin ; Pablo Iribarren ; Claudio Federico Kaiser ; Nora Patricia Rotstein

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No requiere 2020 Repositorio Digital Universitario (SNRD) acceso abierto

Cobertura temática: Medicina clínica  

Tesis (Dra. En Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020.

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Estudios sobre el eje hipófiso-tímico y sus cambios durante el envejecimiento

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Autores/as: Oscar Alfredo Brown ; Rodolfo Gustavo Goya

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 1997 SEDICI: Repositorio Institucional de la UNLP (SNRD) acceso abierto

Cobertura temática: Ciencias biológicas  

Se propuso estudiar el efecto del envejecimiento sobre los ejes timo-hipofísarios: el tímico-tirotrófico, el tímico-gonadotrófico y el tímico-somatomamotrófico. - Comparar las respuestas secretorias tirotropa, gonadotropa, somatotropa y prolactotropa en células pituitarias dispersas de ratas jóvenes y viejas cuando se perifunden con: a) diferentes dosis de histonas, y nucleoproteínas b) los péptidos tímicos sintéticos MB-35 y timulina así como otros productos secretorios provenientes de distintas líneas de células epiteliales tímicas (TEC) las cuales se hallan bien establecidas en el laboratorio francés que participa en este proyecto. - Evaluar a) la capacidad de distintas dosis de los productos tímicos e histonas arriba mencionados para inducir la liberación de prolactina (PRL), hormona de crecimiento (GH), hormona luteinizante (LH), hormona folículoestimulante (FSH) y tirotrofína (TSH) en células hipofisarias de ratas jóvenes y senescentes incubadas durante distintos tiempos con los productos arriba mencionados, b) la posibilidad de bloquear la actividad de la timulina y de la histona H3 con anticuerpos específicos generados contra éstas sustancias, c) las interacciones entre timulina e histonas con secretagogos específicos de las hormonas hipofisarias mencionadas, hormona liberadora de tirotrofína (TRH), hormona liberadora de hormona de crecimiento (GHRH), hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH), péptido liberador de hormona de crecimiento-6 (GHRP-6), d) que posibles segundos mensajeros (AMPc, calcio, diacilglicerol o inositoltrifosfato) estarían involucrados en la acción de éstas sustancias. - Evaluar a) las posibles diferencias entre los niveles de DNA sérico entre ratas jóvenes y senescentes y b) si las histonas y el DNA pueden actuar cómo secretagogos de las hormonas hipofisarias in vivo utilizando cómo sistema experimental el de ratas canutadas conscientes y libres de estrés.

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Estudios sobre el espectro de los nucleones excitados usando la expansión en 1/Nc de la cromodinámica cuántica

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Autores/as: Cintia Teresita Willemyns ; Carlos Schat ; Rodolfo Sassot

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No requiere 2017 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto
En el presente trabajo se investigan los estados excitados de bariones no extraños en el marco de la expansión en la inversa del número de colores (Nc) de la Cromodinámica Cuántica (QCD). En particular, se busca obtener una mejor comprensión teórica de la fenomenología de los bariones excitados de manera independiente de modelos particulares y también conectar el análisis que se obtiene en términos de operadores efectivos en la expansión 1/Nc con una imagen dinámica que explique los valores de los coeficientes de la expansión. También se trabaja en la dirección de extender el análisis que usa la expansión en 1/Nc al caso en el que tenemos mezcla de configuraciones de spin-sabor. Para alcanzar estos objetivos se estudia el espectro de masas de los bariones excitados de paridad negativa realizando la conexión (matching) entre una extensa clase de modelos de quarks no relativistas, con interacciones efectivas entre quarks tanto dependientes como independientes del sabor, y la base de operadores de spin-sabor que se utiliza habitualmente en la expansión 1/Nc. Los resultados obtenidos son expresiones analíticas para los coeficientes libres que acompañan a cada uno de los operadores que aparecen a un cierto orden en potencias de 1/Nc. Estos coeficientes se expresan en función de integrales radiales que dependen de la forma y la magnitud relativa de las interacciones tensorial, spin-spin y spin-órbita del modelo y que se dejan sin especificar para mantener la generalidad de las expresiones. A partir de este matching se obtienen relaciones nuevas entre las masas bariónicas y los ángulos de mezcla. Estas relaciones son independientes de los parámetros y permiten discriminar entre distintas estructuras de spin-sabor de las interacciones quark-quark. Se analiza cómo esta parametrización general de las matrices de masa depende de los ángulos de mezcla y qué restricciones se imponen al considerar las suposiciones recién mencionadas sobre la interacción efectiva entre quarks. Los resultados hallados indican que, dentro de las incertezas experimentales, los valores para los ángulos de mezcla determinados por un reciente ajuste global a las masas y a los decaimientos no excluyen ninguna de las dos posibilidades más extremas para la dependencia o independencia del sabor de la interacción entre quarks originada por el intercambio de un mesón o gluón respectivamente. Por otro lado, se realiza un análisis del espectro de masas de los bariones excitados de paridad positiva utilizando la base de operadores de spin-sabor de la expansión 1/Nc. Se analiza por primera vez el espectro incluyendo la mezcla de configuraciones. En el límite de Nc grande los bariones excitados sin extrañeza se agrupan en representaciones irreducibles de la simetría contraída SU(4)c. Por medio del cálculo explícito del espectro de masas encontramos que esta estructura se conserva. El estudio de los autoestados demuestra que las mezclas son más sencillas de lo que se esperaría en un modelo de quarks y está de acuerdo con la simetría que se espera el límite del número de colores grande.

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Estudios sobre el mecanismo de <daño celular hepático> producido por el <tetracloruro de carbono>

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Autores/as: Adriana Silvina Bernacchi ; José Alberto Castro

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 1982 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto
Fil:Bernacchi, Adriana Silvina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

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Estudios sobre el mecanismo de las alteraciones producidas en la glucólisis y la glucogenolisis en el miocardio de ratas intoxicadas con fluoroacetato

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Autores/as: Héctor Manuel Godoy ; José A. Castro

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 1975 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto
Fil:Godoy, Héctor Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

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Estudios sobre el mecanismo de retroalimentación positivo ejercido por los esteroides sexuales sobre la secreción de gonadotrofinas en la rata: Influencia de la glándula pineal, sistema serotoninérgico, péptidos opioides endógenos y estados de hiperprola

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Autores/as: María Rosa Faigón ; Jaime A. Moguilevsky

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 1988 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto
El desarrollo del control cíclico ejercido por el hipotálamo sobre la secreción de GR hipofisarias (LH y FSH) es consecuencia, en el caso de la rata hembra, de la falta de andrógenos circulantes durante los primeros días de vida postnatal. Este control muestra como caracteristica fundamental al mecanismo de retroalimentación positivo ejercido por los esteroides gonadales sobre la secreción gonadotrófica, responsable de la ovulación y la conservación de los ciclos sexuales. Los resultados presentados en este trabajo de Tesis se pueden resumir de la siguiente manera: 1) la administración de estradiol ya sea solo o combinado con progesterona induce una liberación de LH en ratas hembra a partir de los 22 dias de edad, indicando que en este momento completan su desarrollo las estructuras nerviosas involucradas en el mecanismo positivo esteroideo sobre la secreción de GR. Estudiando el efecto producido por la administración de estradiol sobre la incorporación de aminoácidos a proteinas en distintas áreas del hipotálamo de ratas hembra prepúberes, observamos que la hormona indujo un aumento significativo sobre dicho pa- rámetro en el área anterior del hipotálamo a partir de los 15 días de edad. Dada la naturaleza peptídica del factor liberador de LH y FSH, se puede inferir que el estradiol estaria estimulando su síntesis. Este hecho seria un reflejo del desarrollo del mecanis- mo de retroalimentación positivo ejercido por el estradiol sobre áreas rostrales del hipotálamo de la hembra, donde promovería la síntesis de LRH. 2) la administración de melatonina, principal hormona secretada por la glándula pinea1,a ratas hembra adultas, ejerció un efecto bifásico dosis-dependiente sobre la secreción de LH inducida por E2-P, siendo la dosis más baja estimulante y la más alta inhibitoria. También observamos que la ablación pineal en hembras prepúberes provocó un adelanto significativo en la madurez del mecanismo de retroalimentación positivo esteroideo. Por el contrario, la administración de melatonina tuvo un efecto inhibitorio sobre el mismo. Esto último indica que la glándula pineal estaría inhibiendo la madurez de los mecanismos nerviosos involucrados en la descarga ovulatoría de LH y por lo tanto el desarrollo puberal de la hembra, probablemente a través de la secreción de melatonina. 3) el estímulo de la vía serotoninérgica mediante 1a administración del precursor de la serotonina, 5-hidroxitriptofano y su inhibición, mediante el uso de la neurotoxina serotoninérgica paracloroanfetamina, mostraron que existen diferencias sexuales en el efecto producido por el sistema serotoninérgico sobre la secreción de LH en ratas tanto prepúberes como adultas. La administración de 5-HTP estimuló la liberación basal de LH en ratas hembra prepú- beres menores de 26 días de edad. La administración de PCA poten- ció la liberación de LH en respuesta a LRHen hembras adultas. Ninguno de estos efectos fueron observados en ratas macho. Por otro lado, observamos un efecto inhibitorio del precursor serotoni- nérgico en situaciones de gran incremento de la liberación de LH, como luego de la ovariectomia o la administración de esteroides sexuales. Aparentemente este efecto es ejercido, al menos en parte, a nivel hipofisario, dado que la destrucción de la via serotoninérgica por administración de PCA potenció 1a liberación de LH en respuesta a LRH. Sobre esta base, se puede postular que la serotonina posee, en la rata hembra, un rol inhibitorio sobre la secreción de LH. Observamos que la inhibición del desarrollo del control cíclico en la rata hembra, anuló el efecto ejercido por el precursor serotoninérgico en este sexo. Este hecho permite su poner que tal desarrollo involucra a la vez, la aparición de un control de este mecanismopor parte de la serotonina. 4) con el objeto de determinar el efecto ejercido por los péptidos opioides endógenos sobre la madurez del mecanismode retroalimentación positivo esteroideo sobre 1a secreción de LH, utilizamos un antagonista de receptores opioides, la Naloxona. Observamos que esa droga elevó significativamente los niveles basales de LH en ratas hembra de distintas edades dentro de la etapa prepubgral (14, 20 y 25 dias). La administración de E2-P bloqueó la liberación de LH por acción de la Naloxona a los 14 dias de edad, indicando que el efecto de retroalimentación negativo no seria dependiente de la mediación opioide, tal como fuera propuesto por otros grupos. Por otro lado, la administración de Naloxona indujo una aparición precoz del efecto positivo ejercido por los estgroides sexuales sobre la secreción de LH y potenció la liberación de esta hormona por acción de E2-P una vez que dicho mecanismo hubo madurado. Ambosb hechos muestran la probable existencia de un efecto inhibitorio ejercido por los péptidos opioides endógenos sobre el mecanismo central ovulatorio, que podria estar conectado con la acción regulatoria de estos péptidos sobre el inicio puberal de la rata hembra, sugerida por otros trabajos. Nuestros datos también muestran que la liberación de LH en respuesta a Naloxona fue disminuyendo entre los 14 y los 25 dias de edad. Esta reducción representa probablemente, una disminución del tono inhibtorio opioide sobre la secreción de LH que podria estar conectada con la madurez del mecanismode retroalimentación positivo de los esteroides sexuales sobre la secreción de GR. 5) la hiperprolactinemia inducida por administración de Sulpirida, antagonista de receptores dopaminérgicos, no modificó ni la se creción basal de LH en la rata hembra prepúber ni la edad en la que normalmente se desarrolla el mecanismo positivo esteroideo. Sobre esta base, es probable que la alteración en el inicio puberal provocada por niveles altos de prolactina no esté conectada con modificaciones en el desarrollo de los centros hipotalámicos involucrados en dicho mecanismo. Los estudios realizados en ratas hembra adultas, para determinar el efecto de niveles elevados de prolactina circulantes sobre el mecanismo positivo esteroideo, indican que la hiperprolactinemia por Sulpirida no modificó la li- beración de LH por acción de estradiol y progesterona. Por lo tanto, estas observaciones sostienen el punto de vista de que el eje hipotálamo-hipofisario no seria en principio el responsable de las alteraciones en el mecanismo de retroalimentación positivo observadas en estados de hiperprolactinemia en la rata hembra. No puede descartarse a partir de estos experimentos, que sea una secreción ovárica anormal inducida por los altos niveles de prolactina, la que afecte los mecanismos hipotalámicos involucrados en la liberación de LH por acción de los esteroides sexuales.

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Estudios sobre el metabolismo, la estructura y el mecanismo de síntesis del glucógeno de alto peso molecular

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Autores/as: Armando José Parodi ; Luis Federico Leloir

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Institución detectada Año de publicación Navegá Descargá Solicitá
No requiere 1970 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto
A) PRIMERA PARTE Influencia sobre la distribución de pesos moleculares del gno hepático de factores que modican el contenido total de gno Se estudia la posible influencia que pudiesen tener en la distribución de pesos moleculares del gno particulado hepático de ratones, distintos factores que modifican el contenido total de gno. Como agentes glucogenolíticos se estudian: ayuno, isquemia, inyección de epinefrina, glucagón e insulina. Se encuentra que si bien estos agentes disminuyen el contenido de gno, el P.M. de éste sufre solo una muy ligera disminución. Como agentes glucogenogénicos se estudian: administración de glucosa e hidrocortisona. En el primer caso la distribución de P.M. no experimentó prácticamente ninguna variación con grandes aumentos en el contenido de gno. Lo que realmente aumentó es el número de moléculas y no el P.M. de éstas. En el segundo caso (hídrocortisona), se comprueba que el gnosintetizado gluconeogénicamente por influencia de esta hormona no difiere en cuanto a su P.M. del de un animal con alimentación normal y no inyectado con hidrocortisona. Tampoco influye en el P.M. del gno particulado la administración de hormona de crecimiento bovina ni de distintos monosacáridos (glucosa, fructosa o galactosa) como precursores del polisacárido. Se discuten estos resultados teniendo en cuenta tanto las propiedades de las enzimas que se suponen actúan "in vivo" en la síntesis y degradación el gno así también como la localización de éste en el hepatocito y en el lobulillo hepático. B) SEGUNDA PARTE Estudios sobre la estructura del gno particulado Mordoh et al (63) postularon la existencia en el gno particulado hepático de uniones más lábiles al ácido, álcali, calor, etc. que las glucosídicas comunes α1-4 y α1-6 y que uniría particulas de P.M. 8 millones (Coeficiente de Sedimentación (S) = 100). Dicha unión estaría ausente en el gno sintetizado "in vitro" por los mismos autores (65) a partir de G-1-P, usando como enzimas a la fosforilasa b de músculo cristalino y la ramificante de hígado parcialmente purificada (gno-G-1-P). No sólo la velocidad sino también el mecanismo de ruptura acídica resultó distinto ya que el nativo se rompía dando preferentemente moléculas de S=100 mientras que el gno-G-1-P se rompía por mitades. En este trabajo se estudia la posible naturaleza de esta "unión lábil" del gno nativo. Se encuentra que la ruptura del gno nativo y la del gno-G-1-P son afectadas de igual manera por distintos buffers. También la curva de estabilidad versus pH es similar para ambas muestras. Las velocidades de ruptura de los dos gnos son afectadas de igual manera por distintos cationes. Se estudia la velocidad de ruptura en ClH 0,l N a distintas temperaturas y se determina la energía de activación para la ruptura de los gnos nativo y gno-G-1-P en dichas condiciones. Se comprueba que los mecanismos de degradación de los dos gnos en diferentes condiciones (NaOH 0,l N a 100° C; Tetraborato de Sodio 0,l M pH 9,0 100° C; NaOH 0,l N-Urea 8 M l00° C) son similares a sus respectivos mecanismos de ruptura acídica descriptos por Mordoh et al (63). El mecanismo de ruptura por sonicación en cambio, es el mismo para ambas muestras. Se comprueba que las uniones rotas por las ondas sónicas son distintas a las que afecta la católisis ácida o básica. Se mide la estructura "primaria" (% de ramificación, longitud de ramas externas) del gno particulado hepático y del gno-G-1-P y se observa que son iguales. Se encuentra también que las dextrinas de β-amilasa del gno nativo son mucho más estables al ácido que muestras de gno de igual P.M. pero el mecanismo de ruptura es similar para ambos. Se extrae gno de hígado de aves y anfibios y se comprueba que es particulado y que posee la "unión lábil" inicialmente descripta para el hígado de rata. El gno de músculo esquelético de rata en cambio resulta no ser particulado. Se observan a los gnos nativo y gno-G-1-P al microscopio electrónico y se ve que en el segundo las subpartículas están más juntas y peor definidas que en el primero. Se consigue sintetizar “in vitro" gno particulado usando su precursor natural (UDPG) y las enzimas glucógeno sintetasa y ramificantes ambas hepáticas y parcialmente purificadas. Este glucógeno (gno-UDPG) presenta una labilidad al ácido y al álcali igual a la del nativo de hígado y distinta a la del gno-G-1-P. Los mecanismos de rutura ácida y alcalina del gno-UDPG y del nativo hepático son también similares. Por distintos experimentos se descartan las posibilidades de que el gno-UDPG sea un agregado formado por enredamiento de las moléculas mientras estas crecen o por interacción entre las proteínas de la mezcla de incubación y las partículas de gno. Se discuten los resultados obtenidos y se concluye que la "unión lábil" del gno nativo es una unión glucosídica común α1-4 o α1-6 cuya labilidad está aumentada en el gno nativo por factores estéricos. C) TERCERA PARTE Estudios sobre el mecanismo de síntesis "in vitro" de gno particulado En el curso de los experimentos descriptos en la segunda parte se encontró que el gno-UDPG posee un P.M. muy superior al del gno-G-1-P si ambas muestras son sintetizadas en iguales condiciones. Se estudian las posibles causas de este hecho. Se encuentra que cuando se sintetiza gno-G-1-P con gno-KOH radiactivo como primer, existe un desplazamiento entre las curvas de gno y de radiactividad. Además el P.M. del gno-G-1-P resultó ser menor al que se puede predecir teóricamente para poblaciones monodispersas. Estos resultados se pueden explicar admitiendo una transferencia preferencial de glucosa a las moléculas de gno de menor P.M. Esto está de acuerdo con mediciones de la Km de la fosforilasa b para el gno. Diversos autores han encontrado que el Km de la fosforilasa es menor para un gno liviano que para uno pesado. El P.M. del gno-UDPG resultó ser mucho mayor que el predicho teóricamente para poblaciones monodispersas. Si se lo sintetiza con gno-KOH radiactivo como primer, se encuentra que la mayoría del primer queda con su P.M. sin modificar, es decir no utilizado por la sintetasa. Por varios experimentos se determinó que la pequeña parte de primer utilizada es crecida sin que haya transferencia preferencial de glucosa por parte de la gno sintetasa hacia moléculas de gno de distinto P.M. No se consigue explicar el porqué la gno sintetasa no utiliza a todo el primer. Se descarta la posibilidad de que esto se deba a una unión muy fuerte entre la enzima y ciertas moléculas de primer o a la presencia de trazas de α-amilasa en las mezclas de incubación, de manera que las moléculas de gno por ella atacadas no fuesen capaces de aceptar glucosas del UDPG. La distinta especificidad de las dos enzimas transferentes respecto al P.M. del gno y la no utilización total del primer por parte de la sintetasa podrían explicar bien la diferencia de P.M. del gno-UDPG y del gno-G-1-P sintetizados en iguales condiciones. Sin embargo la existencia de una agregación específica entre las moléculas de gno-UDPG durante la síntesis es una hipótesis muy probable de ser real. No se encontró ninguna relación entre el P.M. final del gno-UDPG y la cantidad de primer utilizado por la sintetasa. Los experimentos que más apoyan esta idea de una agregación específica son aquellos en los cuales se estudió el cambio en la distribución de P.M. del gno-UDPG y del gno-G-1-P durante la síntesis. Se encontró que en el primer caso de una población inicial liviana, se obtiene luego de un tiempo de síntesis dos poblaciones, una liviana y otra mucho más pesada. Existen ciertas evidencias que indicarían que la población pesada se forma por agregación de las moléculas livianas. En el segundo caso, esto es en la síntesis de gno-G-1-P se observa durante todo el transcurso de la síntesis una sola población que se va haciendo más pesada a medida que transcurre el tiempo de incubación. De acuerdo a los resultados encontrados en la segunda parte de la tesis, el gno de músculo de rata no es particulado sino que es mucho más liviano que el de hígado. Se consiguió sintetizar gno-UDPG por la gno sintetasa de músculo. El P.M. de este gno sintético resultó ser solo levemente mayor que el del nativo de músculo. No se observó ningún cambio apreciable en la actividad enzimática cuando se guardó a la preparación de gno sintetasa muscular a -20° C, durante varias semanas. Sin embargo la enzima envejecida resultó ser capaz de sintetizar gno de alto P.M. Este gno-UDPG pesado resultó ser indistinguible del gno-UDPG sintetizado por la gno sintetasa hepática o del gno nativo de hìgado a juzgar por la distribución de P.M. y por la acción del ClH 0,1 N a temperatura ambiente. Se encontró que la gno sintetasa muscular fresca utiliza a todo el primer mientras que la envejecida no lo hace. Esta última se parece a este respecto a la gno sintetasa hepática. Se encontró que la presencia de Sulfato de Amonio 0.25 - 0,35 M en las mezclas de síntesis de gno por la gno sintetasa muscular envejecida inhibe la formación de gno de alto P.M. pero no la síntesis total de gno. Esta inhibición de la particulación no se debe a una mayor utilización del primer por la sintetasa envejecida. Sorprendentemente, la enzima fresca en presencia de sulfato de amonio sintetiza un gno aún más liviano que en su ausencia, a pesar de que con la sal no utiliza todo el primer lo que sí hace sin ella. El efecto del sulfato de amonio sobre P.M. del gno-UDPG sintetizado por la gno sintetasa hepática es mucho menor que sobre el gno sintetizado por su similar muscular envejecida. Los cambios en la distribución de P.M. durante la síntesis de gno-UDPG por la gno sintetasa muscular envejecida, en presencia o ausencia de sulfato de amonio se parecen a los ya observados en el caso de la fosforilasa y la sintetasa hepática respectivamente. Se discuten los resultados obtenidos y se sugiere que la gno sintetasa muscular fresca represente más fielmente lo que realmente ocurre "in vivo", donde la hipotética agregación de las moléculas de gno estaría ausente.

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Estudios sobre el pardeamiento no enzimático en manzana deshidratada

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Autores/as: Silvia Liliana Resnik ; Jorge Chirife

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Fil:Resnik, Silvia Liliana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

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Estudios sobre el proceso de regulación reductiva de la Fructosa-1,6-Bisfostasa cloroplastídica de colza (Brassica napus)

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Autores/as: Roberto J. Rodriguez Suarez ; Ricardo Alejandro Wolosiuk

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En las plantas, la Fructosa-1,6-Bisfosfatasa de cloroplastos (CFBPase) cataliza la defosforilación irreversible de la fructosa-1,6-fosfato en el ciclo de Benson-Calvin. La CFBPase es una enzima clave en la regulación de la asimilación del C02 y su actividad específica es fuertemente regulada por luz, a traves de una cascada reductiva via Tiorredoxina. Los principales objetivos fueron: i) obtener una CFBPase recombinante útil como modelo de la contraparte cloroplastídica, ii) empleando mutagénesis sitio-dirigida, caracterizar el rol de las cist(e)inas en su estabilidad estructural, modulación y actividad catalítica, iii) analizar la multiplicidad de loci para la CFBPase en el alotetraploide B.napus y en sus parentales diploides B.campestris y B.oleracea. Construímos una cDNA library de expresión de hojas de colza y obtuvimos varios clones codificando la CFBPase. Luego expresamos y purificamos de E.coli la proteína recombinante, que mostró alta actividad enzimática. Su caracterización estructural y funcional estableció que es virtualmente idéntica a la contraparte cloroplastídica. Preparamos varias mutantes sitio-dirigidas por reemplazo de cisteínas diferencialmente afectadas en sus propiedades regulatorias, algunas de las cuales resultaron parcial o constitutivamente activadas. Determinamos que la Cys157 es crítica y que las Cysl74 y 179 también son participantes de la modulación reductiva. Proponemos un mecanismo que involucra tres residuos Cys, y donde se requiere la formación de diferentes disulfuros en las distintas subunidades del homotetrámero. La actividad catalítica no disminuyó por el reemplazo de ninguna de las siete Cys de la enzima. También encontramos que existen al menos dos loci por complemento haploide para la CFBPase en B.napus y en sus parentales B.oleracea y B.campestris. Ambos loci se expresan en hojas verdes y las enzimas recombinantes poseen actividades muy similares. En conjunto, estos análisis podrían tener un elevado impacto en los estudios orientados a manipular la velocidad de asimilación de C02 y la partición "fuente/sumidero” del fotosintato en una especie económicamente importante como la colza.